각막 내피 세포층에 대한 염료의 생체이용률을 평가하기 위한 Hoechst의 차내 주입

시작하려면 5 마이크로 리터의 hoechst 용액을 34 게이지 뭉툭한 바늘에 부착 된 멸균 10 마이크로 리터 유리 Hamilton 주사기에 넣으십시오. 이 주사기 바늘을 자체 밀봉 각막 터널을 통해 전방에 삽입하고 용액을 주입합니다. 모든 액체가 사라질 때까지 바늘을 2-3초 동안 제자리에 유지합니다.

누출을 방지하여 바늘을 천천히 당겨 제거하십시오. 그런 다음 양쪽 눈을 적출합니다. 각막을 분리하려면 시신경 주변의 공막을 자르고 시신경에서 각막 쪽으로 4개를 더 자릅니다.

Whatman 여과지로 과도한 액체를 배출합니다. 절단된 공막을 펼치고 공막에서 망막을 분리합니다. 수정체와 망막을 빼내어 버립니다.

다음으로 홍채를 제거합니다. 각막 주위의 공막을 잘라 버립니다. 그리고 각막을 조심스럽게 들어 올립니다.

각막을 유리 슬라이드에 놓고 0.5% Alizarin Red로 염색하여 내피 세포를 식별합니다. 여분의 얼룩을 제거한 후 각막을 3 회 세척하고 그 위에 커버 슬립을 놓습니다. 광학 현미경으로 각막을 검사하여 내피 세포의 Alizarin Red 염색을 이미지화합니다.

또한 형광 현미경으로 각막을 평가하여 회흐스트 염색을 관찰하고 대조군으로 주입되지 않은 각막과 비교합니다. DNA 결합 세포 투과성 형광 마커인 Hoechst 염료는 카메라내 주입을 통해 약물 생체이용률을 평가하는 데 사용되었습니다. hoechst의 각막 내피 세포 흡수는 주사 후 15분 후에 형광 현미경으로 검사하였다.

Alizarin Red 염색은 내피층의 세포 간 경계를 강조했습니다. 또한, 각막 내피 세포핵 내 양성 회흐스트 염색은 이 방법을 통한 염료의 성공적인 전달을 확인했습니다.