시작하려면 트리글리신 용액을 섭씨 60도에서 배양합니다. 냉동고에서 3개의 RPA 펠릿 스트립 튜브를 제거합니다. 스트립 튜브를 실험실 벤치에 부드럽게 두드려 흰색 펠릿을 제거합니다.
3개의 펠릿을 모두 1.5 밀리리터의 마이크로 원심분리기 튜브에 옮기고, A.피펫팅은 25 마이크로리터의 뉴클레아제가 없는 물을 넣어 스트립 튜브에 남아 있는 RPA 분말을 헹굽니다. 헹굼 용액을 새로운 1.5 밀리리터 마이크로 원심 분리기 튜브 B로 옮긴 다음 10 마이크로 리터의 0.57 몰 트리글리신 용액과 10 마이크로 리터의 프라이머 혼합물을 마스터 믹스 튜브 B에 추가합니다. 다음으로, 5배 RPA 버퍼 28.4마이크로리터를 마스터 믹스 튜브 B.Mix에 여러 번 강하게 두드리거나 흔들어 철저히 추가합니다.
튜브 A에 수집된 펠릿을 마스터 믹스 튜브 B로 옮기고 튜브를 뒤집거나 손가락으로 튜브 바닥을 여러 번 두드려 혼합합니다. 용액이 균질하고 단상 형태로 나타나는지 관찰합니다. 튜브를 얼음 위에 놓습니다.
그런 다음 0.71 마이크로리터의 역전사 효소와 2.84 마이크로리터의 RNase H를 마스터 믹스 튜브에 추가합니다. 마스터 믹스 튜브를 위아래로 여러 번 부드럽게 두드리거나 뒤집습니다. 튜브를 얼음 위에 놓기 전에 튜브를 잠시 회전시킵니다.
이제 8.4 마이크로 리터의 마스터 믹스 용액을 10 개의 사전 냉각 된 1.5 밀리리터 튜브에 분주하고 튜브를 얼음 위에 놓습니다. 부분 표본 후 액체 질소에 잠긴 금속 랙에 튜브를 넣어 동결 건조를 준비합니다. 동결 건조기에서 수집기와 선반 온도를 확인하십시오.
이제 금속 랙의 열린 튜브를 청소용 백지로 덮습니다. 열린 튜브와 함께 금속 랙을 동결 건조기 선반에 놓고 선반 문을 닫습니다. 그런 다음 원하는 프로그램을 선택하고 시작을 누릅니다.
2차 건조 단계 30분 후 중지를 누릅니다. 진공 방출 밸브를 열어 압력을 해제합니다. 선반에서 랙을 제거한 후 즉시 튜브의 캡을 씌우십시오.
