유세포 분석을 시작하려면 먼저 암시야 측정을 위해 785나노미터 레이저를 5밀리와트의 전력으로 설정합니다. 개구수가 0.9인 60X 렌즈를 사용하십시오. 그런 다음 고감도 설정을 선택하고 속도를 낮게 설정합니다.
캘리브레이션 비드 안정성을 보장하려면 유체 상자에서 Play 버튼을 누르고 선명하고 선명하게 보여야 하는 비드 이미지를 검사합니다. 새 산점도(New Scatterplot)를 선택하여 작업 공간 상자에 새 산점도를 생성합니다. 그런 다음 Brightfield 채널에서 SSC 채널 강도에 해당하는 영역을 선택하고 샘플 내에서 동시에 실행되는 보정 비드를 제외합니다.
그런 다음 Load 버튼을 누르고 Lactobacilli 샘플이 들어있는 튜브를 홀더에 넣습니다. Acquisition Settings(수집 설정) 상자에 샘플 이름을 입력하고 데이터 저장 위치를 지정합니다. 일반적으로 10, 000에서 20, 000 이벤트 범위 내에서 수집할 이벤트 수를 설정합니다.
이제 Acquisition 상자에 있는 Record 버튼을 클릭하여 Acquisition 프로세스를 시작합니다. 프로세스는 지정된 이벤트 볼륨에 도달한 후 중단됩니다. Return 버튼을 눌러 튜브를 언로드하고 팝업 창의 지시에 따라 홀더에서 제거합니다.
모든 샘플에 대해 이 과정을 반복한 후 데이터 수집 균일성을 유지하기 위해 템플릿을 저장합니다. 데이터 분석의 경우 원시 파일을 분석 소프트웨어에 로드하려면 파일을 클릭하고 RIF 파일을 엽니다. 열린 창에서 Use Acquisition Analysis를 선택한 다음 OK를 클릭합니다. 다음으로, 그래디언트 평균 제곱근의 히스토그램을 만들려면 새 히스토그램 버튼을 클릭하고 분석할 수집의 모집단을 선택합니다.
X Axis feature(X 축 기능)에서 Brightfield channel(명시야 채널)의 Gradient RMS를 선택합니다. 다음으로, 분석 영역에서 Create Line Region 버튼을 클릭하여 초점이 맞지 않는 이벤트를 제외하는 게이트를 배치합니다. 분석 영역에서 New Scatterplot 버튼을 클릭하여 면적 대 종횡비의 산점도를 생성합니다.
새 산점도 창에서 집중된 모집단을 선택합니다. 그런 다음 X축 기능에 대한 명시야 채널 영역을 선택합니다. Y-축 피처의 종횡비를 선택합니다.
집계 이벤트 모집단의 area 값을 기반으로 Create Rectangle 버튼을 사용하여 산점도에 게이트를 그립니다. 마찬가지로, singles 및 small aggregates 모집단에 대한 또 다른 게이트를 그립니다. 파일 탭을 클릭하고 템플릿 ast로 저장을 선택하여 데이터 분석을 템플릿으로 저장한 다음 동일한 템플릿 아래의 다음 샘플 파일을 열어 데이터 분석 파일을 만듭니다.
집계 크기 분포를 측정하려면 먼저 집계 이벤트 모집단의 영역에 대한 히스토그램을 그립니다. 파일을 클릭하고 Save As Template(템플릿으로 저장) 옵션을 선택하여 데이터 분석을 저장합니다. 저장한 후 데이터 분석 파일에 대한 동일한 템플릿 아래의 다음 샘플 파일을 엽니다.
LGG와 L.paracasei에서 단일세포, 작은 응집체, 큰 응집체 및 사슬이 관찰되었으나 사슬과 큰 응집체를 구별할 수 없었다. 발효성 또는 비발효성 설탕에 대한 반응에서 다양한 LAB 균주의 응집 특성에서 상당한 변화가 관찰되었습니다.
