Isolation and Processing of Whole-Mount Retinas for Immunostaining of Mouse Retinal Ganglion Cells(마우스 망막 신경절 세포의 면역염색을 위한 전체 마운트 망막의 분리 및 처리)

적출 및 안구 처리를 위해 자궁 경부 탈구를 사용하여 쥐를 안락사시킨 후 절개 중 방향을 확인하기 위해 파란색 마커를 사용하여 안구의 등쪽 각막 가장자리를 표시합니다. 가위를 사용하여 안구에 붙어있는 잔여 근육 조직을 제거합니다. 그런 다음 적출된 안구를 PBS로 채워진 2밀리리터의 둥근 바닥 마이크로 원심분리기 튜브에 옮깁니다.

이제 안구를 갓 준비한 4% 파라포름알데히드가 들어 있는 다른 2밀리리터 튜브에 넣어 섭씨 4도에서 10분 동안 고정합니다. 해부 현미경으로 미세한 집게를 사용하여 각막을 작게 절개합니다. 안구를 다시 고정액에 넣고 조직 형태를 보존하기 위해 섭씨 4도에서 3시간 동안 배양합니다.

각막과 수정체를 제거하려면 가는 수술용 가위를 사용하여 각막과 공막 사이의 경계인 각막 림부 주위를 약 1mm의 작은 절개를 합니다. 각막 둘레를 조심스럽게 자르고 완전히 절제하여 아래 구조를 노출시킵니다. 그런 다음 미세한 집게를 사용하여 망막이 손상되지 않도록 주변 조직에서 수정체를 부드럽게 잡고 조심스럽게 들어 올립니다.

공막 절개의 경우 미세한 안과 가위로 공막의 정확한 틈을 잘라 후속 박리를 용이하게 합니다. 다음으로, 망막 분리를 위해 공막과 망막 사이의 절개 부위에 톱니 겸자를 삽입합니다. 조직이 찢어지는 것을 방지하기 위해 과도한 힘을 가하지 않도록 공막의 가장자리를 부드럽게 잡습니다.

공막과 망막 사이의 경계를 따라 겸자를 움직여 절개 부위를 점차적으로 확대합니다. 겸자의 치아 부분을 사용하여 공막을 손상시키지 않고 망막에서 조심스럽게 분리합니다. 이제 날카로운 가위를 사용하여 망막을 대략 같은 크기의 4개의 플랩으로 나눕니다.

부드러운 강모 브러시로 절개된 망막을 부드럽게 펴고 표면의 이물질을 꼼꼼하게 제거합니다.