이 프로토콜은 후면의 기계적 감도를 테스트하는 데 유용합니다. 만성 요통의 쥐 모델에서 종단 설계에 특히 흥미로운데, 그 목표는 유해한 자극에 대한 등 민감도를 감소시키기 위한 중재의 효과를 조사하는 것입니다. 이 방법은 간단하고 접근하기 쉬우며 훈련된 실험자에 의해 재현 가능한 결과를 얻을 수 있습니다.
이것은 주로 뒷발의 기계적 민감도를 평가하는 데 일반적으로 사용되는 Von Frey 테스트를 기반으로 합니다. 다른 행동 테스트와 마찬가지로 실험자는 필라멘트의 적용을 표준화하는 연습을 해야 하며 기계적 자극에 의해 생성된 행동이 다른 행동과 쉽게 구별될 때까지 연습해야 합니다. 테스트는 간단하고, 그렇지 않으면 사용하는데 큰 어려움이 없어야 합니다.
이 절차를 시연하는 것은 내 실험실의 박사 과정 학생 인 Nasim Eskandari가 될 것입니다. 쥐에게 만성 요통을 유발하려면 등 근육에 Complete Freund's Adjuvant(CFA)를 근육 주사합니다. 27 게이지 바늘을 사용하여 즉시 사용 가능한 CFA의 유중수 에멀젼 150마이크로리터를 척수주위 근육에 일방적으로 또는 양측으로 주입합니다.
바늘을 최소 3분 동안 제자리에 두십시오. 다음으로, 4 개의 33 센티미터 길이의 플렉시 유리 다리에 2 개의 인접한 챔버를 장착하여 각 동물에 대해 하나의 챔버를 포함하는 2 마리의 동물을위한 테스트 케이지를 제작합니다. 챔버 벽에는 투명한 플렉시 유리를 사용하고 검은 플렉시 유리를 사용하여 챔버를 분리하여 동물이 서로 못하게합니다.
그런 다음 와이어 간 거리가 8mm인 1mm 와이어로 만든 스테인리스 스틸 메쉬를 사용하여 테스트 케이지의 바닥과 천장을 만듭니다. 첫 번째 테스트 전에 연속 5-7 일 동안 하루에 30 분 동안 테스트 케이지에 쥐를 익숙하게하십시오. 이소플루란 마취 하에 엎드린 자세에서 동물의 모발 트리머를 사용하여 관심 부위의 뒷털을 약 10개의 척추 수준 이상으로 면도합니다.
반복적인 조치의 경우 행동 평가 없이 3일마다 뒷머리를 면도하여 자극이 항상 피부에 직접 적용되도록 합니다. 영구 마커로 피부에 표시를 그려 다른 날에 테스트를 반복 할 때 필라멘트가 항상 같은 부위에 적용되도록합니다. 시험 당일에는 쥐가 진정될 때까지 시험 전 15-30분 동안 쥐를 시험 케이지에 넣습니다.
그런 다음 Von Frey 필라멘트를 뒤쪽에 수직으로 바르고 항상 2g 필라멘트로 시작하여 위/아래 방법을 사용합니다. 척추로부터 10 밀리미터 떨어진 관심 영역에 양측으로 2초 동안 필라멘트를 도포하고, 쥐가 깨어 있을 때, 그의 네 발로 서서, 움직이지 않을 때 매 15 내지 30초마다 처리한다. 필라멘트를 도포해도 반응이 관찰되지 않으면 직렬에서 더 높은 힘으로 다음 필라멘트를 적용합니다.
등을 아치형으로 만들거나, 핥거나, 근육을 비틀거나, 필라멘트에서 멀어지거나, 회전하는 것과 같은 긍정적인 반응이 관찰되면 시리즈에서 더 낮은 힘으로 다음 필라멘트를 사용하십시오. 첫 번째 행동 변화 후 4개의 판독값을 얻을 때까지 절차를 계속합니다. 이 연구에서는 CFA와 대조군 쥐 사이의 기계적 민감도를 조사했습니다.
기준선에서 기계적 민감도는 그룹 간에 유사했습니다. 요추 근육에 CFA를 근육 주사하면 기계적 민감도가 7 일에서 28 일로 현저히 증가했습니다. 대조적으로, 대조군 쥐는 어떤 유의한 변화도 나타내지 않았다.
또한, 조직학적 검사를 통해 명확한 백혈구 침윤과 함께 CFA를 주사한 근육에서 만성 염증 변화의 존재를 확인했습니다. 식염수를 근육주사한 후 통제된 쥐의 건강한 등 근육이 참조로 표시됩니다. 기계적 과민증은 등 근육 외에도 표준 Von Frey 테스트로 뒷발에서 관찰되었습니다.
필라멘트가 항상 뒤쪽에 수직으로 같은 방식으로 적용되고 적용 할 때 동물이 움직이지 않도록하는 것이 매우 중요합니다. 실험자는 또한 현대 운동에 대한 행동 반응을 구별하는 데 자신감을 가져야합니다.
