Human Instratine-on-Chip 모델을 위한 인간 제대 정맥 내피 세포(HUVEC)의 수확 및 파종

먼저, 마그네슘과 칼슘이 함유된 DPBS의 콜라겐 원액 1-100 희석액을 준비합니다. 희석된 원액 350마이크로리터를 각 챔버에 넣고 실온에서 5분 동안 배양합니다. 마그네슘과 칼슘이 함유된 350마이크로리터의 DPBS를 사용하여 모든 챔버를 두 번 세척하여 남은 콜라겐과 아세트산을 씻어냅니다.

한 사이트에서 플러그를 뽑고 다른 쪽으로 전환하십시오. 챔버를 다시 세척한 후 350마이크로리터의 내피 세포 성장 배지를 추가합니다. 한 사이트에서 플러그를 뽑고 다른 쪽으로 전환하십시오.

그런 다음 각 챔버에 350 마이크로리터의 내피 세포 성장 배지를 추가합니다. 내피 세포 성장 배지에서 80%에서 90%의 세포 밀도를 가진 통로 1-3에서 배양된 HUVEC을 복용하십시오. 그런 다음 T25 세포 배양 플라스크에서 세포 배양 배지를 제거하고 마그네슘과 칼슘이 없는 3-5ml의 DPBS로 세포를 부드럽게 세척합니다.

용액이 제거되면 트립신 해리 시약 1m리터를 넣고 세포가 플라스크에서 분리될 때까지 섭씨 37도에서 5분 동안 배양합니다. 마그네슘과 칼슘이 없는 PBS에서 9밀리리터의 5% FBS를 사용하여 분리된 세포를 튜브로 옮깁니다. 350G에서 실온에서 5분 동안 원심분리합니다.

상층액을 이동시킨 후 세포 펠릿을 1밀리리터의 내피 세포 성장 배지에 다시 현탁시킵니다. 챔버에 각각의 세포 부피를 추가하고 섭씨 37도에서 이산화탄소를 5% 농도로 하는 가습 인큐베이터에서 바이오칩을 배양합니다. 24시간 후 HUVEC 함유 챔버를 350마이크로리터의 내피 세포 성장 배지와 배지 교환을 수행합니다.

미세유체 바이오칩에 기포가 나타나면 영향을 받는 챔버의 포트 외에 바이오 칩의 모든 포트를 닫으십시오. 칩을 기울여 기포를 캐비티의 한쪽 끝 가까이로 이동합니다. 다른 쪽 끝의 포트에서 반대쪽 플러그를 잡고 700마이크로리터의 세포 배양 배지를 챔버를 통해 밀어 넣습니다.