형질주입된 HEK293 세포의 세포 용해 및 면역침전을 위한 단백질 시료 전처리

HEK 293 세포의 transfection 후 약 48시간 후에 얼음처럼 차가운 PBS로 세포를 3회 세척합니다. 프로테아제 억제제가 함유된 단백질 용해 완충액 500마이크로리터를 접시에 추가합니다. 세포 스크레이퍼를 사용하여 세포를 채취하고 얼음에 단백질 흡수가 적은 튜브에 추가합니다.

5분마다 튜브를 소용돌이치게 하고 10분 동안 얼음 위에서 배양을 계속합니다. 16, 400G에서 샘플을 섭씨 4도에서 10분 동안 원심분리합니다. 상층액을 모아 단백질 흡수가 적은 신선한 1.5밀리리터 튜브로 옮깁니다.

단백질 농도를 결정한 후에, 신선한 관에 있는 단백질의 200에서 1 의 000 마이크로그램을 분리하십시오. 단백질 용해 완충액을 500와 1 사이의 최종 부피, 000 마이크로리터를 조정하도록 추가하십시오.