이 프로토콜은 지질 필름에서 마이크로 버블에 대한 지질 용액에 방울을 생성한 다음 물방울을 만드는 완벽한 절차를 제공하기 때문에 중요합니다. 이 기술의 주요 장점은 마이크로 버블을 방울로 응축시키는 단순성입니다. 냉각 및 소용돌이로 가압 없이 물방울을 만들 수 있습니다.
마이크로 버블이 성공적으로 응축되었는지 확인하는 간단한 테스트는 투명도의 변화를 시각적으로 확인하는 것이기 때문에 시각적 데모는 매우 중요합니다. 절차를 시연하는 것은 강정연구소의 석사학생인 유기문(Kimoon Yoo)이 될 것입니다. 디캡을 사용하여 혈청 바이알의 알루미늄 씰을 제거하고 지질 용액의 1밀리리터를 페놀 스크류 캡으로 1.85 밀리리터 보로실리케이트 유리 샘플 바이알로 전송하여 거품을 일으키지 않고 내부 벽아래로 흐르게 합니다.
1.85 밀리리터 시료 바이알을 통해 기체 교환기를 사용하여 시료 바이알 헤드스페이스로 데카플루오로부탄 가스로 유입될 준비를 한다. 가스 교환기의 모든 밸브가 제대로 닫혀 있고 펌프가 꺼져 있는지 확인합니다. 매니폴드 밸브를 열고 해당 바늘을 매니폴드에서 조심스럽게 풀어 보입니다.
오픈 압력 밸브 A 및 압력 밸브 B와 가스 실린더 밸브약 1/16 ~ 1/8 을 반시계 방향으로 돌려 부분적으로 엽니다. T 핸들 밸브를 열고 지질 용액으로 샘플 유리병을 제한 해제합니다. 바이알의 액체 공기 인터페이스 위에 매니폴드 바늘을 놓고 공기 조절기 게이지 바늘이 휴식 위치에서 약간 움직일 때까지 공기 조절 밸브를 시계 방향으로 천천히 돌리고 퍼플루오로카본 가스가 30초 동안 유리알 헤드스페이스로 부드럽게 흐르게 하여 거품을 일으키지 않도록 주의하십시오.
필요한 경우 공기 레귤레이터 밸브를 조정합니다. 30초 후, 유리병을 너무 많이 움직이지 않고 조심스럽게 신속하게 시료 유리병을 유지했습니다. 가스 실린더 밸브, T 핸들 밸브, 공기 조절 밸브, 압력 밸브 A, 압력 밸브 B 및 매니폴드 밸브.
조심스럽게 바늘을 칼집, 다음 샘플 유리병에 표시하고 시계 방향으로 가는 왁스 필름으로 목을 밀봉. 샘플 바이알을 어둠 속에서 섭씨 4도에 적어도 10분 또는 최대 24시간 동안 보관하십시오. 다른 절연 용기에 일반 얼음을 제자리에 절연 용기에 건조 얼음 약 100 그램을 놓습니다.
이전에 준비된 데코오로부탄 혈청 바이알을 1.5인치 20 게이지 바늘, 1밀리리터 플라스틱 주사기, 200밀리리터 용기, 금속 집게 및 온도계로 검색합니다. 지질 용액을 기계적 교반기에 놓고 45초 동안 교반합니다. 색상과 투명도가 변경되어야 합니다.
기계적 동요 후, 빛으로부터 차폐된 시료 유리병 오른쪽을 위로 서서 15분 카운트다운을 시작하여 유리병을 식히고 크기는 마이크로버블을 선택합니다. 카운트다운이 10분에 도달하면 이소프로파놀의 약 200밀리리터로 용기를 채우고 금속 집게를 사용하여 드라이 아이스로 섭씨 영하 20도까지 식힙니다. 마이크로 버블의 크기를 15분 동안 선택한 후 샘플 바이알 내부에서 선택한 파티션 크기를 찾습니다.
