시작하려면 미리 냉각된 주걱을 사용하여 100mg의 식물 조직 분말을 계층화된 폴리프로필렌 미세 원심분리기 튜브에 추가합니다. 그런 다음 즉시 튜브에 20% 메탄올 1밀리리터를 추가합니다. 뚜껑을 씌운 튜브를 흔들리는 셰이커에 올려 실온에서 3시간 동안 기다립니다.
다음으로, 9, 464G에서 튜브를 10분 동안 원심분리하고 상층액을 LC-MS 자동시료주입기 바이알에 수집합니다. 전기분무 이온화 소스와 역상 HPLC 컬럼을 사용하여 LC-MS 기기를 설정합니다. HPLC의 경우 물에 0.1% 포름산을 용매 A로 사용하고 0.1% 포름산을 용매로 아세토니트릴에 사용합니다. B. 컬럼 오븐 온도를 섭씨 45도로 조정하고 유속을 분당 0.5밀리리터로 조정합니다.
컬럼을 99%A 및 1%B로 평형화합니다. 용매 B 농도가 26분에 걸쳐 1%에서 50%로 증가하도록 30분 그래디언트를 설정한 다음 26.01분에 1%B로 빠르게 돌아가 4분 동안 유지합니다. 질량 분석기의 작동 매개변수를 구성합니다.
인터페이스 전압을 4킬로볼트로, 분무 가스 유량을 분당 3리터로, 가열 가스 유량을 분당 10리터로 설정합니다. 탈용매화 라인 온도를 섭씨 250도, 히트 블록 온도를 섭씨 400도, 인터페이스 온도를 섭씨 300도로 조정합니다. 건조 가스 유량을 분당 10리터로 설정하고 충돌 유도 해리 가스 압력을 17킬로파스칼로 설정합니다.
전기분무 이온화 소스 포지티브 모드에서 MS 방법을 구축하고, 100에서 1, 000달톤의 질량 범위를 커버하는 Q3 및 Q1 스캔을 모두 포함하며, Q1 스캔은 자동 동위원소 배제를 가진 조사 이벤트 역할을 합니다. 50 대 1, 000 달톤의 질량 창, 마이너스 20 볼트의 충돌 셀 에너지 및 0.2 초 미만의 이벤트 시간으로 Q1 스캔에 제품 이온 스캔 링크를 추가하십시오. 다음으로, 충돌 셀 에너지가 마이너스 20V이고 이벤트 시간이 0.75초인 LC 방법의 길이와 동일한 포지티브 모드 전구체 이온 스캔을 추가하도록 MS 방법을 조정합니다.
모든 경우에 자동 동위원소 배제 또는 탈동위원소 기능이 활성화되어 있는지 확인하십시오. monosubstituted, disubstituted, 및 trisubstituted 트로판 알칼로이드 단편에 대한 마스터 전하 값을 설정합니다. 다음으로, MS-MS 분석법에 충돌 셀 에너지가 마이너스 20V이고 이벤트 시간이 0.75초인 LC 분석법의 길이와 동일한 포지티브 모드 중립 손실 스캔을 추가합니다.
모든 경우에 자동 동위원소 제외 또는 탈동위원소 기능이 활성화되어 있는지 확인하십시오. 트로판 알칼로이드의 에스테르에 대한 관심 중성 손실 질량을 설정하고, 티글릭산, 아세틸기, 페닐락트산 또는 트로픽산 에스테르에서 파생된 에스테르에 대해 설정합니다. LC-MS 분석법을 다운로드하고 관심 시료에 대한 데이터 파일을 생성합니다.
HPLC 컬럼이 섭씨 45도에서 평형을 이루면 10-20 마이크로리터의 시료를 주입합니다.
