이 연구는 NSF (HBCU 업 연구 개시 수상, HRD 1401426 및 EPSCoR EPS-0814251)와 NIH (COBRE 1P20GM103653-01A1)에 의해 지원 됩니다. 캔사스에서 델라웨어 INBRE III 6404 친교에 의해 지원 됩니다.

아래에 주어진 프로토콜 (초기) embryogenesis, 동안 BPA 노출의 효과 테스트를 표준화 하 고 BPS, BPF, 또는 병아리 배아 뉴런에서 다른 EDC와 함께 사용 하기 위해 수정할 수 있습니다.
이 프로토콜에는 델라웨어 주립 대학의 제도적 정책 및 조류 배아에 대 한 NIH 정책 다음과 같습니다. 프로토콜은 DSU의 재료와 화학 안전 지침 확인입니다.
1. 소재 설정
<ol><li>1 m m 재고 솔루션 (10% 에타 놀의 mL 당 0.23 m g)을 물에 10%의 에탄올 (v/v)에서 BPA (m.w. 228.29)을 분해. Neurobasal 매체에 후속 희석 (0.1 µ M, 0.5 µ M, 1 µ M, 5 µ M 그리고 10 µ M)를 확인 합니다. 주의: BPA는 환경 독 소 그리고 분말을 처리할 때 주의 행사 해야 합니다.</li>
	<li>37 ° c.에 상용 탁상 계란 인큐베이터에서 병아리 알 품 어 E7 배아에 대 한 일 동안 알을 품 어.</li>
	<li>3 ~ 4 h 70% 에탄올에 몸을 담글 하 여 측정 Sterilize MEAs의 필요한 수를 준비 하 고 세 번 약 10 mL BSLII 후드에 멸 균 증류수에 씻어. 참고:는 MEAs는 8 x 8 표에 배열 64 성공 백 금 전극 포함. 전극 직경 30 µ m 이며, 전극 사이의 간격 200 µ m 이다. 로이 MEA의 부식으로 이어질 것입니다 MEAs는 살 균에 대 한 변성된 에탄올을 사용 하지 마십시오.</li>
	<li>(무 균 상태를 유지)에 뚜껑 살 균 컨테이너 내부 MEAs 장소 테이블 상단 인큐베이터로 이동. 55 ° c.에 적어도 6 시간 동안 구워 이 단계는 적절 한 살 균을 위해 중요 하 고 온도 60 ° c.를 초과 하지 않아야 합니다. 무 균 유지, 추가 사용까지 MEAs 스토리지에 대 한 BSLII 후드를 포함 하는 접시를 이동 합니다. 참고: 우리는 플라스틱 뚜껑 오븐 안전한 유리 베이킹 접시 사용 하 고 표면 70% 에탄올과 건조에 대 한 BSLII 후드에서 소독.</li>
	<li>약 수 엑스트라 세포 매트릭스 ECM 솔루션입니다. 밤새 4 ° C에서 유리병을 녹여 및 동결-20 ° c.에 100 µ L aliquots 참고: ECM 냉동 배송입니다. ECM 해야 하지 주어질 실내 온도에 준비까지 코트와 실내 온도에 polymerizes, 그것 생산, 일단 코트 수는 없습니다. ECM 성장 인자 없이 알 수 없는 요인으로 인해 추가 효과 방지 하기 위해 선호 된다.</li>
	<li>모든 해 부 악기 (Dumont #5 집게, 곡선된 겸 자, 작은 위, 및 봄이 위) 소독 자체 씰링 소재 70% 에탄올과 해 부 요리를 코팅 하 고 절 개 후드에 말리.</li>
</ol>2. 병아리 배아 신경 문화와 네트워크 활동
<ol><li>도금의 날, 제거 된 유리병-20 ° C 냉동 고에서 ECM의 70% 에탄올 스프레이 얼음에. BSLII 후드 안쪽에 300 µ L 찬 neurobasal 매체를 추가 하 여 25% 희석.</li>
	<li>p 200를 사용 하 여 pipetteman을 터치 전극 표면에 박막을 떠나 즉시 제거 돌보는 MEA의 중심에 25 %ECM 100 µ L를 추가 합니다. MEA를 커버 하 고 신경 세포를 접시에 준비까지 CO2 배양 기 (37 ° C, 5% CO2)에 배치.</li>
	<li>70% 에탄올과 E7 달걀 (배아 7 일, 7 일 동안 37 ° C에서 incubated)의 외피를 소독. 감기 균 행 크의 균형 염 솔루션 (HBSS) 칼슘 없이 포함 된 Sylgard 하단 해 부 접시에 배아를 목을 벨. 눈 주위 고 눈알을 제거. 집게를 잘 몬 트 # 5를 사용 하 여 봄이 위 복 부에 절 개를 확인 하 고 개 및 광학 tectum 폭로 피부의 바깥 층을 제거. 껍질 하 고 신중 하 게 pial 멤브레인을 제거 합니다. 다른 페 트리 접시에는 개를 전송 하 고 봄이 위 약 2 m m의 작은 조각으로 잘라. 참고: 거기 해서는 안됩니다 pial 막의 제거 후에 개에 연결 된 어떤 혈관. 비록 우리 악기와 해 부 지역 70% 에탄올으로 소독 철저 하 게은으로 절 개 후드 밖에 서 수행 하는 경우 상당히 좋은 결과 얻은 그것은 메 마른 절 개 후드, 해 부를 수행 하는 것이 좋습니다 가능한 경우, .</li>
	<li>살 균 전송 피 펫을 사용 하 여, 15 mL 원심 분리기 관으로 개 조각을 수집 하 고 제거 가능한 HBSS 개 싱크 분리기 튜브의 바닥의 조각을 시키는 후.</li>
	<li>0.05%의 1 mL을 추가 트립 신/EDTA (37 ° C에 미리 예 열)와 15 분 동안 37 ° C에서 품 어.</li>
	<li>파스퇴르 피 펫을 사용 하 여 신중 하 게 조직 조각을 방해 하지 않고 트립 신을 제거 하 고 1 mL neurobasal 매체를 추가. 조직 싱크대 바닥에 조각 하 게 하 고 매체를 제거 합니다. 이 세척을 한 번 더 반복 합니다. 이 단계는 트립 신/EDTA를 씻어.</li>
	<li>Neurobasal 매체의 2 개 mL를 추가 하 고 분쇄 시작. 분쇄는 메 마른 불 광택 파스퇴르 피 펫을 복용 하 고 그것을 통해 조직의 여러 번 통과 부드럽게 조직의 아니 더 많은 조각을 볼 수 있습니다 때까지 포함 한다. 어떤 부분이 반복된 패스 후 남아 있으면 그냥 두고 바닥에 정착. 참고: 분쇄-거품은 형성 중지 하 고 열망 하 여 제거 하는 동안 볼만 하지 마십시오.</li>
