이 프로토콜은 인간에서 갈색 세카르드 증후군을 모방척수 측측 단면의 신뢰할 수있는 동물 모델과 비대칭 행동 적자를 평가하기위한 새로운 결합 된 행동 척도를 제공합니다. 이 마우스 단면 모형은 인간에 있는 브라운 세카르드 증후군에서 생기는 신경손상의 우리의 이해를 더 할 수 있습니다. 언급한 평가와 달리, 우리의 새로운 결합된 행동 척도는 비대칭, 기관차 및 실험실 내 적자를 평가하는 데 필요한 모든 금형에 적용될 수 있습니다.
이를 사용하면 일관된 천연 헤미 섹션 모델은 기본 연구와 번역 연구 사이의 실험 결과 비교를 용이하게 할 수 있습니다. 이 모델과 일관된 결과를 사용하는 것은 초보자에게 어려울 수 있습니다. 중요한 단계는 부상을 유도하기위한 지침으로, 중간라인에 바늘을 수직으로 배치하는 것입니다.
이 비디오를 시청 한 후 수술과 행동 절차를 수행하는 방법에 대한 좋은 이해가 있어야합니다. 시술 당일, 수술용 테이블을 70%에탄올로 청소하고 미리 데워진 가열 패드를 테이블에 놓습니다. 멸균 수술 커튼으로 수술 부위를 덮은 후 마취 된 쥐의 발가락 핀치에 대한 반응이 부족한지 확인하십시오.
각막 건조를 방지하기 위해 동물의 눈에 연고를 바르고 흉부 척추를 덮어 머리를 면도합니다. 그런 다음, 세 번갈아 요오드 와 에탄올 스크럽으로 노출 된 피부를 청소합니다. 동물이 준비되면 13 번째 갈비뼈를 찾아 갈비뼈를 따라 T-13 척추와의 연결을 식별하십시오.
T-9 척추를 식별하기 위해 카운트최대, 그리고 숫자 15 메스 블레이드를 사용하여 8 ~ 11 척추 척추 가시 공정을 통해 3 ~ 4 센티미터 중간 선 피부 절개를합니다. 수술 현미경으로 쥐를 이동하고, 양면T-9및 T-10 척추의 측면을 향해 가시 적 과정에서 측면으로 paraspinal 근육을 분리합니다. 변형된 안정화 홀더로 척추를 분리하고, 측면 척추 뼈의 양쪽에 슬릿을 만들고, 노출된 횡방향 공정 면 아래에 홀더의 스테인레스 스틸 팔을 밀어 내십시오.
나사를 조이면 홀더를 확보하고 트랙터를 사용하여 T-8에서 11척추라미네이트 및 가시 공정을 노출합니다. rongeur를 사용하여 T-9 가시 공정을 잘라내고 라미나의 작은 부분을 제거하고, 가능한 한 측면으로 라미나의 중간선과 오른쪽 전체 부분을 왼쪽으로 제거합니다. 그런 다음 라미나 아래에 론거를 부드럽게 삽입하고, 원하는 라미네절제술 영역이 완료될 때까지 한 번에 하나의 작은 뼈 조각을 잘라냅니다.
다음으로, 척추 화음의 등쪽 미드라인을 식별하고, 30 게이지 바늘을 중간선을 수직으로 삽입하고, 척추 화음에, 척추 운하의 복부 벽에 이르기까지, 베벨이 오른쪽으로 향합니다. 멸균 젤 폼의 작은 조각으로 출혈을 중지하고, 바늘 트랙의 중간선을 통해 iridectomy 미세 수술 가위의 한 쪽 끝을 삽입하고, 오른쪽 hemichord의 측면 표면을 따라 다른 팁, 오른쪽 hemichord에 완전한 절단을 합니다. 칼과 같은 바늘의 측면 가장자리를 사용하여 병변 간격을 잘라 완전한 오른쪽 단면을 확인합니다.
그리고 척추 운하의 바닥을 시각화하여 오른쪽 단면의 완전성을 확인합니다. 시멘트 혼합물을 사용하여 스폰지 위에 좁은 다리를 구축하고 T-8 및 T-10 가시 공정을 구축하십시오. 이어서, 근육과 피부층을 4/0 실크 실로 따로 봉합하고, 0.9%의 멸균 식염수를 피하하여 수분을 유지한다.
요로 방광을 첫 주에 대해 매일 2 ~ 3 번 누르고, 자발적인 방광이 돌아올 때까지 다음 주에 1 ~ 2 번 누르십시오. 시술 후 적절한 실험 시간 지점에서 성인 쥐를 개방 필드 실험에 넣고 동물의 운동을 4 분 동안 검사합니다. 테이블을 사용하여 각 동작 범주에 대해 yes'에 대해 1값과 0의 값을 할당하고 총 값을 합하여 최종 일방적인 중간 합계 스텝 스코어를 0-8로 지정합니다.
게이트 커플링 분석을 위해 좁은 활주로 장치에서 걷는 실험 동물을 기록하고 정규 및/또는 서투른 경우 0의 점수를 할당하고 각 커플링 범주에 대해 보통'에 대해 2를 할당합니다. 접촉 배치 평가의 경우, 동물을 수직 위치에 두어 두 개의 뒷사지가 배치 응답에 사용할 수 있도록 하고, 한 뒷다리의 등쪽 표면을 표면 의 가장자리를 향해 가볍게 앞으로 브러시합니다. 표면에 발 배치를 관찰하고, 배치에 대한 1의 뒷사지 접촉 점수를 할당'그리드 보행 평가에 대한 1, 3cm 제곱 개구부와 38 센티미터 플라스틱 코팅 와이어 메쉬 그리드에 의해 높은 서른 여섯에 쥐를 배치하고, 비디오는 각 다리의 수의 정량화를 허용하기 위해 플랫폼을 가로 질러 자유롭게 걷는 쥐를 기록.
부상 진원지에서 단면의 아미노 형광 염색은 오른쪽 헤미코드의 완전한 손실을 보여줍니다. 그리고 왼쪽 헤미코드의 보존은 부상에 대한 모순. 개별 게이트 평가 측정값의 점수를 별도로 분석하거나 중간 절 점수 후 복합 복합 복합 동작으로 결합될 수 있습니다.
부상 후 처음 3 일 동안, 쥐는 단계와 같은 움직임이 부상 후 7 10 일 ipsilesional 측에 다시 나타나기 시작, 단계와 같은 움직임이 단계 능력을 잃게됩니다. 그리고 대부분의 단계가 등쪽 단계입니다. T-9 중간 절 후 28 일까지, 쥐는 거의 정상적인 조정으로 발바닥 단계를 취할 수 있습니다.
이에 비해, 금단형 뒷다리는 부상 후 처음 5일 이내에 일방적인 단면 점수가 떨어지고, 10일째, 부상 후 기준선으로 돌아오면서 덜 중단된다. 총 게이트 커플링 테스트의 경우, 중간절 후 조정의 안정성과 적응성 모두 부상 후 처음 5일 동안 현저하게 감소된다. ipsilateral 뒷다리의 접촉 배치 및 격자 걷기는 또한 영향을 받습니다, 일반적으로 동물이 발바닥 단계를 취하기 시작할 때 복구.
깔끔한 부상을 내는 것은 어려울 수 있습니다. 중간에 바늘을 배치하는 것은 조직의 완전한 분리를 보장하기위한 유용한 지침이 될 수 있습니다.
