시작하려면 냉동실에서 제대혈 CD34+세포가 포함된 냉동고기를 꺼냅니다. 세포를 50밀리리터 튜브로 옮기기 전에 수조에서 해동합니다. 튜브를 적하 방향으로 흔드는 동안 50%FBS 및 밀리리터당 0.1밀리그램 DNase를 포함하는 예열된 IMDM의 세포 부피의 10배를 튜브에 추가합니다.
셀 현탁액을 500G에서 5분 동안 원심분리합니다. 펠리실린과 스트렙토마이신을 함유한 20-40 마이크로리터의 PBS에 펠릿을 재현탁시킵니다. 사용할 때까지 세포를 얼음에 보관하십시오.
27 게이지 반 인치 바늘이 있는 3밀리리터 주사기를 준비합니다. 제대혈 CD34+세포 현탁액이 들어 있는 29게이지 12.7mm 바늘이 있는 0.5밀리리터 인슐린 주사기를 준비합니다. 다음으로, 100마이크로리터의 부프레노르핀이 들어 있는 29게이지 0.5인치 바늘이 있는 1밀리리터 인슐린 주사기를 준비합니다.
마취된 마우스를 노즈콘으로 옮기고 발가락 꼬집기를 수행하여 주입 준비 상태를 확인합니다. 쥐를 등을 대고 눕히고 뒷다리를 구부립니다. 뒷다리를 고정하려면 주로 사용하지 않는 손의 엄지 손가락을 발에, 가운데 손가락을 엉덩이에, 검지 손가락을 대퇴골 바깥쪽에 놓습니다.
슬개골 주변의 머리카락을 부드럽게 뽑고 알코올 면봉으로 해당 부위를 닦습니다. 이제 27 게이지 반 인치 바늘이 달린 3 밀리리터 주사기를 사용하여 피부를 통해 대퇴골 쪽으로 부드럽게 구멍을 뚫습니다. 바늘이 뼈에 들어가면 바늘 전체가 뼈에 들어갈 때까지 시계 방향으로 돌립니다.
바늘이 반쯤 빠질 때까지 시계 반대 방향으로 회전하여 바늘을 제거합니다. 알코올 면봉으로 바늘 주위를 닦고 바늘을 시계 반대 방향으로 계속 돌려 완전히 제거합니다. 다음으로, 세포 현탁액을 함유한 0.5밀리리터 인슐린 주사기를 대퇴골갱에 삽입합니다.
바늘이 뼈에 들어가면 다리의 그립을 풀고 25마이크로리터의 현탁액을 대퇴골에 부드럽게 주입합니다. 마지막으로 부프레노르핀을 피하로 주입하고 쥐를 홈 케이지로 되돌려 마취에서 회복할 수 있도록 합니다.