	<li>Neurobasal 매체와 다시 중단된 셀 1시 10분 희석 하 고 Trypan Blue 염료와는 hemocytometer를 사용 하 여 가능한 셀. 믹스 50 µ L 희석된 셀의 0.5 mL 원심 분리기 튜브에서 Trypan 블루 솔루션의 50 µ L로. hemacytometer에는 coverslip에 배치 후 10 µ L을 추가 하 고 밝은 명확한 셀 (파란색 셀 죽 었 고 계산 한다). 참고: 단일 E7 광섬유 tectum 범위 1와 5 x 107 셀/mL 사이에서 일반적인 셀 번호.</li>
	<li>천연 접시 ECM에 세포 코팅 MEAs 2200 셀/평방 mm의 밀도. 우리의 나 시스템에 대 한이 MEA 당 약 130000 셀 변환 됩니다. 밤새 셀 첨부 파일 및 neurite 연장 (그림 1)에 대 한 CO2 인큐베이터에서 MEAs을 1 ml는 MEA에 볼륨을가지고 neurobasal 매체를 추가 합니다. 참고: 다른 분야와 전극 숫자의 MEAs에 대 한 다른 셀 밀도 수 시도-일반적으로, 더 높은 세포 조밀도 결과 더 큰 네트워크 활동, 하지만 또한 짧은 살린된 문화.</li>
	<li>다음 날, neurobasal 매체에 10 µ M의 최종 농도에 대우 MEA 단계 1.1에서에서 만든 1 m m 재고에서 BPA를 추가 합니다. 제어 MEA 물 (v/v) 솔루션에서 10% 에탄올의 동일한 볼륨을 추가 합니다.</li>
	<li>대체 보냈다 매체 neurobasal 매체 포함 10 µ M BPA 매일까지 7 일에서 생체 외에서 (7DIV) 그 후, 매일 네트워크 활동 증가. 참고: 네트워크 활동 증가, 신진 대사 활동 증가 하 고 미디어 변경 내용을 더 자주 필요. 중간을 오렌지를 설정 하지 마십시오.</li>
</ol>3. 신경 네트워크 활동을 기록
<ol><li>수집의 날, 신선한 neurobasal 매체와 문화 매체를 교환 하 고 녹음 하기 전에 2 h의 최소 CO2 배양 기에는 MEAs를 반환 합니다. 레코딩 소프트웨어를 시작 하 고 37 ° C에 온도 아이콘을 클릭 하 여는 MEA의 온도 설정 (보충 그림 3.1a-b). 참고: 녹음 도금의 3 일 일찍 시작할 수 있습니다 및 문화 살아 있는 계속할 수 있습니다.</li>
	<li>(아래 왼쪽된 창 패널에서 스트림) "뮤 즈" 아이콘을 마우스 오른쪽 단추로 클릭 하 여 인수 매개 변수를 놓으십시오, "추가 처리" 및 "스파이크 탐지기"를 선택 하 고 팝업 창에서에서 확인을 클릭 합니다. "탐지기 스파이크 (6 x 표준)" 파일 이름 아래에 나타납니다 (보충 그림 3.2a-b).</li>
	<li>다음 스파이크 검출기에 오른쪽 클릭, "추가 처리" 및 "파열 탐지기"를 선택 하 고 팝업 창에서에서 확인을 클릭 합니다. "탐지기 버스트" (ISI) 뮤 즈 아이콘 아래에 나타납니다 (보충 그림 3.3 a-b).</li>
	<li>다음 버스트 검출기에 오른쪽 클릭, "추가 처리"와 "신경 통계 컴파일러." 선택 팝업 창에서에서 파일 헤더, 잘 통계 집계 및 Synchrony 선택 되었는지 확인 합니다. 클릭 확인입니다. "통계 컴파일러" 아래에 표시 됩니다 (보충 그림 3.4 a-b). 참고:이 적응형 임계값 (6 x 표준 필터), 5, 평균 발사 속도 감지 10에 스파이크의 최소한 100 ms에 간 스파이크 간격을 설정 합니다 synchrony 매개 변수 20 ms에서와 최소 스파이크 속도 분 당 0.083333 스파이크에서 s.</li>
	<li>하단에 시계 아이콘을 클릭 하 여 녹음 시간 5 분 (300, 000 밀리초)에 대 한 예약된 녹화를 설정 합니다. 이 모든 5.1 분을 기록 하 고 5 분 동안 기록에 대 한 설정 섹션에서 정보를 변경 하 여 이루어집니다. 이 즉시 시작 될 것 이다 하 고 한 번 실행 될 것 이다 (보충 그림 3.5).</li>
	<li>MEA의 온도 MEA를 이동 하기 전에 37 ° C를 도달 했습니다 확인 하십시오. 인큐베이터에서는 MEA를 제거 하 고 기록 단위에 배치는 MEA를 잠글. 시작 예정 된 녹음 섹션에서 시작 레코드 또는 "파일 재생" 창에서 기록 아이콘을 클릭 하 여 네트워크 활동을 기록 합니다. 일반적으로, 5 분 (300, 000 밀리초)의 녹화 시간, 충분 하다 비록 더 이상 녹음 최대 10 분의 얻을 수 있습니다.</li>
	<li>녹음 후 인큐베이터에는 MEA를 반환 합니다. 참고: 합니다 주의 불 임을 유지 하 고는 MEA가 인큐베이터 밖에 시간을 최소화 합니다.</li>
</ol>4. 데이터 분석
<ol><li>오프 라인 레코딩 소프트웨어를 사용 하 여 원시 데이터의 분석을 수행할 수 있습니다. 파일 풀 다운 메뉴 클릭 하 고 녹음을 엽니다. 원시 데이터 파일 분석을 선택 합니다. 필요한 급격히 매개 변수 캡처 원시 녹음 재생.</li>
	<li>스파이크의 평균 수를 얻으려면 스파이크 검출기 모듈을 사용 하 고 Synchrony 인덱스를 얻기위한 신경 통계 컴파일러 모듈을 사용 합니다.</li>
	<li>스파이크 검출기, 버스트 검출기 및 (제 3) 하기 전에 통계 컴파일러 모듈 로드 합니다.</li>
	<li>스파이크 검출기, 버스트 검출기 및 통계 컴파일러 모듈 창 내에서 풀 다운 메뉴에서 스파이크 목록, 네트워크 버스트 목록 및 고급 통계, 각각 선택 합니다.</li>
	<li>감독된 폴더에.csv 파일을 만듭니다 있는 데이터 파일을 기록 하려면 기록 단추를 클릭 합니다. 스파이크 매개 변수-스파이크와 Synchrony 인덱스의 총 수-.csv 파일에 기록 됩니다. 참고:이 프로세서 시간과 컴퓨터 리소스를 사용할 수 원시 데이터를 기록 하는 동안 실시간으로 분석 권장 하지 않습니다.</li>
</ol>

