자궁내막 조직에서 자궁 NK 세포 아형 분석을 위한 다중 면역조직화학

시작하려면 다중 면역조직화학을 위해 유리 슬라이드에서 인간 자궁내막 조직 절편을 얻고 조직 절편을 섭씨 60도에서 2시간 동안 굽습니다. 그런 다음 슬라이드를 탈왁스, 수분 공급 및 고정을 위한 적절한 용액에 순차적으로 담그십시오. 각 항체에 대해 각각의 AR6 또는 AR9 완충액 200mL를 내열성 항원 회수 카세트에 추가합니다.

항원 검색 완충액에 절편을 넣은 후 전자레인지에 고출력으로 끓을 때까지 가열합니다. 카세트를 느슨하게 덮고 저전력으로 15분 동안 가열합니다. 슬라이드가 식은 후 이중 증류수로 헹구고 PBST를 헹굽니다.

그런 다음 흡수성 종이로 여분의 용액을 제거하고 소수성 배리어 펜으로 조직 주위에 완전한 원을 그립니다. 그런 다음 실온에서 8분 동안 3% 과산화수소로 절편을 배양합니다. 다음으로 차단 용액을 바르고 실온에서 10분 동안 배양합니다.

차단 용액을 제거한 후 1x 항체 희석액으로 1에서 1000으로 희석하여 첫 번째 1차 항체인 CD49a 150마이크로리터를 각 슬라이드에 적용합니다. 2차 항체를 적용하기 전에 흡수지를 사용하여 과도한 수분을 제거하십시오. 각 슬라이드에 1x anti-mouse and rabbit horseradish peroxidase 2차 항체를 4-5방울 떨어뜨립니다.

그런 다음 티라미드 신호 증폭 또는 TSA 염료를 증폭 희석제에 1 내지 100배 희석한다. 그리고 이 희석된 용액 150마이크로리터를 각 슬라이드에 추가하고 배양합니다. 결합되지 않은 형광단을 제거하려면 내열성 카세트에 담긴 AR6 완충액 200ml의 절편을 전자레인지에서 2분 동안 끓입니다.

그런 다음 전자레인지를 고출력에서 저전력으로 15분 동안 돌립니다. PBST에 희석한 150마이크로리터의 DAPI 작업 용액을 적가로 첨가합니다. 약 30분 동안 어두운 곳에서 섹션을 완전히 건조시킵니다.

담금질 방지 형광 마운턴트를 한 방울 떨어뜨리고 커버슬립을 조심스럽게 놓습니다.