자성 나노 입자, anti-microRNA 10b 주입 후 24 시간 후, 마우스의 무게를 측정하고 d-luciferin의 부피를 계산하여 kg당 150 mg의 투여량으로 투여합니다. 직사광선으로부터 용액을 보호하는 부피가 있는 28게이지 주사기를 준비합니다. 마취가 끝나면 수술 부위가 더 이상 손상되지 않도록 쥐의 목덜미를 부드럽게 긁어내고 d-루시페린을 복강 내에 주입합니다.
마우스가 복구될 때까지 기다렸다가 이미징합니다. in vivo 이미징 시스템 또는 IVIS 스캐너를 준비한 후 이미징 스테이지에 검은색 저형광 매트를 놓고 이미징을 위해 노즈 콘 어레이를 구성합니다. 소프트웨어에서 이미징 마법사를 클릭합니다.
그런 다음 생물 발광 이미징을 선택한 다음 개방형 필터를 선택합니다. 다음 화면에서 이미징 피사체와 시야를 선택합니다. 마취된 마우스를 IVIS 스캐너에 엎드린 위치에 놓습니다.
시퀀스 획득을 클릭하고 최소 신호 임계값이 3000 카운트인 자동 노출 설정을 사용하여 루시페라아제 표지된 U-251 교모세포종 세포의 국소화를 위한 이미지를 캡처합니다. 그런 다음 이미징 마법사에서 Fluorescence(형광)를 선택한 다음 epi illumination과 filtered pair 를 선택합니다. 다음 화면에서 프로브 Cy5.5를 선택합니다.
이미징 피사체와 시야를 선택합니다. 6의 최소한도 신호 문턱을 가진 자동 노출 조정을 사용하여, 000의 조사는, 자석 nanoparticles, 반대로 microRNA 10b의 지방화를 위한 심상을 붙잡는다. 마취된 쥐를 MRI 침대에 엎드린 상태로 놓습니다.
바이트 바와 이어 바를 사용하여 스캔을 위해 머리를 고정하고 배치합니다. 윤활된 직장 온도 프로브를 설치하고 호흡 및 온도 모니터링이 작동하는지 확인합니다. 마우스 베드의 못을 코일의 구멍에 끼워 마우스 브레인 코일을 머리 위에 놓고 코일을 테이프로 제자리에 붙여서 스캔 중 움직임을 줄입니다.
마우스 상단에 작은 따뜻한 물 순환 패드를 놓아 체온을 유지합니다. 마우스와 이미징 베드를 스캔할 위치로 이동합니다. 수집 소프트웨어에서 워블 설정 단계를 시작하여 MRI 코일을 조정하고 일치시킵니다.
추적이 중앙에 있고 가능한 한 깊은지 확인하십시오. 뇌의 3면 국소화기 스캔을 획득합니다. 다음 매개변수를 사용하여 2차원 T2 가중 스캔을 획득하여 종양을 검출합니다.
map shim 유틸리티를 사용하여 국부적인 shim을 계산하기 위해 전체 뇌의 b0 맵을 획득합니다. 3차원 T2 별 가중치 이미지를 사용하여 나노 입자를 시각화할 수 있습니다. 다음 매개변수를 사용하여 2차원 T2 가중 이미지를 참조로 사용하여 종양 위에 스캔을 배치하기 위한 추가 나노 입자 이미징을 위한 T2 별 맵을 획득합니다.
5밀리초의 에코 시간 간격으로 10개의 포지티브 에코 이미지를 획득합니다. 실험 종점에서 마우스의 무게를 측정하고 킬로그램당 150밀리그램의 투여량으로 투여할 d-루시페린의 부피를 계산합니다. 앞에서 설명한 대로 주입 후 10분 후에 실시간 생물 발광 이미징을 수행합니다.
안락사된 쥐에서 절제된 뇌가 있는 페트리 접시를 IVIS 스캐너에 놓습니다. in vivo imaging과 동일한 획득 설정을 사용하여 bioluminescence 및 fluorescence modality로 뇌를 이미징할 수 있습니다. 자성 나노입자 anti-microRNA 10b 주입 마우스에서 Cy5.5 형광 및 생물 발광 신호는 나노 입자가 종양에 전달됨을 나타내는 명확한 공동 국소화를 보인 반면, 대조군 마우스는 형광 신호를 나타내지 않았습니다.
Ex vivo 형광 이미징은 간 및 신장과 같은 주요 청소 기관에서 나노 입자의 국소화를 보여주었습니다. T2 가중 MRI 신호의 특징적인 감소는 MRI 조영제로서의 자성 나노입자인 anti-microRNA 10b가 혈액-뇌 장벽을 통과하고 종양 영역에 축적될 가능성을 보여줍니다.
