면역조직화학적 분석을 위한 2D 인간 제대 정맥 내피 세포(HUVEC) 배양 고정 및 차단

시작하려면 메탄올에 30mg의 5% 수산화칼륨을 50ml의 튜브에 추가합니다. 직경 12mm의 커버 슬립 100 개를 튜브에 30 분 동안 지속적으로 교반하여 배양합니다. 다음으로, 커버 슬립을 탈염수에 30분 동안 세척합니다.

세척이 완료되면 커버 슬립을 70% 이소프로필 용액에 옮겨 보관합니다. 커버 슬립을 코팅하려면 먼저 정사각형 페트리 접시의 벽에 개별적으로 기대십시오. 이소프로필 알코올이 증발하면 24웰 플레이트에 옮깁니다.

PBS의 콜라겐 1mL를 각 웰에 피펫팅하고 배양합니다. 다음으로, 커버 슬립을 PBS 1 밀리리터로 5 분 동안 약 4-5 회 세척하십시오. 피펫은 코팅된 커버 슬립을 사용하여 HUVEC을 웰로 배양했습니다.

원하는 시간 동안 세포를 배양한 후 PBS 1m리터에 세포를 5분 동안 세척합니다. 2% 파라포름알데히드 1밀리리터에 세포를 실온에서 20분 동안 고정합니다. 이제 PBS 1밀리리터로 세포를 헹굽니다. 각각 5분씩 3-4회 세척 주기.

마지막으로, 염색하기 전에 1mL의 차단 완충액을 웰 플레이트에 피펫팅합니다.