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A High-throughput Automated Platform for the Development of Manufacturing Cell Lines for Protein Therapeutics

The fast-growing biopharmaceutical industry demands speedy development of highly efficient and reliable production systems to meet the increasing ...

Merck & Co., Inc

Pacientes sometidos a reconstrucci&oacute;n anorrectal total para atresia anorrectal o siguientes resecci&oacute;n abdominoperineal del recto no hacer tambi&eacute;n despu&eacute;s de una esfinge de neoanal gracilis estimulado el&eacute;ctricamente como pacientes con incontinencia sola. Este estudio retrospectivo, informa el resultado de la combinaci&oacute;n de un continente col&oacute;nica conducto anter&oacute;grado continencia enema procedimiento o con una esfinge de neoanal gracilis estimulado el&eacute;ctricamente en pacientes con atresia o despu&eacute;s de una resecci&oacute;n abdominoperineal del recto como parte de la reconstrucci&oacute;n anorrectal total superar combinada incontinencia y disfunci&oacute;n evacuatory.

&iquest;La combinaci&oacute;n de conducto col&oacute;nico esf&iacute;nter y continente del neoanal gracilis estimulado el&eacute;ctricamente: un paso adelante para la reconstrucci&oacute;n anorrectal total?

&#x603B;&#x809B;&#x80A0;&#x91CD;&#x5EFA;&#x809B;&#x95E8;&#x76F4;&#x80A0;&#x95ED;&#x9501;&#x6216;&#x4EE5;&#x4E0B;&#x8179;&#x4F1A;&#x9634;&#x8054;&#x5408;&#x76F4;&#x80A0;&#x5207;&#x9664;&#x672F;&#x505A;&#x4E0D;&#x7968;&#x4EF7;&#x4EE5;&#x53CA;&#x7535;&#x523A;&#x6FC0;&#x80A1;&#x8584;&#x808C; neoanal &#x62EC;&#x7EA6;&#x808C;&#x540E;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x75C5;&#x4EBA;&#x72EC;&#x81EA;&#x5931;&#x7981;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x56DE;&#x987E;&#x6027;&#x7814;&#x7A76;&#x62A5;&#x544A;&#x7684;&#x5927;&#x9646;&#x7ED3;&#x80A0;&#x7BA1;&#x9053;&#x6216;&#x987A;&#x884C;&#x8282;&#x5236;&#x704C;&#x80A0;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E0E;&#x7535;&#x523A;&#x6FC0;&#x80A1;&#x8584;&#x808C; neoanal &#x62EC;&#x7EA6;&#x808C;&#x95ED;&#x9501;&#x6216;&#x60A3;&#x8005;&#x8179;&#x4F1A;&#x9634;&#x8054;&#x5408;&#x5207;&#x9664;&#x672F;&#x76F4;&#x80A0;&#x540E;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x603B;&#x809B;&#x80A0;&#x91CD;&#x5EFA;&#x7684;&#x4E00;&#x90E8;&#x5206;&#x514B;&#x670D;&#x7EC4;&#x5408;&#x7684;&#x5931;&#x7981;&#x548C; evacuatory &#x529F;&#x80FD;&#x969C;&#x788D;&#x7EC4;&#x5408;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x3002;

&#x7535;&#x523A;&#x6FC0;&#x80A1;&#x8584;&#x808C; neoanal &#x62EC;&#x7EA6;&#x808C;&#x548C;&#x5927;&#x9646;&#x7ED3;&#x80A0;&#x5BFC;&#x7BA1;&#x7684;&#x7EC4;&#x5408;&#xFF1A; &#x603B;&#x809B;&#x80A0;&#x91CD;&#x5EFA;&#x8FC8;&#x51FA;&#x7684;&#x4E00;&#x6B65;&#x5417;&#xFF1F;

Patients undergoing total anorectal reconstruction for anorectal atresia or following abdominoperineal resection of the rectum do not fare as well after an electrically stimulated gracilis neoanal sphincter as patients with incontinence alone. This retrospective study reports the outcome for the combination of a continent colonic conduit or antegrade continence enema procedure with an electrically stimulated gracilis neoanal sphincter in patients with atresia or following an abdominoperineal resection of the rectum as part of total anorectal reconstruction to overcome combined incontinence and evacuatory dysfunction.

The combination of electrically stimulated gracilis neoanal sphincter and continent colonic conduit: a step forward for total anorectal reconstruction?

Les patients subissant une reconstruction totale ano-rectale pour atr&eacute;sie ano-rectale ou abdominoperineal apr&egrave;s la r&eacute;section du rectum ne pas fare aussi bien apr&egrave;s un sphincter de neoanal gracilis stimul&eacute;e &eacute;lectriquement comme les patients souffrant d&#39;incontinence seul. Cette &eacute;tude r&eacute;trospective rapporte le r&eacute;sultat de la combinaison d&#39;un continent colique conduit ou ant&eacute;rograde continence lavement proc&eacute;dure avec un sphincter de neoanal gracilis stimul&eacute;e &eacute;lectriquement chez les patients avec atr&eacute;sie ou suite &agrave; une r&eacute;section abdominoperineal du rectum dans le cadre de la reconstruction totale ano-rectale pour surmonter l&#39;incontinence mixte et dysfonction evacuatory.

