단백질 상호 작용의 위치를 파악하기 위해 PLA 도트 획득을 수행한 후 다른 조건의 이미지를 열어 ImageJ에서 분석을 위한 매개변수를 조정합니다. 매크로 프로그램의 데이터와 함께 이러한 매개변수를 판별하고 지정하십시오. 배경을 제거하려면 [프로세스]를 클릭하고 [배경 빼기]를 클릭합니다.
preview 함수를 사용하여 다양한 롤링 볼 반경을 테스트할 수 있습니다. 노이즈를 제거하려면 프로세스(Process), 노이즈(Noise) 및 얼룩 제거(Despeckle)를 클릭합니다. 그런 다음 핵 메뉴에서 Process 및 Smooth를 클릭하여 Smooth 기능을 적용하고 충전을 개선합니다.
이제 이미지, 유형, 8비트를 선택하여 8비트 이미지로 변환합니다. 그런 다음 Image, Adjust, 마지막으로 Threshold로 이동하여 임계값을 조정합니다. 임계값을 조정하여 이미지의 모든 핵 또는 점을 시각화하는 동시에 과포화 및 구조 붕괴를 방지합니다.
또한 값을 기록하고 다른 이미지에서 테스트하십시오. 마스크로 변환하려면 [프로세스], [이진] 및 [마스크로 변환]을 클릭합니다. 핵의 경우 Process, Binary, Fill Holes를 클릭한 다음 Process, Binary, Watershed를 차례로 클릭합니다.
PLA 점의 경우 Process(프로세스), Binary(이진) 및 Watershed(유역)를 클릭합니다. 핵을 세려면 다른 핵의 면적 또는 길이를 측정하여 평균 크기를 추정합니다. 대략적인 값을 사용하여 Analyze and Analyze Particles(분석 및 입자 분석)를 클릭하여 입자를 분석합니다.
크기를 15 무한대로 설정하고 옵션을 확인하십시오. 마스크 표시, 결과 표시, 결과 지우기, 관리자에 추가 및 가장자리 제외. PLA 점을 계산하려면 면적이나 반경을 측정하여 평균 크기를 추정합니다.
ROI 관리자의 각 ROI에 대해 Analyze 및 Analyze Particles를 클릭합니다. 크기를 0.02에서 3으로 설정합니다. 옵션을 선택하고, 마스크를 표시하고, 결과를 표시하고, 결과를 지우고, 요약하고, 가장자리에서 제외합니다.
이미지에 있는 각 핵의 핵당 점 수를 보여주는 결과를 저장합니다. Etoposide 처리 20분, 1시간 및 3시간 후 DNA 손상 후 핵에서 Nek4 Ku70 상호 작용이 대조군 및 DMSO 처리 세포에 비해 증가했습니다. 에토포시드 처리는 DMSO 대조군에 비해 Nek5 토포이소머라제 2-베타 상호작용을 유의하게 증가시켰다.
감마-H2AX 염색은 에토포시드 처리 20분 후 증가했으며 최대 3시간 동안 상승 상태를 유지했으며, 이는 지속적인 DNA 손상 반응을 나타냅니다.
