Immunofluorescence Staining of Organotypic Slices with Stem Cell Transplants for Confocal Microscopy(공초점 현미경을 위한 줄기 세포 이식을 사용한 유기형 절편의 면역형광 염색)

먼저, 인간 척수 유래 신경 상피 줄기 세포 또는 HSCNES 세포를 이식한 마우스 기관형 절편을 얻습니다. 인서트 멤브레인 바닥에서 매체를 제거하고 미리 예열된 Dulbecco의 PBS 또는 DPBS로 슬라이스를 세 번 세척합니다. 다음으로, DPBS를 흡인하고 1.5ml의 예열된 4% 포름알데히드로 교체합니다.

그런 다음 멤브레인 상단에 4% 포름알데히드 1밀리리터를 추가합니다. DPBS로 세 번 세척한 후 수술용 칼을 사용하여 인서트 멤브레인을 원주방향으로 절단하고 인서트 플라스틱 구성 요소의 조각으로 분리합니다. 면역형광 염색 후 200마이크로리터의 장착 용액을 깨끗한 유리 슬라이드에 바릅니다.

직선 핀셋을 사용하여 35mm 접시에서 플로팅 멤브레인을 부드럽게 들어 올려 커버 슬립에 옮깁니다. 그런 다음 멤브레인을 준비된 유리 슬라이드에 옮깁니다. 유리 슬라이드의 멤브레인을 100마이크로리터의 장착 용액이 있는 새 커버 슬립으로 덮습니다.

컨포칼 이미징을 진행하기 전에 어두운 화학 후드 아래에서 밤새 건조시키십시오. 척수 조직에 이식된 HSCNES 세포는 30일 동안 안정적인 GFP 발현을 보여 생존율이 높았습니다.