시작하려면 Biochips 모델 BC002를 유리 페트리 접시에 넣고 모든 구멍을 멸균 70% 에탄올로 45분 동안 세척합니다. 그런 다음 멸균 이중 증류수로 충치를 두 번 씻어냅니다. 파란색 팁이 있는 1, 000마이크로리터 피펫을 사용하여 상부 캐비티의 바이오칩 멤브레인을 멸균 콜라겐 IV 용액으로 코팅합니다.
섭씨 30도, 이산화탄소 5%에서 37분 동안 칩을 배양합니다. 배양 후 마그네슘과 칼슘이 함유된 멸균 PBS로 하부 챔버와 상부 챔버를 두 번 세척합니다. 각 캐비티의 상부 챔버를 페니실린 스트렙토마이신이 함유된 250마이크로리터의 내피 세포 또는 EC 배지로 채우고 하부 챔버를 150마이크로리터로 채웁니다.
마그네슘 및 칼슘 PBS가 없는 5밀리리터의 DPBS가 있는 T25 플라스크에서 합류 인간 제대 정맥 내피 세포 배양액을 세척합니다. PBS에 0.25 트립신 1밀리리터와 1밀리몰 EDTA를 추가합니다. 그리고 섭씨 37도에서 3분 동안 배양합니다.
배양 후 5ml의 PBS와 5%FCS를 첨가하여 트립신 활성을 중지합니다. 50밀리리터 원뿔형 튜브에서 350G에서 5분 동안 현탁액을 원심분리합니다. 그리고 펠릿을 1밀리리터의 EC 매체에 다시 현탁시킵니다.
10 마이크로리터의 트리판 블루 염색이 들어있는 마이크로 원심분리 튜브에 10 마이크로리터의 1-10 희석된 세포 현탁액을 추가합니다. Neubauer 챔버를 사용하여 수동으로 세포 수를 계산합니다. 계수 후 바이오칩의 상부 챔버에 있는 내피 세포 배지를 0.4 x 10의 6제곱에 6개의 인간 제대 정맥 내피 세포 배양을 포함하는 200마이크로리터의 EC 배지로 교체합니다.
바이오칩이 있는 유리 페트리 접시를 섭씨 37도, 이산화탄소 5%에 놓습니다. 상부 챔버의 경우 300마이크로리터의 EC 매체, 하부 챔버의 경우 200마이크로리터의 RPMI+매체로 매일 매체 교환을 수행합니다. PBS 1ml로 단핵구를 세척한 후 리도카인과 EDTA를 섭씨 37도에서 5% 이산화탄소로 함유한 미리 데워진 PBS에서 7분 동안 배양합니다.
350G에서 7분 동안 세포를 수집하고 원심분리합니다. RPMI 1밀리리터에서 다시 일시 중단한 후 +앞에서 설명한 대로 셀을 계산합니다. 0.1 곱하기 10을 하부 챔버의 200 마이크로 리터의 RPMI +에 부유 한 6 개의 단핵구의 거듭 제곱으로 종자합니다.
세포가 멤브레인에 부착되도록 바이오칩 포트를 아래쪽으로 배치합니다.
