이식 및 종양 추적을 위한 CT-FR 염색 제브라피시 T-ALL 세포의 준비 및 분류

기증자 플레이트의 준비를 위해 500, 000 야생 유형 CG1 제브라피쉬 세포를 15 밀리리터 원뿔 튜브에 넣습니다. 5ml의 어류 배지를 추가하여 세포 스톡을 마이크로리터당 100개 세포로 희석합니다. 50 마이크로리터의 셀 현탁액을 96웰 플레이트의 각 웰에 분배하고 분류할 때까지 플레이트를 섭씨 4도에 놓습니다.

선별 실험 설정을 위해 얼룩이 없고 단색 컨트롤을 준비합니다. 대조군과 샘플의 셀 현탁액을 35미크론 필터 캡을 통해 얼음 위의 팩스 튜브에 넣습니다. 섭씨 4도에서 2, 500G에서 96웰 플레이트를 원심분리합니다.

각 웰에서 45마이크로리터의 상층액을 조심스럽게 제거하고 5마이크로리터의 액체를 남깁니다. 20마이크로리터 피펫으로 세포를 재현탁시키고 Hamilton 마이크로 주사기를 사용하여 세포 현탁액을 원하는 수의 CG1 제브라피시에 주입합니다. 제한 희석 분석을 위해 CG1 제브라피시와 분류된 세포를 이식한 후, CT-FR 고세포는 CT-FR 저세포에 비해 백혈병 줄기세포 빈도가 4배 더 높았습니다.

이식 후 28일째 되는 제브라피시의 대표적인 이미지에서는 CT-FR이 높은 제브라피시의 89%가 백혈병으로 발병하는 반면, CT-FR이 낮은 그룹에서는 20%가 백혈병으로 발병하는 것으로 나타났습니다. CT-FR이 높은 제브라피쉬는 백혈병에 대한 잠복기가 현저히 짧았습니다. CT-FR 고제브라피쉬는 CT-FR 저제브라피시에 비해 전체 생존율이 현저히 낮았다.