제어된 힘 증폭을 위한 제브라피시 심장 내강의 자기 비드 이식: 심장 판막 개발의 기계적 전달을 밝히기

먼저, 0.02%트리카인이 첨가된 다니오스 배지가 함유된 페트리 접시에 3-6개의 탈막화된 배아를 넣습니다. 배아가 마취되면 최소한의 매체로 35 x 15mm 유리 바닥 접시에 옮깁니다. 트리카인을 함유한 300-400마이크로리터의 1%저융점 아가로스를 빠르게 첨가하여 돔을 만듭니다.

겸자를 사용하여 배아가 복부 쪽이 위를 향하도록 하여 유리와 똑바로 접촉하도록 배치합니다. 다음으로, 아가로스 위에 약 0.5 마이크로리터의 자성 비드를 증착합니다. 그런 다음 아가로스와 비드 위에 0.02% 트리카인이 함유된 Danios 배지 한 방울을 추가합니다.

샘플과 심장 크기에 따라 적절한 비드를 선택하고 핀셋을 사용하여 배아 난황 위에 놓습니다. 핀셋의 한쪽 팔을 사용하여 난황 중앙에 난황 병변 또는 구멍을 만듭니다. 구슬을 병변에 넣고 정맥 극에 도달할 때까지 전방으로 부드럽게 밀어 넣습니다.

흡입만으로는 비드를 이동하기에 충분하지 않은 경우 심낭 쪽으로 부드럽게 밀어 넣고 심낭강으로 안내할 수 있는 충분한 압력을 가합니다. 마그네틱 비드를 배아에 이식한 후 PTU를 함유한 1-2밀리리터의 Danios 배지를 유리 바닥 접시에 추가합니다. 그런 다음 핀셋을 사용하여 낮은 녹는점 아가로스를 부드럽게 끊고 배아를 조심스럽게 제거합니다.

마지막으로 파스퇴르 피펫을 사용하여 배아를 PTU가 있는 Danios 배지가 포함된 새로운 페트리 접시에 옮기고 섭씨 28.5도에서 회복 및 발달하도록 합니다. 마그네틱 비드는 제브라피시 심장의 심방 내에 올바르게 위치하여 혈류가 방해받지 않고 심장 벽이 유지된 상태에서 출혈이 관찰되지 않도록 했습니다.