La combinaison de neoanal gracilis stimul&eacute;e &eacute;lectriquement du sphincter et le continent de colique conduit : un pas en avant pour la reconstruction totale ano-rectale ?

Die Kombination von elektrisch stimulierten gracilis neoanal Schlie&#xDF;muskel und Kontinent Colon-Conduit: ein Schritt vorw&#xE4;rts f&#xFC;r insgesamt anorektale Rekonstruktion?

I pazienti sottoposti a ricostruzione anorettale totale per atresia anorettale o resezione abdominoperineal seguente del retto non tariffa pure dopo un sfintere neoanal gracilis stimolato elettricamente come pazienti con incontinenza da solo. Questo studio retrospettivo riporta il risultato per la combinazione di un continente del colon conduit o anterogrado continenza clistere procedura con un stimolato elettricamente gracilis neoanal dello sfintere in pazienti con atresia o in seguito a una resezione abdominoperineal del retto come parte della ricostruzione anorettale totale a superare combinato incontinenza e disfunzione evacuatory.

La combinazione di stimolato elettricamente gracilis neoanal dello sfintere e continente conduit del colon: un passo avanti per la ricostruzione anorettale totale?

&#x5408;&#x8A08;&#x76F4;&#x8178;&#x809B;&#x9580;&#x518D;&#x5EFA;&#x306E;&#x76F4;&#x8178;&#x809B;&#x9580;&#x9589;&#x9396;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x6B21;&#x306E;&#x76F4;&#x8178;&#x5207;&#x65AD;&#x8853;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x76F4;&#x8178;&#x306E;&#x624B;&#x8853;&#x75C7;&#x4F8B;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x3001;&#x96FB;&#x6C17;&#x523A;&#x6FC0;, &#x8584; neoanal &#x62EC;&#x7D04;&#x7B4B;&#x5F8C;&#x60A3;&#x8005;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x5C3F;&#x5931;&#x7981;&#x3092;&#x5358;&#x72EC;&#x3067;&#x904B;&#x8CC3;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x56DE;&#x9867;&#x7814;&#x7A76;&#x5927;&#x9678;&#x7D50;&#x8178;&#x5C0E;&#x7BA1;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x9806;&#x884C;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C1;&#x30CD;&#x30F3;&#x30B9;&#x6D63;&#x8178;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B8;&#x30E3;&#x3092;&#x9589;&#x9396;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x3001;&#x4F1A;&#x9670;&#x76F4;&#x8178;&#x5408;&#x8A08;&#x76F4;&#x8178;&#x809B;&#x9580;&#x5FA9;&#x8208;&#x306E;&#x4E00;&#x90E8;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6B21;&#x306E;&#x8907;&#x5408;&#x5C3F;&#x5931;&#x7981;&#x3068; evacuatory &#x6A5F;&#x80FD;&#x969C;&#x5BB3;&#x3092;&#x514B;&#x670D;&#x3059;&#x308B;&#x60A3;&#x8005;&#x306F;&#x96FB;&#x6C17;&#x523A;&#x6FC0;, &#x8584; neoanal &#x62EC;&#x7D04;&#x7B4B;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x96FB;&#x6C17;&#x523A;&#x6FC0;, &#x8584; neoanal &#x62EC;&#x7D04;&#x7B4B;&#x3068;&#x5927;&#x9678;&#x7D50;&#x8178;&#x5C0E;&#x7BA1;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;: &#x5408;&#x8A08;&#x76F4;&#x8178;&#x809B;&#x9580;&#x5FA9;&#x8208;&#x306B;&#x3068;&#x3063;&#x3066;&#x524D;&#x9032;&#xFF1F;

&#xD658;&#xC790; anorectal &#xC99D; &#xB610;&#xB294; &#xC9C1;&#xC7A5;&#xC758; &#xB2E4;&#xC74C; abdominoperineal &#xC808;&#xC81C;&#xC220;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCD1D; anorectal &#xC7AC;&#xAD6C;&#xC131; &#xD560; &#xC694;&#xAE08; &#xD558;&#xC9C0; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xC804;&#xAE30;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC790;&#xADF9;&#xB41C; gracilis neoanal &#xAD04;&#xC57D;&#xADFC; &#xD6C4; &#xD658;&#xC790;&#xB85C; &#xD63C;&#xC790; &#xC694; &#xC2E4; &#xAE08;&#xC73C;&#xB85C;. &#xC774; &#xD68C;&#xACE0;&#xC804; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xB300;&#xB959; &#xC800; &#xC2B9; &#xB3C4;&#xAD00; &#xB610;&#xB294; antegrade &#xC218;&#xB834; &#xAD00;&#xC7A5; &#xD504;&#xB85C;&#xC2DC;&#xC800;&#xB97C; &#xACB0;&#xD569; &#xD558; &#xC5EC; &#xC694; &#xC2E4; &#xAE08; &#xBC0F; evacuatory &#xAE30;&#xB2A5; &#xC7A5;&#xC560;&#xB97C; &#xADF9;&#xBCF5; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC99D; &#xB610;&#xB294; &#xC9C1;&#xC7A5;&#xC758; abdominoperineal &#xC808;&#xC81C;&#xC220; &#xCD1D; anorectal &#xC7AC;&#xAC74;&#xC758; &#xC77C;&#xD658;&#xC73C;&#xB85C; &#xB2E4;&#xC74C;&#xACFC; &#xAC19;&#xC740; &#xD658;&#xC790;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC804;&#xAE30; &#xC790;&#xADF9;&#xB41C; gracilis neoanal &#xAD04;&#xC57D;&#xADFC;&#xC758; &#xC870;&#xD569;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xBCF4;&#xACE0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC804;&#xAE30;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC790;&#xADF9;&#xB41C; gracilis neoanal &#xAD04;&#xC57D;&#xADFC; &#xBC0F; &#xB300;&#xB959; &#xC800; &#xC2B9; &#xB3C4;&#xAD00;&#xC758; &#xC870;&#xD569;: &#xCD1D; anorectal &#xC7AC;&#xAC74;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xC804;&#xC9C4;?

