시작하려면 인큐베이터에서 성인 자웅동체 암컷 벌레가 들어있는 배양 플레이트를 제거합니다. 그-5 웜을 동기화 한 후 M9 버퍼로 웜을 5 번 세척합니다. 생후 1일 된 성인 수컷을 파종판에서 M9 완충액이 들어 있는 튜브로 옮깁니다.
씨를 뿌리지 않은 NGM 플레이트에 웜을 놓아 잔류 박테리아를 제거하고 분석 중 음식의 간섭을 방지합니다. 1.5% 오거, 25밀리몰 염화나트륨, 1.5밀리몰 트리스 염기 및 3.5밀리몰 트리스 염산염으로 화학 인력 분석 플레이트를 준비합니다. 화학 견인 용액의 오거를 완전히 용해될 때까지 전자레인지로 가열합니다.
냉각 후 피펫을 사용하여 화학 인력 오거 용액을 페트리 접시에 고르게 분배합니다. 오거 표면이 약간 건조될 수 있도록 깨끗한 곳에서 뚜껑을 열어 두십시오. 표면이 적절하게 건조되면 뚜껑을 닫습니다.
chemoattraction assay를 수행하려면 페트리 접시의 뚜껑과 밑면에 세 개의 뚜렷한 점을 표시하십시오. 1몰의 아지드화나트륨 2마이크로리터를 플레이트의 각 실험 및 대조 지점에 적용합니다. 웜 피커로 건강하고 자유롭게 움직이는 수컷 웜 20마리를 고르세요.
해부 현미경으로 시작점에서 웜을 방출합니다. 대조군 지점에 2마이크로리터의 M9 완충액을 빠르게 추가하고 뚜껑의 실험 지점에 2마이크로리터의 성 페로몬을 추가합니다. 뚜껑을 부드럽게 닫고 접시를 조용하고 온도가 안정적인 장소에 놓습니다.
30분 후 각 지점의 웜 수를 계산하여 분석 점수를 매깁니다. 화학주성에 대한 평가를 강화하기 위해 카메라를 사용하여 벌레의 궤적을 기록하십시오. 그-5 남성의 화학주성 지수는 지속적으로 0.5 이상이었으며, 이는 섹스 페로몬 공급원에 대한 강한 매력을 나타낸 반면, SRD-1 남성의 화학주성 지수는 약 0이었다.
성공적인 화학인력 분석은 그-5 남성이 시간이 지남에 따라 페로몬 공급원에 더 가깝게 이동하는 것을 보여주었으며, 시간, 거리, 속도, 직진도 및 방향 정확성을 나타내는 색상으로 구분된 궤적을 보여주었습니다.
