시작하려면 갓 교배한 암컷 쥐에서 배아를 얻습니다. 35mm 페트리 접시 바닥에 Potassium Simplex Optimized Medium 12마이크로방울을 준비합니다. 미세 방울을 3-5 밀리리터의 미네랄 오일로 덮고 페트리 접시를 이산화탄소 5 %와 섭씨 37도의 인큐베이터에 넣어 평형을 이룹니다.
전사 피펫을 사용하여 마우스 배아를 M2 배지에서 KSOM 배지로 이식합니다. 세척된 배아를 준비된 KSOM 미세 방울에 넣고 섭씨 37도에서 5% 이산화탄소와 함께 4일 동안 배양합니다. 유리한 배반포는 크기, 내부 세포 질량, 영양 세포 수 및 확장 정도에 따라 선택합니다.
2% 젤라틴 1mL을 12웰 배양 플레이트에 넣고 섭씨 37도에서 30분 동안 배양합니다. 그런 다음 여분의 젤라틴을 흡인하고 접시 바닥을 완전히 말리십시오. 인간 자궁내막 선암종 세포 또는 이시카와 세포를 젤라틴으로 코팅된 12웰 플레이트에 파종하고 플레이트를 24시간 동안 배양합니다.
5-15개의 신선한 배반포를 세포가 들어있는 12웰 플레이트의 각 웰에 부드럽게 넣습니다. 48시간 후 현미경으로 배아를 관찰하여 플레이트를 세 번 움직인 후 배아의 부착 상태를 평가합니다. 부착되지 않은 배아는 세포 표면 위로 떠다니거나 굴러다닐 것입니다.
마지막으로, 다양한 에스트로겐 농도가 있는 상태에서 배아 착상률을 계산합니다. 그 결과, 17 베타-에스트라디올의 생리학적 농도에 가까운 경우, 17 베타-에스트라디올이 없는 대조군에 비해 배아 착상률이 증가한다는 것을 보여주었다. 그러나 약 100 나노몰의 17 베타-에스트라디올의 초고농도는 배아 착상률을 현저히 감소시켰습니다.