<ol>
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저자 들은 아무 경쟁 관심사를 선언 합니다.

급속 한 성장 및 embryogenesis 등 개발의 단계는 BPA를 포함 한 다양 일 분 비 방해 화합물의 해로운 효과에 특히 취약 합니다. 우리 생체 외에서 척추 신경 네트워크 모델에 BPA 노출의 효과 연구에 대 한 상세한 프로토콜을 제공 합니다. 이 프로토콜을 사용 하 여, 우리는 BPA synchrony 인덱스 개발 신경 네트워크 (그림 2-b)로 서 스파이크 속도 낮추고 설립.
우리의 방법론은 BPA 노출 초기 embryogenesis 동안 공부 고 다른 EDCs의 효과 연구를 쉽게 적용할 수 있습니다. 여자에서 배아 신경 문화 쥐 또는 마우스를 포함 하 여 다른 척 추가 있는 모델에 비해 상대적으로 쉽게 설정 수 있습니다. 또한, 필요는 없습니다 별도 동물 방-실험실 벤치에 간단한 보육은 이러한 분석을 수행 하기에 충분 한입니다. 우리는 네트워크 활동에 EDC, BPA의 영향을 평가 하기 위한 멀티 전극 시스템 (MEA)의 사용을 설명 합니다. 여기에 설명 된 프로토콜은 다른 시스템에 적용할 수 있습니다. 이 프로토콜의 중요 한 측면은 무 균의 유지 보수. 이 포함 하는 무 균 조건 하에서 배아의 해 부-70% 에탄올과 살 균 행 크의 균형 염 솔루션의 사용 악기를 살 균 하는 것입니다 충분 한. 데이터가 주 기간 동안 수집, 그것은 살 균 처리는 MEAs의 유지에 중요 한입니다. 일단 설립 신경 문화 수 수 경작 장기-최대 3 개월-고 따라서 EDCs 및 신경 네트워킹에 다른 화합물에 장기 노출 공부 하는 데 유용. 이 프로토콜의 또 다른 중요 한 측면은 도금을 해 부에서 시간. 최적의 시간은 trypsin으로 직물의 외피를 포함 하 여 30 분입니다. 더 이상 시간을, 셀의 가난한 생존.
여기 어떤 화학 또는 행동과 신경 기능에 영향을 주는 약물의 평가에 적용할 수 있는 기본 프로토콜을 설명 합니다. 여기, 우리는 m m2당 2200 셀의 셀 밀도 사용 그러나,이 수정할 수 및 다른 셀 밀도 사용 될 수 있다. 일반적으로, 우리는 셀 밀도 증가 네트워크 활동-짧은 시간에 더 많은 스파이크 나타났습니다. 방법 설명, 네트워크 활동에 화학 물질의 효과 사정에 매우 유용 하지만 한계는. 방법의 가장 큰 한계 중 하나입니다 이러한 생체 외에서 문화 2 차원 척추 뇌의 3 차원 구조를 반영 하지 않을 수 있습니다. 이 슬라이스 기록을 사용 하 여 극복할 수 있습니다. 또 다른 대안은 이다, 발전 병아리 태아 치료를 적용할 의미 계란15의 광범위 한 끝에 작은 창, 치료 처방의 끝에 뇌를 해 부하는 vibratome에 두꺼운 부분 고 대 한 MEA에 배치 네트워크 활동을 기록합니다.
우리의 프로토콜 네트워크 활동의 개발에 EDCs의 효력의 검사를 가능 하 게 하 고 이러한 화학 물질의 효과 대 한 기계적으로의 탐험을 제공 한다는 점에서 중요 하다.

4, 4 '-Isopropylidenediphenol, 일반적으로 언급으로 Bisphenol-A 또는 BPA, 산화 첨가제에에서 있으면 다양 한 폴 리 카보 네이트 및 열 종이에서 배열 하는 에폭시 수 지 기반 제품, Cd, 및 균열 증거 유리 안쪽에의 코팅 음료 캔. BPA 에스트로겐1을 내 분 비 방해 대리인 것으로 알려져 있다, 비록 그것의 병에 효과에 BPA 매일 우연한 노출 때문에 대 한 연구는 주로 마지막 10-15 년에 밖으로 나와. BPA 노출도 낮은 레벨의 결과 어머니2,3의 노출을 통해 embryogenesis 동안 포함 한 초기 발달 기간에 가장 심오한. Utero에서 노출 여성 태아의 내 분 비 방해 화학 물질에는 또한 유 방 암4,5질에서 증가 질병 민감성에 연결 되었다. 동물 연구는 BPA에 노출 리드 비정형 뇌 구조와 기능 이상이 동작6에 설명 했다. 결과적으로, 유아 젖 병에 BPA 사용 하 여 유럽과 북미 지역, FDA 등에서 가장 규제 기관에 의해 금지 되었습니다. 규정 준수, 많은 제조 업체 4, 4'-sulfonyldiphenol 또는 bisphenol-S (BPS)로 전환 합니다. BPA와 BPS 인 구조 아날로그와 최근 보고서 estrogenic 전사7BPS의 유사한 효능을 보였다는 사실에 근거한 BPA 기준으로이 화합물의 독성 연구 중요 하다.
여기는 병아리 태아 척추 모델을 사용 하 여 신경 세포의 네트워크에 BPA (및 다른 EDCs)의 효과 테스트 하는 프로토콜에 설명 합니다. 생체 외에서 문화 뉴런의 시 냅 스 연락처를 형성 하 고 (스파이크 라고도 함) 하는 활동 전위를 생성. 이러한 문화의 급격히 활동 다중 전극 배열 (MEA) 시스템을 사용 하 여 기록할 수 있습니다. 스파이크는 synchrony에 있을 때 그들은 서로 5 ms 이내 발생으로 간주 됩니다. 결국 동기화 초기 랜덤 급격히 활동 신경 네트워크8,9개발의 핵심 기능입니다. Synchrony 다양 한 방법을 사용 하 여 측정 될 수 있다 그리고 몇 가지 알고리즘 문학9,,1011에 설명 되어 있습니다. 우리의 분석에서 우리는 MEA 수집 시스템 드라이브 레코딩 소프트웨어에 통합 되어 있는 동료와 Paiva12 에 의해 개발 된 알고리즘을 사용 합니다. 미 발달 병아리 뉴런의 강력한 스파이크 활동 신경 네트워크 활동13에 BPA의 효과 공부에 대 한 프로토 타입을 제공 합니다. 관찰 기록 급격히 활동 다중 전극 배열 사용 하 여, BPA 노출 신경 스파이크 synchrony9,14의 개발을 억제 합니다. 여기, 우리는 병아리 배아 문화에 신경 스파이크 synchrony의 개발에 대표적인 결과 함께 문화에 병아리 태아 신경에 BPA 노출 공부에 대 한 상세한 방법론을 제공 합니다.

