CellTrace Far Red(CT-FR) 염색된 Zebrafish T-ALL 세포의 최적화 및 In vivo 증식

먼저 1.5밀리리터 마이크로 원심분리기 튜브에 형광 라벨이 부착된 제브라피시 6마리의 T-ALL 세포를 10의 거듭제곱으로 1회 수집합니다. 섭씨 4도에서 5분 동안 2, 500G에서 세포를 원심분리하고 0.9 XPBS의 1밀리리터에 펠릿을 재현탁시킵니다. 250마이크로리터의 세포 현탁액을 마이크로 원심분리기 튜브에 넣습니다.

그런 다음 250마이크로리터의 0.9XPBS를 추가하여 부피를 최대 500마이크로리터로 만듭니다. 필요한 양의 CT-FR 염료 원액을 추가하고 빛으로부터 보호하면서 섭씨 37도에서 20분 동안 배양합니다. 실온에서 5분 동안 2, 500G에서 세포를 원심분리합니다.

500마이크로리터의 어류 배지를 추가하여 과도한 염료를 제거하고 25마이크로리터의 어류 배지에 펠릿을 재현탁하기 전에 다시 원심분리기를 추가합니다. 트리판 블루로 세포를 염색하고 생존 가능성을 현미경으로 검사합니다. 최적화된 CT-FR 농도를 사용하여 제브라피시 세포를 염색하고 일부 종양 세포는 염색하지 않은 상태로 둡니다.

Hamilton 마이크로 주사기를 사용하여 5마이크로리터의 염색된 세포 현탁액과 염색되지 않은 세포 현탁액을 마취된 제브라피시의 복강내 공동에 주입합니다.