시료 유리병을 오른쪽쪽으로 유지하고, 조심스럽게 시료 바이알을 풀고 1밀리리터 플라스틱 주사기에 부착된 1.5인치 20 게이지 바늘로 바닥 파티션의 약 0.7 밀리리터를 인출한다. 상단 파티션이 철회되지 않았는지 확인하고 주사기를 쓸어 넣어 에어 포켓을 제거하지 마십시오. 고무 스토퍼의 중앙 원을 목표로, 다른 20 게이지 바늘을 데카플루오로부탄 혈청 바이알에 삽입하고 바늘을 혈청 바이알 의 상단 근처에 두어 환기한 다음 선택한 마이크로 버블 크기의 바늘을 삽입합니다.
선택한 마이크로 버블 크기를 천천히 전송합니다. 액체가 데카플루오로부탄 혈청 바이알의 내부 벽아래로 부드럽게 미끄러져 내려오게 하십시오. 선택된 모든 크기의 마이크로버블 용액이 전달되면 주사기로 바늘을 제거하지만, 음압을 완화하기 위해 환기 바늘을 유지한다.
소량의 드라이 아이스 나 실온 이소프로판올을 이소프로판올 욕조에 추가하여 목욕 온도가 영하 15도에서 영하 17도 사이인지 확인합니다. 20 게이지 환기 바늘은 혈청 바이알의 상단 근처에 삽입, 혈청 바이알과 이소 프로판올 목욕을 배치, 이소 프로판올의 수준 이하로 마이크로 버블 수준을 유지하지만, 그 위에 유리골 목과 간헐적으로 혈청 유리병을 2 분 동안 소용돌이 마이크로 버블을 응축. 혈청 바이알을 이소프로판올에서 지속적으로 소용돌이치지 말고 용액이 동결되지 않도록 하십시오.
약 5초 동안 소용돌이치고 이소프로판올에서 혈청 바이알을 들어 올립니다. 얼음 핵을 확인한 다음 이소프로판놀에서 소용돌이를 재개합니다. 얼음이 형성되면 혈청 유리알이 사라질 때까지 공중에서 소용돌이치게 됩니다.
2분 응축 후 이소프로판올 욕조에서 혈청 바이알을 제거하고 환기 바늘을 제거합니다. 마이크로 버블은 투명도의 변화에 의해 표시된 대로 방울로 응축되어야합니다. 세럼 바이알을 닦고 라벨을 붙인 다음 사용이 준비될 때까지 어두운 절연 용기에 일반 얼음위에 놓습니다.
그대로 알루미늄 씰이 있는 미개봉 된 물방울은 용융 된 얼음이 필요에 따라 교체되는 한 최대 6 시간 동안 안정되어야합니다. 사용 준비가 되면 캐퍼로 알루미늄 씰을 제거하십시오. 이 프로토콜을 사용한 후, 미리 응축된 크기의 미세 거품과 후 응축된 물방울은 10미크론 조리개가 있는 쿨터 카운터에 크기가 조정되었다.
30% 파이로 지질 제형에 대한 크기 조정 데이터가 도시된다. 크기 조정 데이터를 기반으로 하는 통계는 여기에 표시됩니다. 사전 및 후 응축된 평균 직경의 비율을 사용하여, 그 결과는 파이로 지질 함량이 증가함에 따라, 농도가 감소하고, 평균 직경이 증가하는 것으로 나타났다.
30% 파이로 지질 방울 샘플의 대표적인 흡수성 측정이 도시된다. 이는 그대로 어셈블리가 개별 조립되지 않은 지질 성분에 비해 상이한 피크에 의해 반사되는 것과 다른 광학 적 특성을 갖는 것으로 나타났다. 30%파이로 지질을 가진 사전 응축된 마이크로버블, 후응액물 샘플의 대표적인 플로레시네이션 측정이 여기에 표시되어 중단된 형태의 그대로 시료에 대한 다른 형광 피크를 시연합니다.
상이한 압력에서 이미지된 30%파이로 지질 방울 샘플의 대표적인 초음파 이미지가 표시됩니다. 저압에서, 천 합성에서 붙어 기포에서 만 배경 신호가 관찰되었다. 약간 더 높은 전력에서 몇 개의 미세 거품이 생성되어 밝은 반점의 모양에 의해 입증되었습니다.
압력이 증가함에 따라 더 많은 마이크로 버블이 생성되었습니다. 여기서 응축 온도는 이 특정 한 방울 쉘 제형에 최적화되어 있음을 기억하는 것이 중요합니다. 상이한 쉘 제형은 상이한 온도를 요구할 수 있다.