<table style="border-collapse:collapse;width:903pt" width="1204">
	<colgroup>
		<col style="width:245pt" width="326" />
		<col style="width:164pt" width="218" />
		<col style="width:258pt" width="344" />
		<col style="width:237pt" width="316" />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl22" height="21" style="width:245pt;height:15.75pt" width="326">#5 foreceps</td>
			<td class="xl22" style="width:164pt" width="218">Fine Science Tools</td>
			<td class="xl20" style="width:258pt" width="344">11251-10</td>
			<td class="xl20" style="width:237pt" width="316"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl22" height="21" style="width:245pt;height:15.75pt" width="326">Axion Muse MEA</td>
			<td class="xl22" style="width:164pt" width="218">Axion Biosystems</td>
			<td class="xl22" style="width:258pt" width="344">M64-GL1-30Pt200</td>
			<td class="xl22" style="width:237pt" width="316">Will be called MEA system in manuscript</td>
		</tr>
		<tr height="42" style="height:31.5pt">
			<td class="xl19" height="42" style="width:245pt;height:31.5pt" width="326">Axis Software</td>
			<td class="xl22" style="width:164pt" width="218">Axion Biosystems</td>
			<td class="xl19" style="width:258pt" width="344"></td>
			<td class="xl19" style="width:237pt" width="316">Will be called recording software in the manuscript</td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl22" height="21" style="width:245pt;height:15.75pt" width="326">BPA</td>
			<td class="xl22" style="width:164pt" width="218">Sigma-Aldrich</td>
			<td class="xl22" style="width:258pt" width="344">239658-250g</td>
			<td class="xl22" style="width:237pt" width="316"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl22" height="21" style="width:245pt;height:15.75pt" width="326">curved forceps</td>
			<td class="xl22" style="width:164pt" width="218">Fine Science Tools</td>
			<td class="xl22" style="width:258pt" width="344">11272-50</td>
			<td class="xl22" style="width:237pt" width="316"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl22" height="21" style="width:245pt;height:15.75pt" width="326">EtOH</td>
			<td class="xl22" style="width:164pt" width="218">Sigma-Aldrich</td>
			<td class="xl22" style="width:258pt" width="344">64-17-5</td>
			<td class="xl22" style="width:237pt" width="316"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl22" height="21" style="width:245pt;height:15.75pt" width="326">Fertilized chicken eggs</td>
			<td class="xl22" style="width:164pt" width="218">from any local farm or Spafas</td>
			<td class="xl22" style="width:258pt" width="344"></td>
			<td class="xl22" style="width:237pt" width="316"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl22" height="21" style="width:245pt;height:15.75pt" width="326">HBSS</td>
			<td class="xl22" style="width:164pt" width="218">Fisher</td>
			<td class="xl23" style="width:258pt" width="344">14170112</td>
			<td class="xl22" style="width:237pt" width="316"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl22" height="21" style="width:245pt;height:15.75pt" width="326">Hemacytometer</td>
			<td class="xl22" style="width:164pt" width="218">Fisher</td>
			<td class="xl22" style="width:258pt" width="344">&#160;02-671-6</td>
			<td class="xl22" style="width:237pt" width="316"></td>
		</tr>
		<tr height="40" style="height:30.0pt">
			<td class="xl22" height="40" style="width:245pt;height:30.0pt" width="326">Matrigel Growth Factor Reduced, Phenol Red-Free</td>
			<td class="xl22" style="width:164pt" width="218">BD Biosciences</td>
			<td class="xl23" style="width:258pt" width="344">356231</td>
			<td class="xl22" style="width:237pt" width="316">Will be called Extra Cellular Matrix (ECM) in the manuscript</td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl22" height="21" style="width:245pt;height:15.75pt" width="326">Neurobasal medium</td>
			<td class="xl22" style="width:164pt" width="218">BrainBits</td>
			<td class="xl22" style="width:258pt" width="344">Nb4-500</td>
			<td class="xl22" style="width:237pt" width="316"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl22" height="21" style="width:245pt;height:15.75pt" width="326">Neuroexplorer statistical software</td>
			<td class="xl22" style="width:164pt" width="218">Nex Technologies</td>
			<td class="xl22" style="width:258pt" width="344">Neuroexplorer version 5</td>
			<td class="xl22" style="width:237pt" width="316"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl22" height="21" style="width:245pt;height:15.75pt" width="326">Pasteur pipettes</td>
			<td class="xl22" style="width:164pt" width="218">Fisher</td>
			<td class="xl22" style="width:258pt" width="344">&#160;13-678-20A</td>
			<td class="xl22" style="width:237pt" width="316"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl22" height="21" style="width:245pt;height:15.75pt" width="326">spring scissors</td>
			<td class="xl22" style="width:164pt" width="218">Fine Science Tools</td>
			<td class="xl22" style="width:258pt" width="344">15514-12</td>
			<td class="xl22" style="width:237pt" width="316"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl19" height="21" style="width:245pt;height:15.75pt" width="326">Sylgard bottom dissection dishes</td>
			<td class="xl19" style="width:164pt" width="218">Living Systems Instrumentaion</td>
			<td class="xl19" style="width:258pt" width="344">DD-90-S-BLK-3PK</td>
			<td class="xl19" style="width:237pt" width="316"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl22" height="21" style="width:245pt;height:15.75pt" width="326">Trypan Blue dye</td>
			<td class="xl22" style="width:164pt" width="218">Fisher</td>
			<td class="xl22" style="width:258pt" width="344">15-250-061</td>
			<td class="xl22" style="width:237pt" width="316"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl22" height="21" style="width:245pt;height:15.75pt" width="326">Trypsin-EDTA</td>
			<td class="xl22" style="width:164pt" width="218">Fisher</td>
			<td class="xl23" style="width:258pt" width="344">15400054</td>
			<td class="xl22" style="width:237pt" width="316"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessment of the effects of endocrine disrupting compounds on the development of vertebrate neural network function using multi-electrode arrays