&#x78F7; (&#x5C0F;&#x5DF4;) &#x662F;&#x7ECF;&#x5FAA;&#x73AF;&#x7684;&#x5FC3;&#x810F;&#x808C;&#x8089;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x5173;&#x952E;&#x8C03;&#x8282;&#x5668;&#xFF0C;&#x5176;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x660E;&#x663E;&#x4E0B;&#x8C03;&#x7684; T(3)&#x3002;&#x4E0D;&#x8FC7;&#xFF0C;&#x5FC3;&#x810F;&#x808C;&#x8089;&#xFF0C;T 3 &#x4F9D;&#x8D56;&#x57FA;&#x56E0;&#x6C89;&#x9ED8;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x673A;&#x5236;&#x4E86;&#x89E3;&#x751A;&#x5C11;&#xFF0C;&#x76EE;&#x524D;&#x5C1A;&#x4E0D;&#x6E05;&#x695A;&#x662F;&#x5426;&#x7532;&#x72B6;&#x817A;&#x6FC0;&#x7D20;&#x53D7;&#x4F53; (TRs) &#x76F4;&#x63A5;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5728;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x5C0F;&#x5DF4;&#x57FA;&#x56E0;&#x548C;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6291;&#x5236;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x8C03;&#x67E5;&#x5728;&#x5C0F;&#x5DF4;&#x8F6C;&#x5F55;&#x7684; TRs &#x76D1;&#x7BA1;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7528;&#x751F;&#x7406;&#x5C0F;&#x9F20;&#x5FC3;&#x810F;&#x808C;&#x8089;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7CFB; (HL-1&#xFF09;&#xFF0C;&#x4FDD;&#x7559;&#x5FC3;&#x810F;&#x7535;&#x751F;&#x7406;&#x5C5E;&#x6027;&#xFF0C;&#x8868;&#x793A; TRalpha1 &#x548C; TRbeta1 &#x7684;&#x5B50;&#x7C7B;&#x578B;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5C55;&#x793A;&#x516C;&#x5171;&#x5C0F;&#x5DF4;&#x8868;&#x8FBE; T 3 &#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x6C89;&#x9ED8;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x6267;&#x884C;&#x4E0E; HL-1 &#x7EC6;&#x80DE; RNA &#x5E72;&#x6270;&#x68C0;&#x6D4B;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#xFF0C;TRalpha1&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F; TRbeta1&#xFF0C;&#x662F; T 3 &#x4F9D;&#x8D56;&#x516C;&#x5171;&#x5C0F;&#x5DF4;&#x57FA;&#x56E0;&#x9547;&#x538B;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;&#x6709;&#x8DA3;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x5305;&#x542B;&#x53EA;&#x6709;&#x6838;&#x5FC3;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x5E8F;&#x5217;&#x8BF7;&#x5230;-156 &#x7684;&#x516C;&#x5171;&#x5C0F;&#x5DF4;&#x8BB0;&#x8005;&#x57FA;&#x56E0;&#x663E;&#x793A;&#x5F3A;&#x52B2; T 3-&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x6C89;&#x9ED8; HL 1 &#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x8868;&#x660E;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6291;&#x5236;&#x901A;&#x8FC7; TRalpha1 &#x901A;&#x8FC7;&#x516C;&#x5171;&#x5C0F;&#x5DF4;&#x6838;&#x5FC3;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#xFF0C;&#x5728;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x4E2D;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x4FDD;&#x5B88;&#x7684;&#x6CD5;&#x89C4;&#x63A7;&#x5236;&#x533A;&#x57DF;&#x3002;&#x7B26;&#x5408;&#x8FD9;&#x4E00;&#x6982;&#x5FF5;&#xFF0C;&#x67D3;&#x8272;&#x8D28;&#x6C89;&#x6DC0;&#x548C;&#x4F53;&#x5916;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5316;&#x9A8C;&#x663E;&#x793A; TRalpha1 &#x76F4;&#x63A5;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5728;&#x5C0F;&#x5DF4;&#x6838;&#x5FC3;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x533A;&#x57DF;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x589E;&#x52A0;&#x4E86; T(3) &#x89E6;&#x53D1;&#x5728;&#x5C0F;&#x5DF4;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x7684;&#x5171;&#x4EF7;&#x952E;&#x7EC4;&#x86CB;&#x767D;&#x4FEE;&#x9970;&#x4E0E;&#x57FA;&#x56E0;&#x6C89;&#x9ED8;&#xFF0C;&#x5373;&#x663E;&#x8457;&#x7684;&#x4E0B;&#x8DCC; H3 &#x7EC4;&#x86CB;&#x767D;&#x4E59;&#x9170;&#x5316;&#x548C;&#x7EC4;&#x86CB;&#x767D; H3 4 &#x8D56;&#x6C28;&#x9178;&#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;&#x603B;&#x4E4B;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x663E;&#x793A;&#x5728;&#x5FC3;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x516C;&#x5171;&#x5C0F;&#x5DF4; T 3 &#x4F9D;&#x8D56;&#x9547;&#x538B;&#x76F4;&#x63A5;&#x901A;&#x8FC7; TRalpha1 &#x548C;&#x6D89;&#x53CA;&#x4FEE;&#x6539;&#x7EC4;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x7D20;&#x4F9D;&#x8D56;&#x62DB;&#x52DF;&#x9176;&#x4E0E;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6C89;&#x9ED8;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x3002;

