시작하려면 NMR 분광계를 작동하는 컴퓨터의 디렉토리에 NMR 펄스 프로그램을 다운로드하고 TopSpin 버전을 조정합니다. NMR 모양의 펄스를 디렉토리에 다운로드하고 TopSpin 버전이 그에 따라 업데이트되었는지 확인합니다. 스펙트럼 폭과 적절한 수집 시간을 결정한 후 TopSpin 소프트웨어의 edc를 새 디렉토리에 입력하여 HSQC 실험을 복사합니다.
ased를 입력하여 펄스 시퀀스 파라미터를 열려면 PULPROG 파라미터 옆에 있는 세 개의 점을 클릭하여 펄스 프로그램을 질소-15 R1 rho 실험으로 변경합니다. 펄스 프로그램을 두 번 클릭하고 PULPROG를 데이터 세트로 설정을 클릭한 다음 확인을 눌러 확인합니다. ased를 입력하여 펄스 시퀀스 매개변수를 엽니다. 누락된 모든 기울기 강도와 기울기 길이를 pulse sequence에 지정된 대로 입력합니다.
다음으로, 수집 매개변수 창에서 질소-15 TD 항목의 절반인 루프 카운터 L3을 입력합니다. 루프 카운터 L6에 대해 이완 곡선을 맞추기 위해 기록된 이완 데이터 포인트의 수를 입력합니다. 단열 TanhTan_half을 설정합니다.
nl 펄스를 질소-15 SP8 펄스의 모양으로 합니다. 그런 다음 단열 TanhTan_half2nd을 설정합니다. nl 펄스를 질소-15 SP9 펄스의 모양으로 사용합니다.
맥박 길이가 3, 000 마이크로세컨드로 놓인 P8를 가진 adiabaticity를 위해 충분히 긴다는 것을 지키십시오. 그런 다음 스캔 간 복구 지연 시간 D1을 최소 2초 이상으로 설정합니다. 더미 스캔을 64 이상으로 설정합니다.
시작점으로 스캔 횟수를 4로 설정하고 신호 대 잡음비가 너무 낮으면 4의 배수를 사용합니다. O1을 보정된 캐리어 주파수로, O2P를 176ppm으로 설정하고, 양성자 질소-15 HSQC 실험에서 O3P를 복사합니다. 이제 펄스 길이 P7을 이전에 보정한 90도 펄스 길이로 설정합니다.
그런 다음 90도 펄스의 펄스 전력 수준을 PLW3 및 PLW7에 복사합니다. 그런 다음 펄스 길이 P1 및 P19를 90도 양성자 펄스 길이로 설정합니다. 간접 차원의 증분 수를 설정합니다. TD는 L3에 L6을 2씩 표시합니다. 다음으로, 성형된 펄스 SP5를 I-BURP2 형상으로 설정하고 펄스 길이 P15를 2, 000마이크로초로 설정합니다.
그런 다음 TopSpin 펄스 시퀀스 매개변수 창에서 I-BURP2 모양의 펄스 옆에 있는 E를 클릭하여 Shape Tool 디스플레이를 엽니다. 성형된 펄스를 시뮬레이션하려면 NMR 시뮬레이션 시작 버튼을 클릭합니다. 시뮬레이션 창에서 Shaped 펄스 길이와 회전 각도를 확인하고 NMR SIM 시작을 클릭하여 계속 진행합니다.
시뮬레이션에서 여기 범위를 확인하고 물의 여기를 피하면서 양성자 스펙트럼 분산을 커버할 수 있는 적절한 I-BURP2 펄스 길이를 선택합니다. P15를 최상의 I-BURP2 펄스가 있는 시뮬레이션 창의 성형 펄스 길이로 설정합니다. 이제 SPOFFS5 설정하여 I-BURP2 펄스의 캐리어 주파수를 조정하고 여기 범위를 왼쪽이나 오른쪽으로 이동하여 물 자화 방해를 방지합니다.
그런 다음 Bruker Shape Tool을 열고 Start NMR Simulation(NMR 시뮬레이션 시작)을 클릭하여 형성된 펄스의 적절한 전력 수준을 결정합니다. I-BURP2 펄스 길이를 성형 펄스 길이로 설정하고 시뮬레이션 창에 표시된 부드러운 직사각형 90도 양성자 펄스 길이를 확인합니다. calcpowlev를 입력하여 하드 90도 프로톤 펄스와 부드러운 직사각형 90도 프로톤 펄스 간의 전력 수준 차이(데시벨)를 계산합니다.
하드 90도 양성자 펄스의 전력 수준을 SPW5에 복사하고 기억된 차이를 데시벨 단위로 추가하여 조정합니다. 스핀 잠금의 전력 수준을 결정하려면 해당 90도 질소-15 펄스 길이를 계산하십시오. calcpowlev를 사용하여 스핀 잠금 전력과 하드 90도 질소-15 펄스 간의 전력 차이를 데시벨로 계산합니다.
하드 90도 질소-15 펄스의 전력 수준을 PLW7에 복사하고 계산된 전력 차이를 추가하여 스핀 잠금 전력 수준 PLW8을 조정합니다. 스핀 잠금 PLW8의 전원 수준을 SPW8 및 SPW9의 전원 수준으로 복사합니다. 질소-15 디커플링의 전력 수준을 결정하려면 calcpowlev를 사용하여 90도 질소-15 디커플링 펄스와 90도 질소-15 하드 펄스의 전력 차이를 계산합니다.
90도 질소-15 하드 펄스 PLW7의 전력 수준을 디커플링 전력 수준 PLW31에 복사하고 계산된 전력 차이를 데시벨 단위로 추가하여 조정합니다. 온도 보상의 경우 펄스 프로그램에서 line define TEMP_ 포함합니다. P18을 질소-15 R1 rho 실험에 사용된 스핀 잠금의 최대 기간으로 설정합니다.
질소-15의 경우, 탄소-13 표지 샘플에는 펄스 프로그램의 라인 정의 LABEL_CN이 포함됩니다. P4를 계산된 펄스 길이로 설정합니다. calcpowlev를 사용하여 P4와 탄소-13 하드 펄스 사이의 전력 차이(데시벨)를 계산합니다.
탄소-13 하드 펄스의 전력 수준을 PLW4에 복사하고 계산된 전력 차이를 데시벨 단위로 추가합니다. PLW4를 PLW2에 복사합니다. 샘플링에 적합한 완화 지연을 결정하기 위해 처음 8개의 자유 유도 감쇠(FID)를 실행하고 처리합니다.
가장 긴 지연 실험의 피크 강도가 가장 짧은 지연 실험에 비해 e에 대해 하나 이상으로 감소하지만 25% 이상으로 감소하지 않는 vplist 항목을 선택합니다. 명령줄에 rga를 입력하여 수신기 게인을 확인합니다. 명령줄에 zg를 입력하여 nitrogen-15 R1 rho 실험의 테스트 실행을 시작합니다.
모든 지연에 대해 물 신호가 억제되어 있는지 확인하십시오. 또한 직교 검출 체계의 두 번째 증분인 증분 9를 확인합니다.
