In vitro 혈관신생을 조사하기 위한 인간 제대 정맥 내피 세포(HUVEC)의 스크래치 상처 이동 분석

먼저 100마이크로리터의 HUVEC 세포를 96웰 플레이트의 웰에 파종합니다. 플레이트를 섭씨 37도에서 이산화탄소 5% 미만인 세포 배양 인큐베이터에 6시간 동안 넣어 세포 침전을 용이하게 합니다. 다음으로, 각 웰의 배지를 100% FBS를 함유한 2마이크로리터의 내피 세포 성장 기저 배지로 교체하고 다시 배양합니다.

다음 날, 플레이트를 96 웰 와인딩 메이커 도구에 놓습니다. 장치의 레버를 아래로 눌러 긁힌 자국을 만듭니다. 이중 긁힘을 방지하기 위해 레버를 풀기 전에 상처 제조 도구의 뚜껑을 조심스럽게 들어 올리십시오.

200 마이크로리터의 FBS 보충 내피 세포 성장 기저 배지로 웰을 두 번 세척합니다. 총 파편 제거를 확인한 후 준비된 자극 또는 제어 용액 100마이크로리터를 각 웰에 피펫팅합니다. 라이브 셀 이미징 현미경을 사용하여 24시간 동안 매시간 이미지를 획득합니다.

포지티브 대조군은 원래의 긁힌 영역에서 성공적인 이동을 보여주었습니다. 기술적 문제는 고르지 못한 세포 성장, 이중 긁힘 또는 긁힘 경계의 파동으로 나타났습니다. 상대적인 상처 거리의 25% 증가가 최적인 것으로 간주되었습니다.

포지티브 컨트롤과 네거티브 컨트롤의 잘못된 분리는 낮은 동적 범위를 나타냅니다.