In vitro Pinus pinaster 싹 배양균의 설립 및 감염 소나무 선충류와 함께

시작하려면 인증된 Pinus pinaster 씨앗을 흐르는 수돗물에 씻어 더 큰 파편을 제거하십시오. 그런 다음 일반 세제 용액을 사용하여 격렬한 교반으로 더 미세한 파편을 세척하십시오. 플로우 후드에 씨앗이 덮일 때까지 상업용 표백제 용액을 넣고 15분 동안 세게 섞습니다.

표백제 용액을 버린 후 멸균된 수돗물로 씨앗을 세 번 헹굽니다. 이제 씨앗을 80 % 에탄올에 15 분 동안 격렬한 교반으로 담그십시오. 에탄올을 처분한 후 멸균된 초순수로 씨앗을 세 번 씻습니다.

소나무 발아를 위해 멸균 된 기계 선반으로 멸균 된 종피를 부수십시오. 잣을 분리하고 멸균된 젖은 여과지와 함께 밀폐된 용기에 넣어 밤새 수분을 공급합니다. 다음 날, 수화된 잣을 섭씨 4도에서 7일 동안 층화하여 휴면을 깨고 발아를 동기화합니다.

그런 다음 잣을 싹이 트일 때까지 섭씨 25도의 어두운 곳에서 유지하십시오. 무균 발아 소나무를 2 주 동안 또는 주요 줄기가 발달하기 시작할 때까지 통제 된 환경 조건으로 옮깁니다. 2 주 후, 메스로 뿌리 위의 묘목의 공중 부분을 자르고 멸균 된 Schenk Hildebrandt 배양 배지로 옮깁니다.

앞에서 설명한 대로 통제된 환경 조건에서 배양을 유지합니다. 멸균 메스로 싹 밑부분의 굳은 살코리를 잘라 주기적으로 하위 배양합니다. 멸균 핀셋을 사용하여 싹 클러스터를 새로운 증식 배양 배지로 옮깁니다.

다음으로, 마이크로 줄기 신장을 위해 활성탄 리터당 3g이 포함된 Schenk Hildebrandt 배양 배지에 마이크로싹을 접종합니다. 이제 길쭉한 싹을 식물 호르몬이나 활성탄이 없는 Schenk Hildebrandt 배양 배지에 넣습니다. 100-150 개의 혼합 생활 단계 멸균 된 소나무 선충을 microshoot의 바닥에 추가하십시오.

앞에서 설명한 대로 통제된 환경 조건에서 배양을 유지합니다. 체외 소나무 싹의 확립 및 감염은 소나무 선충과 공동 배양 한 달 이내에 클로로틱 바늘의 출현을 보여주었습니다.