세포 역학을 결정하기 위한 Time-Lapse Imaging을 위한 마우스 뇌 절편 준비

먼저, 적절한 플라스미드를 투여한 안락사된 마우스를 얻는다. 배양 접시 준비를 위해 유리 기반 접시에 배양 배지 1.9mL를 넣고 세포 배양 삽입물을 조심스럽게 올려 놓습니다. 그런 다음 필터에 500마이크로리터의 배양 배지를 넣고 얼음 위에 놓습니다.

배아를 제거하고 얼음처럼 차가운 PBS가 들어 있는 페트리 접시에 넣습니다. 현미경 아래에서 녹색 형광 단백질 또는 기타 형광 마커의 발현에 따라 배아를 선택합니다. 뇌를 해부 한 후 냉동 틀에서 채취 한 용융 아가로스 젤에 넣고 여러 번 굴립니다.

아가로스가 실온에서 응고되면 얼음 위에 놓습니다. 진동하는 마이크로톰을 사용하여 뇌를 350마이크로미터 두께로 관상동맥으로 자르고 필터에 배열합니다. 그런 다음 필터 컵 내부와 외부에서 600마이크로리터의 배양 배지를 제거합니다.

5분 후 100마이크로리터의 신선한 배양액을 세포 배양 삽입물 내부에 추가합니다. 타임랩스 이미징의 경우 긴 작동 거리의 20X 렌즈를 사용하여 약 10Z 스택 이미지를 획득합니다. 쥐 뇌의 타임랩스 이미지를 분석한 결과, EGFP 양성 이동 세포와 RFP 양성 이동 세포의 궤적이 2시간에서 21시간까지 제공되었습니다.