&#x5FC3;&#x810F;&#x78F7;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x9547;&#x538B;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x7532;&#x72B6;&#x817A;&#x6FC0;&#x7D20;&#x53D7;&#x4F53;-{&#x5B57;&#x6BCD;} 1 &#x548C;&#x6D89;&#x53CA;&#x6709;&#x9488;&#x5BF9;&#x6027;&#x7684;&#x5171;&#x4EF7;&#x952E;&#x7EC4;&#x86CB;&#x767D;&#x4FEE;&#x9970;&#x3002;

Phospholamban (PLB) is a critical regulator of Ca(2+) cycling in heart muscle cells, and its gene expression is markedly down-regulated by T(3). Nonetheless, little is known about the molecular mechanisms of T(3)-dependent gene silencing in cardiac muscle, and it remains unclear whether thyroid hormone receptors (TRs) directly bind at the PLB gene in vivo and facilitate transcriptional repression. To investigate the regulatory role of TRs in PLB transcription, we used a physiological murine heart muscle cell line (HL-1) that retains cardiac electrophysiological properties, expresses both TRalpha1 and TRbeta1 subtypes, and exhibits T(3)-dependent silencing of PLB expression. By performing RNA interference assays with HL-1 cells, we found that TRalpha1, but not TRbeta1, is essential for T(3)-dependent PLB gene repression. Interestingly, a PLB reporter gene containing only the core promoter sequences -156 to +64 displayed robust T(3)-dependent silencing in HL-1 cells, thus suggesting that transcriptional repression is facilitated by TRalpha1 via the PLB core promoter, a regulatory region highly conserved in mammals. Consistent with this notion, chromatin immunoprecipitation and in vitro binding assays show that TRalpha1 directly binds at the PLB core promoter region. Furthermore, addition of T(3) triggered alterations in covalent histone modifications at the PLB promoter that are associated with gene silencing, namely a pronounced decrease in both histone H3 acetylation and histone H3 lysine 4 methylation. Taken together, our data reveal that T(3)-dependent repression of PLB in cardiac myocytes is directly facilitated by TRalpha1 and involves the hormone-dependent recruitment of histone-modifying enzymes associated with transcriptional silencing.

Repression of cardiac phospholamban gene expression is mediated by thyroid hormone receptor-{alpha}1 and involves targeted covalent histone modifications.

Phospholamban (PLB) est un r&eacute;gulateur essentiel du Ca(2+) cyclisme dans les cellules du muscle cardiaque, et son expression g&eacute;nique est nettement diminu&eacute;es par T(3). N&eacute;anmoins, on conna&icirc;t mal les m&eacute;canismes mol&eacute;culaires de T 3-d&eacute;pendante silen&ccedil;age g&eacute;nique dans le muscle cardiaque, et on ignore si les r&eacute;cepteurs des hormones thyro&iuml;diennes (TRs) directement lient au g&egrave;ne PLB in vivo et &agrave; facilitent la r&eacute;pression transcriptionnelle. Afin d&#39;&eacute;tudier le r&ocirc;le r&eacute;gulateur du SRT dans la transcription de PLB, nous avons utilis&eacute; une lign&eacute;e de cellules de muscle de coeur murines physiologiques (HL-1) qui conserve les propri&eacute;t&eacute;s &eacute;lectrophysiologiques cardiaques, exprime les sous-types TRalpha1 tant de TRbeta1 et pi&egrave;ces T 3-d&eacute;pendante silencing of expression PLB. En effectuant des essais de RNA interference avec cellules HL-1, nous avons constat&eacute; que TRalpha1, mais pas TRbeta1, est essentielle pour la r&eacute;pression g&eacute;nique de T 3-d&eacute;pendante PLB. Fait int&eacute;ressant, un g&egrave;ne rapporteur PLB contenant uniquement les s&eacute;quences promotrices core -156 &agrave; + 64 affiche robuste T d&eacute;pendante 3 silencieux dans les cellules HL-1, ce qui sugg&egrave;re que la r&eacute;pression transcriptionnelle est facilit&eacute;e par la TRalpha1 par le promoteur du core PLB, une r&eacute;gion r&eacute;gulatrice hautement conserv&eacute;e chez les mammif&egrave;res. En accord avec cette notion, immunopr&eacute;cipitation de la chromatine et essais de liaison in vitro montrent que TRalpha1 se lie directement dans la r&eacute;gion promotrice PLB core. En outre, ajout de T(3) a d&eacute;clench&eacute; des alt&eacute;rations des modifications d&#39;histone covalente au promoteur PLB qui sont associ&eacute;s li&eacute;e des g&egrave;nes silencieux d&#39;&eacute;chappement, &agrave; savoir une diminution prononc&eacute;e l&#39;ac&eacute;tylation des histones H3 et m&eacute;thylation de l&#39;histone H3 lysine 4. Pris ensemble, nos donn&eacute;es r&eacute;v&egrave;lent que la r&eacute;pression d&eacute;pendant 3 T de PLB dans les myocytes cardiaques est directement facilit&eacute;e par TRalpha1 et implique le recrutement hormono-d&eacute;pendant de la modification des histones enzymes associ&eacute;es transcriptionnelle.