두번째-페 놀, 비스 페 놀 A (BPA)와 두번째-페 놀-S (BPS), 플라스틱 및 수많은 일상적인 제품의 생산에서 널리 이용 되는 대리인 polymerizing 있습니다. 그들은 내 분 비 혼란 시키는 화합물 (EDC) estradiol 같은 속성으로 분류 됩니다. 장기 노출 EDCs, 낮은 복용량 에서도 다양 한 건강 결함 등 암, 행동 장애, 불 임, 초기 발달 기간 동안 큰 취약점으로 연결 되었습니다. 신경 기능의 개발에 대 한 BPA의 효과 연구, 우리는 체 외에서 신경 네트워크 모델 초기 배아 여자 뇌에서 파생 된 사용. 우리는에 노출 발견 BPA 특히 급상승 활동 및 동기화 네트워크 활동의 개발에 영향을. 네트워크 활동에 변화는 분자 화합물 또는 약의 대상과 행동 결과에 미치는 영향 사이의 중요 한 링크입니다. 다중 전극 배열 점점 네트워크 활동 체 외에 약물의 효과 연구에 유용한 도구가 되고있다. 여러 시스템 사용할 수 시장에서 있으며, 전극, 유형 및 전극 배열 및 기본 기본 원리, 분석 소프트웨어의 품질의 수에 있는 변이 그리고 데이터 취득은 걸쳐 동일 합니다 다른 시스템입니다. 현재 2 차원 생체 외에서 문화 분석에 국한, 하지만 이러한 MEA 시스템 네트워크 활동 두뇌 조각에서 vivo에서 사용할 수 있도록 향상 되 고 된다. 여기, 우리는 배아 노출 및 신경 네트워크 활동 및 대표 결과 함께 synchrony에 대 한 상세한 프로토콜을 제공 합니다.

우리 병아리 태아 신경 문화에서 synchrony 개발에 BPA의 효과 검사합니다. 급상승 활동의 동기화는 신경 네트워크 체 외의 정상적인 발전의 지표 이다. 서로 5 ms 이내 두 스파이크 발생 동기 간주 됩니다. 처음 무작위 급격히 활동을 표시 하는 체 외에서 신경 문화-스파이크 무작위로 발생 하 고 간 스파이크 간격 표시 정규 분포. 문화는 성숙, 급격히 활동 더 동기화 된다 고 간 스파이크 간격 일정. 문화의 동기 급격히 활동 Synchrony 인덱스 (SI) 파생 소프트웨어12 기록 사용 하 여 시간 스파이크의 교차 상관 분석으로 quantitated 했다. 우리는 BPA 노출 부정적인 영향을 미치는 네트워크 활동 개발 급격히 활동과 synchrony 인덱스 (그림 2는 및 2b)를 줄임으로써 발견. 요약 하자면, 우리는 배아에 BPA 노출의 해로운 효과 미치는 영향 문화에 병아리 뉴런에서 synchrony 개발을 통해 평가 될 수 있다 신경 기능을 포함 하 여 그것의 발전 나타났습니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56300/56300fig1.jpg"> 그림 1: 여자 개 절 개에서 분리, 도금, 및 네트워크 활동의 기록 단계를 묘사 하는 프로토콜의 도식. <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56300/56300fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56300/56300fig2.jpg"> 그림 2: (A) 스파이크의 평균 수는 상당히 낮은 BPA 취급 E7 여자 개 문화 제어 문화에 비교 될 때. 스파이크의 평균 수는 레코딩 소프트웨어를 사용 하 여 추출 되었다. 수단 (제어, 14,890 ± 949.0, N = 15, BPA, 5,624 ± 465.9, N = 22) 크게 달랐다 (짝이 없는 t-검정, p < 0.0001). (B) 평균 synchrony 인덱스 (SI)는 크게 낮은 BPA 취급 E7 여자 개 문화 제어 문화에 비교 될 때. SI는 레코딩 소프트웨어 내에서 신경 통계 컴파일러 모듈을 사용 하 여 추출 했다. 시 수단 (제어, 0.5159 ± 0.06547 N = 15, BPA, 0.1140 ± 0.01840 N = 22) 크게 달랐다 (짝이 없는 t-검정, p < 0.0001). 오차 막대는 표준 편차를 묘사. <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56300/56300fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>

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Assessment of the Effects of Endocrine Disrupting Compounds on the Development of Vertebrate Neural Network Function Using Multi-electrode Arrays

환경 독 소에 노출 수 있습니다 심하게 발전 태아에 영향을. 내 분 비 혼란 시키는 화학 제품 bisphenols 부정적인 알려져 있습니다와 같은 신 경계에 영향을. 여기는 초기 배아에 독 소 노출의 기능에 미치는 영향을 연구 하는 생체 외에서 (병아리 태아) 척추 신경 네트워크 모델을 사용 하는 프로토콜에 설명 합니다.

내 분 비 방해 다중 전극 어레이 사용 하 여 척추 신경 네트워크 기능 개발에 화합물의 효과의 평가

Bis-phenols, such as bis-phenol A (BPA) and bis-phenol-S (BPS), are polymerizing agents widely used in the production of plastics and numerous everyday ...

