iPSC 유래 혈액 세포에서 핵 분리를 위한 Enriched Live Cell Suspension의 제조

먼저 액체 질소에서 세포가 들어 있는 크라이오 바이알을 꺼내 섭씨 37도의 수조에서 2분 동안 해동합니다. 해동된 세포를 15밀리리터 튜브에 옮긴 후 예열된 매체 10밀리리터를 점차적으로 추가하고 튜브를 원심분리합니다. 상층액을 버리고 FBS와 염화칼슘을 함유한 보충된 DPBS 1밀리리터에 세포를 현탁시킵니다.

다음으로, 세포 현탁액 1mL를 죽은 세포 제거 칵테일 및 비오틴 선택 칵테일 각각 50마이크로리터와 5mL의 폴리스티렌 둥근 바닥 튜브에 혼합하고 배양합니다. 볼텍싱 후 100마이크로리터의 덱스트란 비드를 셀 현탁액에 추가하고 피펫으로 두 번 부드럽게 혼합합니다. 그런 다음 1.3ml의 보충된 DPBS를 혼합물에 첨가하고 실온에서 3분 동안 자석으로 배양합니다.

자석과 튜브를 뒤집어 라이브 셀 현탁액을 새로운 15밀리리터 원추형 튜브에 붓습니다. 원심 분리기에서 세포를 주입하십시오. 대부분의 상층액을 제거한 후 0.04% 소 혈청 알부민을 함유한 DPBS 1밀리리터에 세포를 재현탁시킵니다.