R&eacute;pression de l&#39;expression de g&egrave;ne de phospholamban cardiaque est m&eacute;di&eacute;e par des r&eacute;cepteurs de l&#39;hormone thyro&iuml;dienne-{alpha} 1 et implique des modifications d&#39;histone covalents cibl&eacute;s.

Phospholamban (PLB) ist ein wichtiger Regulator der Ca(2+) Radfahren in Herzmuskelzellen und die Genexpression ist deutlich unten durch T(3) geregelt. Dennoch ist wenig bekannt &uuml;ber die molekularen Mechanismen der T 3-abh&auml;ngigen gen-silencing im Herzmuskel, und es bleibt unklar, ob Schilddr&uuml;senhormon-Rezeptoren (TRs) direkt am den PLB-gen in-vivo binden und transcriptional Repression erleichtern. Um die Rolle des TRs in PLB-Transkription zu untersuchen, haben wir eine physiologische murinen Herz Muskel Zelllinie (HL-1), die kardiale elektrophysiologische Eigenschaften beh&auml;lt, dr&uuml;ckt sowohl TRalpha1 als auch TRbeta1-Subtypen und Exponate T 3-abh&auml;ngige Unterdr&uuml;ckender PLB Ausdrucks verwendet. RNA-Interferenz-Assays mit HL-1 Zellen durchf&uuml;hren, wir fanden, dass TRalpha1, aber nicht TRbeta1, ist essentiell f&uuml;r T 3-abh&auml;ngige PLB gen Unterdr&uuml;ckung. Interessanterweise angezeigt ein PLB-Reporter-gen, enth&auml;lt nur die Kern Projekttr&auml;ger Sequenzen-156, + 64, robuste T 3-abh&auml;ngige Unterdr&uuml;ckender in HL-1 Zellen, das transcriptional Repression &uuml;ber die PLB Kern Promotor, eine regulatorische Region stark konserviert bei S&auml;ugetieren durch TRalpha1 erleichtert wird. Im Einklang mit dieser Vorstellung, Chromatin Immunopr&auml;zipitation und in-vitro-Bindung Proben zeigen, dass die TRalpha1 direkt am den PLB Projekttr&auml;ger Kernregion bindet. Dar&uuml;ber hinaus ausgel&ouml;st Zusatz von T(3) Ver&auml;nderungen kovalente Histon-Modifikationen am den PLB-Projekttr&auml;ger, die gen-silencing, n&auml;mlich einen ausgepr&auml;gten R&uuml;ckgang der Histon H3 Acetylierung und Histon H3 Lysin 4 Methylierung zugeordnet sind. Zusammen genommen, unsere Daten zeigen, dass T 3-abh&auml;ngige Unterdr&uuml;ckung der PLB im kardialen Myozyten direkt durch TRalpha1 erleichtert wird und die Hormon-abh&auml;ngigen Rekrutierung von Histon-&auml;ndern beinhaltet Enzyme zugeordnete transkriptionelle Unterdr&uuml;ckender.

Unterdr&uuml;ckung der kardialen Phospholamban Genexpression ist von Schilddr&uuml;sen-Hormon-Rezeptor-{Alpha} 1 vermittelt und umfasst gezielte kovalente Histon-Modifikationen.

