시작하려면 Xiaoyao 알약을 주입 한 안락사 된 쥐의 왁스 블록을 준비하십시오. 왁스 블록을 6마이크로미터 두께의 연속 섹션으로 자르고 슬라이스를 섭씨 70-72도에서 30-60분 동안 굽습니다. 슬라이스를 탈왁싱 용액에 8분 동안 옮긴 다음 75% 무수 에탄올로 각각 5분 동안 두 번 탈수한 후 PBS에서 5분 동안 헹굽니다.
이제 15분 동안 EDTA 고압 수리를 수행합니다. PBS로 헹군 후 조직에 3% 과산화수소를 적가하고 10분 동안 배양합니다. PBS로 티슈를 각각 5분씩 3회 씻습니다.
면역조직화학 펜을 사용하여 조직 주위에 원을 그립니다. PBS로 조직을 세척한 후 1차 항체 용액에 밤새 염색합니다. 다음 날, PBS에서 5분씩 3회 헹굽니다.
2차 항체를 적가하고 60분 동안 배양합니다. PBS로 헹군 후, 바로 사용할 수 있는 DAB 용액에 조직을 3-5분 동안 배양합니다. 이제 헤마톡실린으로 조직을 3분 동안 염색합니다.
다시 말하지만, 분화 용액에 10초 동안 넣기 전에 PBS로 조직을 헹굽니다. PBS 헹굼 후 회수 용액을 10초 동안 추가합니다. 마지막으로 75% 무수 에탄올 처리를 5분 동안 수행하고 슬라이드를 중성 수지로 밀봉합니다.
Hematoxylin-eosin 염색은 가짜 마우스에서 촘촘하게 배열된 섬유주를 보인 반면, OVX 마우스는 희박한 섬유주와 확장된 골수강으로 전형적인 골다공증성 변화를 보였습니다. 마이크로 CT 비교 결과, OVX 마우스에서 가짜 마우스에 비해 불완전한 섬유주 그물망과 골피질의 얇아짐이 확인되었습니다. 약물 개입 후 hematoxylin-eosin 염색은 OVX 그룹에 비해 섬유주 구조가 복원되고 골수강이 감소한 것으로 나타났습니다.
영상 지표는 고용량 샤오야오(Xiaoyao) 알약 투여군에서 OVX 투여군에 비해 섬유주 골절이 적고 망상이 회복된 것으로 나타났다. 면역조직화학 결과, 약물군에서 알칼리성 인산가수분해효소와 콜라겐 1형이 증가하고 인터루킨 17, ACT1, 인터루킨 6이 감소한 것으로 나타났습니다.
