고급 멀티오믹스 연구를 위한 iPSC 유래 세포에서 핵 분리

먼저 원뿔형 튜브에서 농축된 살아있는 iPSC 유래 세포 현탁액을 얻고 섭씨 4도에서 5분 동안 460g으로 원심분리합니다. 상층액을 버린 후 갓 준비한 100마이크로리터의 0.5X 냉간 용해 완충액을 추가합니다. P100을 사용하여 피펫팅을 위아래로 10회 수행하여 세포를 혼합하고 튜브를 얼음 위에서 3분 동안 배양합니다.

다음으로, 500마이크로리터의 냉각 세척 완충액을 용해물에 넣고 튜브를 원심분리한 다음 상층액을 버립니다. 세척을 반복한 후 펠릿을 120마이크로리터의 냉각된 희석된 핵 완충액에 재현탁시킵니다. 40마이크로미터 세포 여과기를 사용하여 세포 현탁액을 여과하고 여과액에 0.4% 트리판 블루를 추가합니다.

마지막으로, 현미경으로 분리된 핵의 품질을 평가합니다. 이 기술을 사용하여 냉동 보존된 인간 iPSC 유래 조혈 전구 세포에서 고품질 핵을 분리했습니다.