Phospholamban (PLB) &egrave; un critico regolatore di Ca(2+) ciclismo in cellule del muscolo del cuore, e l&#39;espressione genica &egrave; marcatamente down-regolato da T(3). Tuttavia, poco &egrave; conosciuto circa i meccanismi molecolari di T (3)-silenziamento genico dipendente nel muscolo cardiaco e rimane poco chiaro se recettori degli ormoni tiroidei (TRs) direttamente legano al gene PLB in vivo e facilitano la repressione trascrizionale. Per indagare il ruolo normativo della TRs in trascrizione PLB, abbiamo utilizzato una linea di cellule muscolari fisiologico cuore murino (HL-1) che conserva le propriet&agrave; elettrofisiologiche cardiache, esprime sia TRalpha1 e TRbeta1 sottotipi ed esibisce T (3)-dipendente silenziamento dell&#39;espressione PLB. Eseguendo dosaggi interferenza RNA con cellule HL-1, abbiamo scoperto che TRalpha1, ma non TRbeta1, &egrave; essenziale per T (3)-dipendente dalla repressione di gene PLB. &Egrave; interessante notare che, un gene reporter PLB contenente solo le sequenze di promotore core-156 a + 64 visualizzati robusto T (3)-dipendente silenziamento nelle cellule HL-1, suggerendo cos&igrave; che repressione trascrizionale &egrave; facilitata da TRalpha1 via del promotore di nucleo PLB, una regolamentazione regione altamente conservati nei mammiferi. Coerente con questa nozione, immunoprecipitazione della cromatina e dosaggi di binding in vitro mostrano che TRalpha1 si lega direttamente alla regione del promotore di nucleo PLB. Inoltre, aggiunta di T(3) ha attivato alterazioni nelle modifiche dell&#39;istone covalente presso il promotore PLB che sono associate con gene silencing, vale a dire una diminuzione marcata dell&#39;istone H3 lisina 4 metilazione e acetilazione dell&#39;istone H3. Presi insieme, il nostro rivelare dati che T (3)-dipendente dalla repressione di PLB in miociti cardiaci direttamente &egrave; facilitata da TRalpha1 e prevede l&#39;assunzione di ormone-dipendenti di modifica dell&#39;istone enzimi associati silenziamento trascrizionale.

Repressione dell&#39;espressione genica phospholamban cardiaca &egrave; mediata dal recettore degli ormoni tiroidei-{alpha} 1 e comporta modifiche mirate istone covalente.

