시작하려면 FPLC 컬럼을 패킹하고 샘플 로딩을 위해 샘플 루프를 준비합니다. 이제 소프트웨어로 이동하십시오. 펌프 설정을 두 번 클릭하고 Manual Load Loop를 선택합니다.
이제 컬럼 포트의 튜빙을 플로우 어댑터 상단의 튜빙에 연결합니다. 루프 E에서 튜브의 나사를 풀고 폐기물 용기에 넣습니다. 그런 다음 30밀리리터 주사기를 사용하여 샘플을 추출하고 주사기를 주입 포트 어댑터에 부착합니다.
주사기를 주입 포트에 나사로 고정하고 샘플을 주입하여 샘플 루프에 눈에 띄게 주입되도록 합니다. 이제 주입 포트를 컬럼 캡에 꽂습니다. 샘플 루프의 하단에서 루프 E 포트로 튜브를 연결합니다.
그런 다음 펌프 B의 튜브를 용리 버퍼에 넣습니다. 홈 탭으로 이동하여 새 방법을 선택합니다. 그런 다음 왼쪽 열에서 방법 설정 탭을 선택합니다.
Column Type(열 유형) 드롭다운 메뉴로 이동하여 Custom(사용자 지정)을 선택합니다. 컬럼 부피를 5mL로 입력하고 실행에 필요한 유량을 분당 1mL로 입력합니다. 단위 선택으로 이동하여 CV, 열 볼륨을 방법 기본 단위로 선택합니다.
입구 A가 버퍼 A1로 설정되고 입구 B가 버퍼 B1로 설정되어 있는지 확인합니다. 그런 다음, 왼쪽 메뉴에서 Method Outline(메서드 개요) 탭을 선택합니다. 평형(Equilibration)에서 평형 부피를 10 CV로 설정합니다. Sample Application(샘플 응용 프로그램) 탭에서 샘플 루프를 관찰하여 샘플 부피를 설정합니다. Column Wash로 이동하여 세척 볼륨을 5 CV로 설정합니다. Elution의 경우 그래디언트 볼륨을 0% 버퍼 B에서 100% 버퍼 B까지 14 CV로 설정합니다. Method를 저장하고 실행을 시작합니다.
분수 컬렉터가 첫 번째 분수의 위치에서 시작하는지 확인합니다. 실행 이름을 입력하고 시작을 클릭합니다. 샘플 적용 중에는 현재 폐기물 용기에 들어가는 튜브를 깨끗한 비커로 전환합니다.
이 튜브에서 흘러나오는 결합되지 않은 단백질을 흐름으로 수집하고 FT로 표시합니다. 실행이 완료되면 홈 탭으로 이동하여 실행 열기를 선택합니다. 런을 열어 크로마토그램을 확인합니다. 상단 메뉴에서 Peak Integration을 선택하여 얻은 peaks를 표시합니다.
Fractions 탭을 선택하여 용리된 단백질을 포함하는 분획을 시각화합니다.
