DNA 손상 부위의 단백질을 국소화하기 위한 Proximity Ligand Assay

DNA 손상 반응은 게놈 안정성과 무결성을 유지하는 세포 시스템입니다. 이 과정의 기능 장애는 암, 노화 관련 질병 및 만성 염증과 같은 여러 질병을 유발합니다. 우리의 목표는 이 과정에서 협력하는 단백질을 식별하는 것이며, 이를 통해 치료 통합을 위한 대체 표적을 식별할 수 있습니다.

DNA 손상 반응에 대한 단백질의 참여를 특성화하기 위해 일반적으로 DNA 손상의 마커인 H2AX 히스톤의 인산화 형태를 사용한 면역형광 연구가 적용됩니다. 또한, DNA 손상 후 공동 면역침전과 같은 단백질 수집 분석을 수행하여 신호 전달에서 단백질의 역할을 식별할 수 있습니다. 상호작용 연구는 일반적으로 면역침전 분석을 기반으로 하지만, 이는 in vitro 이며 상호작용 위치에 대한 정보를 제공하지 않습니다.

면역형광은 단백질의 세포 국소화에 대한 정보를 제공할 수 있지만 상호 작용을 증명하는 것은 어려울 수 있으며 현미경의 해상도에 따라 달라집니다. 여기서는 근접 리간드 분석과 Gamma-H2AX 염색을 결합한 간단한 프로토콜로 DNA 손상 맥락에서 단백질 상호 작용의 공간적 및 시간적 특성을 분석할 수 있음을 보여줍니다. 또한 데이터 분석을 위한 사용자 친화적인 매크로를 제공했습니다.