Purkinje 세포에서 DNA 손상 반응을 조사하기 위한 소뇌 organotypic 배양 준비

시작하려면 생후 10일 된 새끼 쥐의 소뇌를 차가운 해부 완충액에서 얻습니다. 초과 완충액을 제거한 후 절단 플랫폼의 소뇌를 수직 방향으로 위치시킵니다. 350마이크로미터의 슬라이스 두께에서 시상 슬라이싱을 수행합니다.

미세한 홍채 주걱으로 조각을 부드럽게 분리하고 차가운 해부 매체에 넣습니다. 쌍안경 아래에서 두 개의 구부러진 홍채 주걱을 사용하여 조직 조각을 서로 조심스럽게 분리합니다. 배양의 경우, 장기의 내측 피질 핵 영역에 위치한 소뇌 지렁이에서 파생된 절편을 사용하십시오.

넓은 주걱을 사용하여 각 조직 절편을 배양 삽입물에 옮깁니다. 조직 절편을 운반하는 각 삽입물을 미리 예열된 매체가 들어 있는 6웰 플레이트의 웰로 이동합니다. 배양하는 동안 사용된 배지를 멸균 유리 피펫으로 흡입합니다.

5ml의 혈청학적 피펫을 사용하여 조직을 방해하지 않고 피펫의 끝이 우물 벽에 기대도록 하여 신선한 기초 배지 독수리 1ml를 추가합니다.