T(3) &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8457;&#x3057;&#x304F;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x898F;&#x5236;&#x305D;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE; Phospholamban (PLB) &#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF;&#x306E;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x306E;&#x7B4B;&#x8089;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0; &#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;&#x5C11;&#x3057; T &#xFF08;3&#xFF09; &#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;-&#x5FC3;&#x81D3;&#x306E;&#x7B4B;&#x8089;&#x3068;&#x305D;&#x308C;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x30B8;&#x30FC;&#x30F3;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x4F9D;&#x7136;&#x4E0D;&#x660E;&#x78BA;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x7532;&#x72B6;&#x817A;&#x30DB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; (TRs) &#x76F4;&#x63A5;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9; in vivo &#x306E; PLB &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306F;&#x3001;&#x8EE2;&#x5199;&#x6291;&#x5236;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Trs &#x30D5;&#x30A9;&#x30F3; &#x30B8;&#x30E3;&#x30C3;&#x30AF; PLB &#x8EE2;&#x5199;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x898F;&#x5236;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x5FC3;&#x81D3;&#x306E;&#x96FB;&#x6C17;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x7279;&#x6027;&#x3092;&#x4FDD;&#x6301;&#x3001;TRalpha1 &#x3068; TRbeta1 &#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3057;&#x3066; T &#xFF08;3&#xFF09; &#x306E;&#x5C55;&#x793A;&#x304C;&#x751F;&#x7406;&#x7684;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x5FC3;&#x81D3;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3; &#xFF08;HL-1&#xFF09; &#x4F7F;&#x7528;-&#x4F9D;&#x5B58; PLB &#x5F0F;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;RNA &#x5E72;&#x6E09;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4; HL 1 &#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x3092;&#x5B9F;&#x884C;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x305F; TRalpha1&#x3001;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x306A;&#x3044; TRbeta1 T (3) &#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3059;-&#x4F9D;&#x5B58; PLB &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x6291;&#x5236;&#x3002;&#x8208;&#x5473;&#x6DF1;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;&#x5805;&#x7262;&#x306A; T (3) &#x306E;&#x307F; +64 &#x3092;-156 &#x306E;&#x30B3;&#x30A2;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x914D;&#x5217;&#x3092;&#x542B;&#x3080; PLB &#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x8868;&#x793A;-&#x4F9D;&#x5B58; HL 1 &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x6291;&#x5236;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066; TRalpha1 PLB &#x30B3;&#x30A2; &#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x4FC3;&#x9032;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x793A;&#x5506;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x898F;&#x5236;&#x5730;&#x57DF;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x306B;&#x4FDD;&#x5B58;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x3002;&#x4E00;&#x8CAB;&#x6027;&#x306E;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x306E;&#x6982;&#x5FF5;&#x306F;&#x3001;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C1;&#x30F3;&#x514D;&#x75AB;&#x6C88;&#x964D;&#x3068; in vitro &#x3067;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x306E;&#x8A66;&#x91D1; TRalpha1 &#x304C;&#x76F4;&#x63A5; PLB &#x30B3;&#x30A2; &#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x9818;&#x57DF;&#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;T(3) &#x306E;&#x6DFB;&#x52A0;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x3001;&#x3059;&#x306A;&#x308F;&#x3061;&#x30D2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30F3; H3 &#x306E;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x3068;&#x30D2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30F3; H3 &#x30EA;&#x30B8;&#x30F3; 4 &#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x306E;&#x9855;&#x8457;&#x306A;&#x6E1B;&#x5C11;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x5171;&#x6709;&#x7D50;&#x5408;&#x30D2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30F3;&#x4FEE;&#x98FE; PLB &#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3067;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AC;&#x30FC;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3001;T (3) &#x64AE;&#x5F71;-&#x4F9D;&#x5B58;&#x306E;&#x6291;&#x5727; PLB &#x306E;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x76F4;&#x63A5; TRalpha1 &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x4FC3;&#x9032;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x30D2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30F3;&#x4FEE;&#x98FE;&#x306E;&#x30DB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30F3;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x52DF;&#x96C6;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x5FC3;&#x81D3; phospholamban &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x6291;&#x5236;&#x306F;&#x7532;&#x72B6;&#x817A;&#x30DB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306B;&#x3088;&#x308B; {&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1;} 1 &#x4ECB;&#x5728;&#x3067;&#x3001;&#x5BFE;&#x8C61;&#x3068;&#x306A;&#x308B;&#x5171;&#x6709;&#x7D50;&#x5408;&#x30D2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30F3;&#x4FEE;&#x98FE;&#x3092;&#x4F34;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Phospholamban (&#xCCA8; &#xB450; &#xBD80;&#xD558;)&#xB294; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xADFC;&#xC721; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; ca(2+)&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130; &#xBC0F; &#xADF8; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC774; &#xD604;&#xC800; &#xD558; &#xAC8C; &#xB2E4;&#xC6B4; T(3)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xADDC;&#xC81C;. &#xADF8;&#xB7FC;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0;, &#xC791;&#xC740; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xADFC;&#xC721;&#xC5D0; T (3) &#xC885;&#xC18D; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xCE68;&#xBB35;&#xC758; &#xBD84;&#xC790; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xC788;&#xB2E4; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xAC11; &#xC0C1;&#xC120; &#xD638;&#xB974;&#xBAAC; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (TRs) &#xC9C1;&#xC811; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xCCA8; &#xB450; &#xBD80;&#xD558; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD558;&#xACE0; transcriptional &#xC5B5;&#xC555; &#xCD09;&#xC9C4; &#xC5EC;&#xBD80; &#xBD88;&#xBD84;&#xBA85; &#xB0A8;&#xC544; &#xC788;&#xB2E4;. &#xCCA8; &#xB450; &#xBD80;&#xD558; &#xC804;&#xC0AC;&#xC5D0; Trs&#xC758; &#xADDC;&#xC81C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC2EC;&#xC7A5; electrophysiological &#xC18D;&#xC131;&#xC744; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558; &#xACE0;, &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; TRalpha1 &#xBC0F; TRbeta1 &#xD558;&#xC704; T (3) &#xC885;&#xC18D; &#xCCA8; &#xB450; &#xBD80;&#xD558; &#xC2DD;&#xC758; &#xC785;&#xC744; &#xC804;&#xC2DC; (HL-1) &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801; murine &#xC2EC;&#xC7A5; &#xADFC;&#xC721; &#xC138;&#xD3EC; &#xB77C;&#xC778;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. HL-1 &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; RNA &#xAC04;&#xC12D; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC744; &#xC218;&#xD589; &#xD558; &#xC5EC; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD558;&#xB294; TRalpha1, &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD558;&#xC9C0; TRbeta1 T (3) &#xC885;&#xC18D; &#xCCA8; &#xB450; &#xBD80;&#xD558; &#xC9C4; &#xC5B5;&#xC555;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xD544;&#xC218;&#xC801; &#xC774;&#xB2E4;. &#xD765;&#xBBF8;&#xB86D;&#xAC8C;&#xB3C4;, &#xCCA8; &#xB450; &#xBD80;&#xD558; &#xB9AC;&#xD3EC;&#xD130; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB9CC; &#xD575;&#xC2EC; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; + 64&#xC5D0;-156&#xC774; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; T (3) &#xC885;&#xC18D; &#xC785;&#xC744; HL-1 &#xC140;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; transcriptional &#xC5B5;&#xC555;&#xC740; &#xCCA8; &#xB450; &#xBD80;&#xD558; &#xD575;&#xC2EC; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778;, &#xD3EC;&#xC720;&#xB958;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACE0;&#xB3C4;&#xB85C; &#xBCF4;&#xC874; &#xADDC;&#xC81C; &#xC601;&#xC5ED;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; Tralpha1&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAC00;&#xB2A5; &#xC81C;&#xC548; &#xD45C;&#xC2DC;. &#xC774; &#xAC1C;&#xB150;&#xC640; &#xC77C;&#xCE58;, chromatin immunoprecipitation&#xC640; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xC1FC; TRalpha1 &#xCCA8; &#xB450; &#xBD80;&#xD558; &#xCF54;&#xC5B4; &#xD504;&#xB85C;&#xBAA8;&#xD130; &#xC601;&#xC5ED;&#xC5D0; &#xC9C1;&#xC811; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, T(3)&#xC758; &#xCD94;&#xAC00; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xCE68;&#xBB35;, &#xD788;&#xC2A4;&#xD1A4; H3 lysine 4 &#xBA54; &#xD2F8; &#xD654;&#xC640; &#xD788;&#xC2A4;&#xD1A4; H3 acetylation &#xC989; &#xBC1C;&#xC74C;&#xB41C; &#xAC10;&#xC18C;&#xC640; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xCCA8; &#xB450; &#xBD80;&#xD558; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778;&#xC5D0; &#xACF5;&#xC720; &#xD788;&#xC2A4;&#xD1A4; &#xC218;&#xC815;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCC0;&#xACBD;. &#xD568;&#xAED8; &#xCC0D;&#xC740; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xACF5;&#xAC1C; &#xC2EC;&#xC7A5; myocytes&#xC5D0;&#xC11C; &#xCCA8; &#xB450; &#xBD80;&#xD558;&#xC758; T (3) &#xC885;&#xC18D; &#xC5B5;&#xC555; &#xC9C1;&#xC811; Tralpha1&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCD09;&#xC9C4; &#xB41C;&#xC640; &#xD788;&#xC2A4;&#xD1A4; &#xC218;&#xC815; &#xD638;&#xB974;&#xBAAC; &#xC885;&#xC18D; &#xBAA8;&#xC9D1; &#xAD00;&#xB828; &#xD6A8;&#xC18C; transcriptional &#xC785;&#xC744; &#xC5F0;&#xAD00;.

