시작하려면 CM-Dil로 염색된 백혈병 세포가 주입된 제브라피시 배아를 얻습니다. 마취된 배아를 1.5밀리리터 원심분리 튜브에 옮기고 P200 피펫을 사용하여 난황을 100마이크로리터의 무칼슘 링거 용액에 5분 동안 녹입니다. 노른을 제거한 배아의 각 샘플을 섭씨 29도에서 30-35분 동안 트립신 콜라겐분해효소 용액 1mL로 배양합니다.
P1000 팁을 사용하여 백본 구조가 더 이상 보이지 않을 때까지 5분마다 이 용액에서 배아를 위아래로 피펫팅합니다. 반응을 중지하려면 튜브에 200마이크로리터의 FBS를 첨가하십시오. 잘 섞고 5분 더 배양합니다.
세포 현탁액을 섭씨 4도에서 5분 동안 300G로 펠릿화합니다. 상층액을 버리면 세포 펠릿을 냉각된 PBS에서 두 번 세척하고 70마이크로미터 세포 여과기를 통해 세포를 변형시킵니다. 세포를 세척한 후, 이식된 세포와 반응하는 항체를 포함하는 염색 매체에 세포 펠릿을 재현탁시킵니다.
섭씨 4도에서 20분 동안 세포를 배양합니다. 세포를 펠릿화하고 1개의 마이크로몰 나선과 P Blue를 포함하는 200마이크로리터의 염색 매체에 재현탁시킵니다. 세포 혼합물을 5밀리리터의 둥근 바닥 폴리카보네이트 튜브로 옮기고 유세포 분석을 수행합니다.
이중 표지를 통해 양호한 볼루스 접종과 열등한 볼루스 접종 간의 종양 부담 차이를 측정할 수 있었습니다.
