시작하려면 숙성 후 샘플 장착 슬라이드를 얻습니다. 슬라이드를 전처리하려면 지정된 시간 동안 적절한 용액이 들어 있는 코플린 병에 연속적으로 담그십시오. 100-200 마이크로리터의 proteinase K 분해 완충액으로 조직을 분해하고 실온에서 1분 동안 배양합니다.
소화를 중지하려면 즉시 슬라이드를 에탄올 용액에 각각 2분 동안 순차적으로 담그십시오. FISH 교잡 혼합물을 슬라이드에 바르고 커버 슬립으로 샘플을 덮습니다. 슬라이드를 섭씨 75도에서 2-5분 동안 슬라이드 해자 혼성화 시스템과 같은 핫 플레이트에 놓습니다.
그런 다음 슬라이드를 섭씨 37도로 설정된 다른 핫 플레이트로 옮겨 하룻밤 동안 하이브리드화합니다. 그런 다음 슬라이드를 따뜻한 세탁 버퍼에 담그고 커버 슬립을 조심스럽게 제거합니다. 어둠 속에서 적절한 시약을 사용하여 슬라이드를 씻고 염색하십시오.
슬라이드를 탈이온수에 1초 이상 담그지 않고 종이 타월 위에 놓습니다. 건조 후 페이드 방지 장착 미디어로 슬라이드를 장착합니다. 이미징하기 전에 커버 슬립을 놓고 매니큐어로 밀봉하십시오.
60X 오일 렌즈를 사용하여 여러 Z-stack에서 형광 신호를 캡처합니다. 마지막으로, 최대 3D 투영을 수행하여 최상의 해상도를 얻고 디콘볼루션 또는 기타 배경 지우기 알고리즘을 적용합니다. 삼중 음성 유방암 샘플에서 핵 FISH는 주로 핵당 두 개의 뚜렷한 점을 보여주며, 이는 두 개의 ERBB2 신호를 나타냅니다.
대조적으로, HER2 양성 샘플은 풍부한 FISH 신호를 나타내며 이는 다양한 유전자 증폭 패턴을 나타냅니다. 또한 HER2 양성 샘플의 일부 핵은 유전자 증폭 증가를 위한 초점인 추가 염색체 DNA 허브를 암시하는 클러스터를 나타낼 수 있습니다.
