치료 검사를 위한 췌관 선암 탈모증을 모방한 3D 공동 배양 스페로이드 준비

시작하려면 PANC-1 세포 배양을 얻고 9ml의 Hank's balanced salt 용액으로 3ml씩 세포를 세척합니다. 약 10분 동안 2mL의 트립신으로 세포를 배양합니다. 현탁액을 중화시키려면 10% FBS가 보충된 DMEM 3밀리리터를 첨가하십시오.

1밀리리터 배지 단위로 세포를 7회 세척한 후 각 중화된 부분 표본을 15밀리리터 튜브에 수집합니다. 마찬가지로, 트립신 중화 용액과 성상 세포 배지를 사용하여 트립신화된 인간 췌장 성상 세포(HPaSteC)를 얻습니다. 거품 형성을 피하기 위해 11ml의 DMEM에 필요한 양의 두 세포 현탁액을 10% FBS와 혼합합니다.

100 마이크로리터의 세포 현탁액 혼합물을 배양 플레이트에 부드럽게 분배하고 5% 이산화탄소와 함께 섭씨 37도에서 배양합니다. 셋째 날에는 우물 측면을 따라 각 우물에 10% FBS가 있는 50마이크로리터의 DMEM을 추가합니다. 10일 또는 11일째에 후광 근처의 용액을 방해하지 않고 사용한 매체를 흡입하고 각 웰 측면을 따라 100마이크로리터의 새 매체를 추가합니다.

14일 또는 17일째에 1밀리리터 피펫을 사용하여 후광에 도달할 때까지 각 웰에서 매체를 제거합니다. 플레이트를 후드 배경에 맞춰 바닥에 있는 스페로이드를 찾습니다. 스페로이드 근처에 약 50마이크로리터의 매체를 부드럽게 피펫팅하여 웅덩이를 방해합니다.

14일째에 얻어진 스페로이드는 평균 0.048입방밀리미터까지 자라는 것으로 나타났습니다.