AI 기반 프로그램을 사용한 마우스 망막 신경절 세포의 면역염색 및 자동 계수

마우스에서 마운트 망막 전체를 분리한 후 PBS에서 5분 동안 부드러운 교반으로 망막을 세척합니다. 세척된 망막을 차단 완충액에 30분 동안 담그십시오. 배양 후 차단 완충액을 1차 항체 BRN3A로 교체합니다.

특정 항원 항체가 결합할 수 있도록 섭씨 4도에서 밤새 망막을 배양합니다. 다음 날, PBS로 망막을 5분씩 3회 세척한 후 Alexa 594 또는 Alexa 488 접합 항토끼 2차 항체로 2시간 동안 배양하여 표적 항원을 시각화합니다. 면역염색된 망막을 PBS로 세척한 후 유리 현미경 슬라이드에 부드럽게 옮깁니다.

접힘이나 뒤틀림을 최소화하기 위해 망막을 평평하게 만듭니다. 장착된 망막 위에 커버 슬립을 놓고 기포가 형성되지 않도록 합니다. GitHub 링크에서 코드를 다운로드합니다.

그런 다음 클라우드 디스크에서 필요한 파일을 다운로드하고 압축을 풉니다. 구성을 찾습니다. ini 파일을 열고 해당 내용을 수정하여 yolov5_cpu 경로를 가리키도록 합니다.

그런 다음 사용자 인터페이스를 클릭합니다. EXE를 사용하여 그래픽 인터페이스를 엽니다. pmse_plus 있는지 확인하십시오.

pt 모델 파일이 C 드라이브의 루트 디렉토리에 있는 경우 yolov5 폴더의 weights 폴더에서 복사합니다. 세포 계수 소프트웨어를 엽니다. Open Image(이미지 열기)를 클릭하여 이미지를 가져온 다음 Run(실행)을 클릭하여 소프트웨어가 자동으로 셀을 계산하도록 합니다.

자동화된 세포 세는 소프트웨어는 정확하게 정상적인 망막에 있는 대략 45, 000에서 50, 000의 망막 신경절에 비교된 뜻깊은 세포 손실을 보여주는 N-메틸-D-아스파르테이트에 의하여 유도된 녹내장 쥐 모형에 있는 15의 231의 망막 신경절 세포를 확인했다.