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5.9K 조회수.  Delaware State University. 환경 독 소에 노출 수 있습니다 심하게 발전 태아에 영향을. 내 분 비 혼란 시키는 화학 제품 bisphenols 부정적인 알려져 있습니다와 같은 신 경계에 영향을. 여기는 초기 배아에 독 소 노출의 기능에 미치는 영향을 연구 하는 생체 외에서 (병아리 태아) 척추 신경 네트워크 모델을 사용 하는 프로토콜에 설명 합니다.

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Comprehensive Assessment of Germline Chemical Toxicity Using the Nematode Caenorhabditis elegans

Identifying the reproductive toxicity of the thousands of chemicals present in our environment has been one of the most tantalizing challenges in the field of environmental health. This is due in part to the paucity of model systems that can (1) accurately recapitulate keys features of reproductive processes and (2) do so in a medium- to high-throughput fashion, without the need for a high number of vertebrate animals.
We describe here an assay in the nematode C. elegans that allows the rapid identification of germline toxicants by monitoring the induction of aneuploid embryos. By making use of a GFP reporter line, errors in chromosome segregation resulting from germline disruption are easily visualized and quantified by automated fluorescence microscopy. Thus the screening of a particular set of compounds for its toxicity can be performed in a 96- to 384-well plate format in a matter of days. Secondary analysis of positive hits can be performed to determine whether the chromosome abnormalities originated from meiotic disruption or from early embryonic chromosome segregation errors. Altogether, this assay represents a fast first-pass strategy for the rapid assessment of germline dysfunction following chemical exposure.

Comprehensive Assessment of Germline Chemical Toxicity Using the Nematode Caenorhabditis elegans

We describe the detailed steps of a high-throughput chemical assay in the nematode Caenorhabditis elegans used to assess germline toxicity. In this assay, disruption of germline function following chemical exposure is monitored using a fluorescent reporter specific to aneuploid embryos.

선충을 사용하여 생식선 화학 독성의 종합 평가<em&gt; 예쁜 꼬마 선충</em

Identifying the reproductive toxicity of the thousands of chemicals present in our environment has been one of the most tantalizing challenges in the ...

연구

발생학

Efficient Generation of hiPSC Neural Lineage Specific Knockin Reporters Using the CRISPR/Cas9 and Cas9 Double Nickase System

Gene targeting is a critical approach for characterizing gene functions in modern biomedical research. However, the efficiency of gene targeting in human cells has been low, which prevents the generation of human cell lines at a desired rate. The past two years have witnessed a rapid progression on improving efficiency of genetic manipulation by genome editing tools such as the CRISPR (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)/Cas (CRISPR-associated) system. This manuscript describes a protocol for generating lineage specific human induced pluripotent stem cell (hiPSC) reporters using CRISPR/Cas system assisted homologous recombination. Procedures for obtaining necessary components for making neural lineage reporter lines using the CRISPR/Cas system, focusing on construction of targeting vectors and single guide RNAs, are described. This protocol can be extended to platform establishment and mutation correction in hiPSCs.

Genome editing tools such as the CRISPR (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)/Cas (CRISPR-associated) system have greatly improved gene targeting efficiency in human induced pluripotent stem cells (hiPSCs). This manuscript describes a protocol for generating lineage specific hiPSC reporter using CRISPR/Cas system assisted homologous recombination.

hiPSC 신경 리니지 특정 올림피아 기자의 효율적인 생성 사용 CRISPR / Cas9 및 Cas9 더블 Nickase 시스템

Gene targeting is a critical approach for characterizing gene functions in modern biomedical research. However, the efficiency of gene targeting in human ...

Isolation of Neural Stem/Progenitor Cells from the Periventricular Region of the Adult Rat and Human Spinal Cord

Adult rat and human spinal cord neural stem/progenitor cells (NSPCs) cultured in growth factor-enriched medium allows for the proliferation of multipotent, self-renewing, and expandable neural stem cells. In serum conditions, these multipotent NSPCs will differentiate, generating neurons, astrocytes, and oligodendrocytes. The harvested tissue is enzymatically dissociated in a papain-EDTA solution and then mechanically dissociated and separated through a discontinuous density gradient to yield a single cell suspension which is plated in neurobasal medium supplemented with epidermal growth factor (EGF), basic fibroblast growth factor (bFGF), and heparin. Adult rat spinal cord NSPCs are cultured as free-floating neurospheres and adult human spinal cord NSPCs are grown as adherent cultures. Under these conditions, adult spinal cord NSPCs proliferate, express markers of precursor cells, and can be continuously expanded upon passage. These cells can be studied in vitro in response to various stimuli, and exogenous factors may be used to promote lineage restriction to examine neural stem cell differentiation. Multipotent NSPCs or their progeny can also be transplanted into various animal models to assess regenerative repair.

The adult mammalian spinal cord contains neural stem/progenitor cells (NSPCs) that can be isolated and expanded in culture. This protocol describes the harvesting, isolation, culture, and passaging of NSPCs generated from the periventricular region of the adult spinal cord from the rat and from human organ transplant donors.

뇌실 주위 백질 성인 쥐의 지역 및 인간의 척수에서 신경 줄기 / 전구 세포의 분리

Adult rat and human spinal cord neural stem/progenitor cells (NSPCs) cultured in growth factor-enriched medium allows for the proliferation of ...

Alginate Encapsulation of Pluripotent Stem Cells Using a Co-axial Nozzle

Pluripotent stem cells (PS cells) are the focus of intense research due to their role in regenerative medicine and drug screening. However, the development of a mass culture system would be required for using PS cells in these applications. Suspension culture is one promising culture method for the mass production of PS cells, although some issues such as controlling aggregation and limiting shear stress from the culture medium are still unsolved. In order to solve these problems, we developed a method of calcium alginate (Alg-Ca) encapsulation using a co-axial nozzle. This method can control the size of the capsules easily by co-flowing N2 gas. The controllable capsule diameter must be larger than 500 &#181;m because too high a flow rate of N2 gas causes the breakdown of droplets and thus heterogeneous-sized capsules. Moreover, a low concentration of Alg-Na and CaCl2 causes non-spherical capsules. Although an Alg-Ca capsule without a coating of Alg-PLL easily dissolves enabling the collection of cells, they can also potentially leak out from capsules lacking an Alg-PLL coating. Indeed, an alginate-PLL coating can prevent cellular leakage but is also hard to break. This technology can be used to research the stem cell niche as well as the mass production of PS cells because encapsulation can modify the micro-environment surrounding cells including the extracellular matrix and the concentration of secreted factors.

