In vitro 혈관신생 조사를 위한 3D 콜라겐 매트릭스에서 인간 제대 정맥 내피 세포(HUVEC) 스페로이드의 면역세포화학(Immunocytochemistry of Human Umbilical Vein Endothelial Cell, HUVEC) Spheroids for investigating Angiogenesis In vitro

먼저 발아된 스페로이드 HUVEC 겔을 4% 파라포름알데히드 1밀리리터에 1시간 동안 고정합니다. 젤을 PBS 1m리터에 약 3-4회 부드럽게 세척합니다. 플레이트의 각 웰 표면에서 겔을 완전히 분리한 다음 새 24웰 플레이트로 옮깁니다.

웰 플레이트에 차단 용액 1mL를 추가한 다음 실온에서 1시간 동안 오비탈 셰이커에서 배양합니다. 배양 후 배양 전에 500 마이크로리터의 1차 항체 용액을 웰에 피펫팅합니다. 다음 날, PBS로 젤을 각각 5분씩 5회 세척 주기 동안 부드럽게 세척합니다.

차단 완충액에 phalloidin-FITC로 희석된 해당 2차 항체 500마이크로리터를 추가합니다. 궤도 셰이커에서 섭씨 4도에서 밤새 플레이트를 배양합니다. PBS에서 젤을 세척한 후 현미경 슬라이드에 옮깁니다.

커버 슬립에 DAPI 함유 장착 매체 두 방울을 떨어뜨리고 각 겔 위에 놓습니다. 건조된 젤을 매니큐어로 밀봉합니다. 추가 분석이 있을 때까지 섭씨 4도에서 보관하기 전에 어두운 곳에 두십시오.