&#xC2EC;&#xC7A5; phospholamban &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC758; &#xC5B5;&#xC81C; &#xC911;&#xC7AC; &#xAC11; &#xC0C1;&#xC120; &#xD638;&#xB974;&#xBAAC; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;-{&#xC54C;&#xD30C;} 1 &#xBC0F; &#xB300;&#xC0C1;&#xB41C; &#xACF5;&#xC720; &#xD788;&#xC2A4;&#xD1A4; &#xC218;&#xC815; &#xC791;&#xC5C5;&#xC774; &#xD3EC;&#xD568; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Su (PLB) es un regulador cr&iacute;tico de CA ciclismo en c&eacute;lulas del m&uacute;sculo cardiaco, y su expresi&oacute;n g&eacute;nica es marcadamente regula por t. Sin embargo, poco se sabe sobre los mecanismos moleculares de T 3-dependiente silenciamiento g&eacute;nico en m&uacute;sculo cardiaco, y no queda claro si los receptores de hormona tiroidea (TRs) directamente se unen en el gen de la PLB en vivo y facilitan la represi&oacute;n transcripcional. Para investigar el papel regulador de TRs en la transcripci&oacute;n de la PLB, se utiliz&oacute; una l&iacute;nea de c&eacute;lulas del m&uacute;sculo coraz&oacute;n murino fisiol&oacute;gica (HL-1) que conserva las propiedades electrofisiol&oacute;gicas cardiacas, expresa subtipos tanto TRalpha1 como TRbeta1 y exhibe T 3-dependiente silenciamiento de la expresi&oacute;n de la PLB. Mediante la realizaci&oacute;n de ensayos de interferencia de RNA con las c&eacute;lulas HL-1, descubrimos que TRalpha1, pero no TRbeta1, es esencial para la represi&oacute;n de gene T 3-dependiente de la PLB. Curiosamente, un gen reportero PLB que contiene s&oacute;lo las secuencias del promotor de la base-156 a + 64 muestra robusto T 3-dependiente silenciamiento en c&eacute;lulas HL-1, sugiriendo con ello que represi&oacute;n transcripcional es facilitado por TRalpha1 por el promotor del n&uacute;cleo PLB, una regi&oacute;n reguladora altamente conservado en mam&iacute;feros. Coherente con esta noci&oacute;n, inmunoprecipitaci&oacute;n de cromatina y ensayos de Uni&oacute;n in vitro muestran que TRalpha1 se une directamente a la regi&oacute;n del promotor PLB fundamentales. Por otra parte, adem&aacute;s de t provoc&oacute; alteraciones en modificaciones covalentes de histonas en el promotor de la PLB que est&aacute;n asociadas con, es decir una disminuci&oacute;n pronunciada en la acetilaci&oacute;n de la histona H3 y la metilaci&oacute;n de lisina 4 de histona H3 de silenciamiento del gen. Tomados en conjunto, nuestros datos revelan que T 3-dependiente represi&oacute;n PLB en miocitos cardiacos es facilitada directamente por TRalpha1 y consiste en el reclutamiento de hormono-dependientes de histona-modificar las enzimas asociadas con el silenciamiento transcripcional.

Represi&oacute;n de la expresi&oacute;n g&eacute;nica de fosfolamdano cardiaca est&aacute; mediada por receptores de la hormona tiroidea-{alfa} 1 y consiste en modificaciones de las histonas covalentes espec&iacute;ficas.

Jason Saunders

Merck Research Laboratory

Merck & Co., Inc

A High-throughput Automated Platform for the Development of Manufacturing Cell Lines for Protein Therapeutics

Jason Saunders

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A High-throughput Automated Platform for the Development of Manufacturing Cell Lines for Protein Therapeutics

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