We established a method of encapsulating pluripotent stem cells (PS cells) into alginate hydrogel capsules using a co-axial nozzle. This prevents cells from aggregating excessively and limits the shear stress experienced by cells in suspension culture. The technique is applicable to the mass production of PS cells as well as research on stem cell niche.

동축 노즐을 사용하여 다 능성 줄기 세포의 알긴산 캡슐화

Pluripotent stem cells (PS cells) are the focus of intense research due to their role in regenerative medicine and drug screening.  However, the ...

Geomagnetic Field (Gmf) and Plant Evolution: Investigating the Effects of Gmf Reversal on Arabidopsis thaliana Development and Gene Expression

One of the most stimulating observations in plant evolution is a correlation between the occurrence of geomagnetic field (GMF) reversals (or excursions) and the moment of the radiation of Angiosperms. This led to the hypothesis that alterations in GMF polarity may play a role in plant evolution. Here, we describe a method to test this hypothesis by exposing Arabidopsis thaliana to artificially reversed GMF conditions. We used a three-axis magnetometer and the collected data were used to calculate the magnitude of the GMF. Three DC power supplies were connected to three Helmholtz coil pairs and were controlled by a computer to alter the GMF conditions. Plants grown in Petri plates were exposed to both normal and reversed GMF conditions. Sham exposure experiments were also performed. Exposed plants were photographed during the experiment and images were analyzed to calculate root length and leaf areas. Arabidopsis total RNA was extracted and Quantitative Real Time-PCR (qPCR) analyses were performed on gene expression of CRUCIFERIN 3 (CRU3), copper transport protein1 (COTP1), Redox Responsive Transcription Factor1 (RRTF1), Fe Superoxide Dismutase 1, (FSD1), Catalase3 (CAT3), Thylakoidal Ascorbate Peroxidase (TAPX), a cytosolic Ascorbate Peroxidase1 (APX1), and NADPH/respiratory burst oxidase protein D (RbohD). Four different reference genes were analysed to normalize the results of the qPCR. The best of the four genes was selected and the most stable gene for normalization was used. Our data show for the first time that reversing the GMF polarity using triaxial coils has significant effects on plant growth and gene expression. This supports the hypothesis that GMF reversal contributes to inducing changes in plant development that might justify a higher selective pressure, eventually leading to plant evolution.

Geomagnetic Field Gmf and Plant Evolution: Investigating the Effects of Gmf Reversal on Arabidopsis thaliana Development and Gene Expression

This protocol describes a method to test the hypothesis that the reversal of the effective geomagnetic field (GMF) induces differential gene expression and alters the morphology of Arabidopsis thaliana. A triaxial octagonal system of Helmholtz coil-pairs was used to artificially generate reversed GMF conditions in the plant growth chamber.

자기장 (GMF)과 식물 진화 : GMF 반전의 효과에 대한 조사<em&gt; 애기 장대</em&gt; 개발 및 유전자 발현

One of the most stimulating observations in plant evolution is a correlation between the occurrence of geomagnetic field (GMF) reversals (or excursions) ...

Using Light Sheet Fluorescence Microscopy to Image Zebrafish Eye Development

Light sheet fluorescence microscopy (LSFM) is gaining more and more popularity as a method to image embryonic development. The main advantages of LSFM compared to confocal systems are its low phototoxicity, gentle mounting strategies, fast acquisition with high signal to noise ratio and the possibility of imaging samples from various angles (views) for long periods of time. Imaging from multiple views unleashes the full potential of LSFM, but at the same time it can create terabyte-sized datasets. Processing such datasets is the biggest challenge of using LSFM. In this protocol we outline some solutions to this problem. Until recently, LSFM was mostly performed in laboratories that had the expertise to build and operate their own light sheet microscopes. However, in the last three years several commercial implementations of LSFM became available, which are multipurpose and easy to use for any developmental biologist. This article is primarily directed to those researchers, who are not LSFM technology developers, but want to employ LSFM as a tool to answer specific developmental biology questions. 
Here, we use imaging of zebrafish eye development as an example to introduce the reader to LSFM technology and we demonstrate applications of LSFM across multiple spatial and temporal scales. This article describes a complete experimental protocol starting with the mounting of zebrafish embryos for LSFM. We then outline the options for imaging using the commercially available light sheet microscope. Importantly, we also explain a pipeline for subsequent registration and fusion of multiview datasets using an open source solution implemented as a Fiji plugin. While this protocol focuses on imaging the developing zebrafish eye and processing data from a particular imaging setup, most of the insights and troubleshooting suggestions presented here are of general use and the protocol can be adapted to a variety of light sheet microscopy experiments.

Light sheet fluorescence microscopy is an excellent tool for imaging embryonic development. It allows recording of long time-lapse movies of live embryos in near physiological conditions. We demonstrate its application for imaging zebrafish eye development across wide spatio-temporal scales and present a pipeline for fusion and deconvolution of multiview datasets.

이미지 Zebrafish의 눈 개발에 가벼운 시트 형광 현미경을 사용하여

Light sheet fluorescence microscopy (LSFM) is gaining more and more popularity as a method to image embryonic development. The main advantages of LSFM ...

Development of an In Vitro Assay to Evaluate Contractile Function of Mesenchymal Cells that Underwent Epithelial-Mesenchymal Transition

Fibrosis is often involved in the pathogenesis of various chronic progressive diseases such as interstitial pulmonary disease. Pathological hallmark is the formation of fibroblastic foci, which is associated with the disease severity. Mesenchymal cells consisting of the fibroblastic foci are proposed to be derived from several cell sources, including originally resident intrapulmonary fibroblasts and circulating fibrocytes from bone marrow. Recently, mesenchymal cells that underwent epithelial-mesenchymal transition (EMT) have been also supposed to contribute to the pathogenesis of fibrosis. In addition, EMT can be induced by transforming growth factor &#946;, and EMT can be enhanced by pro-inflammatory cytokines like tumor necrosis factor &#945;. The gel contraction assay is an ideal in vitro model for the evaluation of contractility, which is one of the characteristic functions of fibroblasts and contributes to wound repair and fibrosis. Here, the development of a gel contraction assay is demonstrated for evaluating contractile ability of mesenchymal cells that underwent EMT.

