GFP 표지 제브라피시 T-ALL 세포의 In vivation and harvesting of GFP-labeled Zebrafish T-ALL cells(GFP 표지 제브라피시 T-ALL 세포의 생체 내 증식 및 수확)

먼저 냉동 GFP 표지 제브라피시 T-ALL 세포 1mL가 들어 있는 바이알을 섭씨 37도의 수조에서 부드럽게 흔들어 해동합니다. 바이알의 내용물을 얼음 위에 4ml의 어류 배지가 들어 있는 15밀리리터의 원뿔형 튜브에 천천히 피펫팅합니다. 섭씨 4도에서 5분 동안 2, 500G에서 세포를 회전시키고 0.5밀리리터의 물고기 매체에 펠릿을 재현탁시키기 전에 상층을 버립니다.

10마이크로리터의 트리판 블루 염료가 들어 있는 마이크로 원심분리기 튜브에 10마이크로리터의 세포 현탁액을 추가합니다. 잘 섞어 10마이크로리터를 혈구계에 옮기고 현미경으로 세포를 세습니다. 다음으로, 마취된 성인 CG1 제브라피시를 복부 쪽이 위로 향하게 잡고 있습니다.

Hamilton 마이크로 주사기를 사용하여 5-6 마이크로리터의 세포 현탁액을 복강 내 공간에 주입합니다. 이식 후 약 21일에서 28일 후에 마취된 제브라피시에서 GFP 표지된 백혈병 세포의 비율을 평가합니다. 백혈병 세포를 채취하려면 안락사된 제브라피시를 새 페트리 접시에 옮기고 세포의 완충제 역할을 할 어류 배지 1ml를 추가합니다.

면도날을 사용하여 먼저 제브라피시의 목을 베고 조직을 침수합니다. 큰 세포 덩어리를 제거하기 위해 위아래로 피펫팅합니다. 세포 현탁액을 40미크론 세포 여과기를 통해 50밀리리터 원추형 튜브에 통과시켜 단일 세포 현탁액으로 해리합니다.