Development of an In Vitro Assay to Evaluate Contractile Function of Mesenchymal Cells that Underwent Epithelial-Mesenchymal Transition

Here, we describe the development and application of a gel contraction assay for evaluating contractile function in mesenchymal cells that underwent epithelial-mesenchymal transition.

개발<em&gt; 체외</em&gt; 분석은 중간 엽 세포를 시행 한 상피 - 중간 엽 전환의 수축 기능을 평가하는

Fibrosis is often involved in the pathogenesis of various chronic progressive diseases such as interstitial pulmonary disease. Pathological hallmark is ...

Rapid Neuronal Differentiation of Induced Pluripotent Stem Cells for Measuring Network Activity on Micro-electrode Arrays

Neurons derived from human induced Pluripotent Stem Cells (hiPSCs) provide a promising new tool for studying neurological disorders. In the past decade, many protocols for differentiating hiPSCs into neurons have been developed. However, these protocols are often slow with high variability, low reproducibility, and low efficiency. In addition, the neurons obtained with these protocols are often immature and lack adequate functional activity both at the single-cell and network levels unless the neurons are cultured for several months. Partially due to these limitations, the functional properties of hiPSC-derived neuronal networks are still not well characterized. Here, we adapt a recently published protocol that describes production of human neurons from hiPSCs by forced expression of the transcription factor neurogenin-212. This protocol is rapid (yielding mature neurons within 3 weeks) and efficient, with nearly 100% conversion efficiency of transduced cells (&#62;95% of DAPI-positive cells are MAP2 positive). Furthermore, the protocol yields a homogeneous population of excitatory neurons that would allow the investigation of cell-type specific contributions to neurological disorders. We modified the original protocol by generating stably transduced hiPSC cells, giving us explicit control over the total number of neurons. These cells are then used to generate hiPSC-derived neuronal networks on micro-electrode arrays. In this way, the spontaneous electrophysiological activity of hiPSC-derived neuronal networks can be measured and characterized, while retaining interexperimental consistency in terms of cell density. The presented protocol is broadly applicable, especially for mechanistic and pharmacological studies on human neuronal networks.

We modify and implement a previously published protocol describing the rapid, reproducible, and efficient differentiation of human&#160;induced&#160;Pluripotent Stem Cells (hiPSCs) into excitatory cortical neurons12. Specifically, our modification allows for control of neuronal cell density and use on micro-electrode arrays to measure electrophysiological properties at the network level.

마이크로 전극 배열에 네트워크 활동을 측정하기위한 유도 다 능성 줄기 세포의 빠른 신경 세포의 분화

Neurons derived from human induced Pluripotent Stem Cells (hiPSCs) provide a promising new tool for studying neurological disorders. In the past decade, ...

Electrophysiological Analysis of human Pluripotent Stem Cell-derived Cardiomyocytes (hPSC-CMs) Using Multi-electrode Arrays (MEAs)

Cardiomyocytes can now be derived with high efficiency from both human embryonic and human induced-Pluripotent Stem Cells (hPSC). hPSC-derived cardiomyocytes (hPSC-CMs) are increasingly recognized as having great value for modeling cardiovascular diseases in humans, especially arrhythmia syndromes. They have also demonstrated relevance as in vitro systems for predicting drug responses, which makes them potentially useful for drug-screening and discovery, safety pharmacology and perhaps eventually for personalized medicine. This would be facilitated by deriving hPSC-CMs from patients or susceptible individuals as hiPSCs. For all applications, however, precise measurement and analysis of hPSC-CM electrical properties are essential for identifying changes due to cardiac ion channel mutations and/or drugs that target ion channels and can cause sudden cardiac death. Compared with manual patch-clamp, multi-electrode array (MEA) devices offer the advantage of allowing medium- to high-throughput recordings. This protocol describes how to dissociate 2D cell cultures of hPSC-CMs to small aggregates and single cells and plate them on MEAs to record their spontaneous electrical activity as field potential. Methods for analyzing the recorded data to extract specific parameters, such as the QT and the RR intervals, are also described here. Changes in these parameters would be expected in hPSC-CMs carrying mutations responsible for cardiac arrhythmias and following addition of specific drugs, allowing detection of those that carry a cardiotoxic risk.

Electrophysiological Analysis of human Pluripotent Stem Cell-derived Cardiomyocytes hPSC-CMs Using Multi-electrode Arrays MEAs

Electrophysiological characterization of cardiomyocytes derived from human Pluripotent Stem Cells (hPSC-CMs) is crucial for cardiac disease modeling and for determining drug responses. This protocol provides the necessary information to dissociate and plate hPSC-CMs on multi-electrode arrays, measure their field potential, and a method for analyzing QT and RR intervals.

다중 전극 배열 (MEAs)을 이용한 인간 다 능성 줄기 세포 유래 심근 세포 (hPSC-CMs)의 전기 생리 학적 분석

Cardiomyocytes can now be derived with high efficiency from both human embryonic and human induced-Pluripotent Stem Cells (hPSC). hPSC-derived ...

Computational Analysis of the Caenorhabditis elegans Germline to Study the Distribution of Nuclei, Proteins, and the Cytoskeleton

The Caenorhabditis elegans (C. elegans) germline is used to study several biologically important processes including stem cell development, apoptosis, and chromosome dynamics. While the germline is an excellent model, the analysis is often two dimensional due to the time and labor required for three-dimensional analysis. Major readouts in such studies are the number/position of nuclei and protein distribution within the germline. Here, we present a method to perform automated analysis of the germline using confocal microscopy and computational approaches to determine the number and position of nuclei in each region of the germline. Our method also analyzes germline protein distribution that enables the three-dimensional examination of protein expression in different genetic backgrounds. Further, our study shows variations in cytoskeletal architecture in distinct regions of the germline that may accommodate specific spatial developmental requirements. Finally, our method enables automated counting of the sperm in the spermatheca of each germline. Taken together, our method enables rapid and reproducible phenotypic analysis of the C. elegans germline.

Computational Analysis of the Caenorhabditis elegans Germline to Study the Distribution of Nuclei, Proteins, and the Cytoskeleton

We present an automated method for three-dimensional reconstruction of the Caenorhabditis elegans germline. Our method determines the number and position of each nucleus within the germline and analyses germline protein distribution and cytoskeletal structure.

꼬마 선 충 생식 핵의 분포, 단백질, 및 골격을 전산 분석

The Caenorhabditis elegans (C. elegans) germline is used to study several biologically important processes including stem cell development, apoptosis, and ...