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Isolation of Normal and Cancer-associated Fibroblasts from Fresh Tissues by Fluorescence Activated Cell Sorting (FACS)

Cancer-associated fibroblasts (CAFs) are the most prominent cell type within the tumor stroma of many cancers, in particular breast carcinoma, and their ...

Tel Aviv University

tel aviv university

Somatischer Zellen wird die Translokation von PKCs durch Rezeptor f&uuml;r aktivierte C-Kinase (RACK); erleichtert. jedoch seine Beteiligung an Ei Aktivierung noch schwer fassbar ist. Wir folgten das Translokation-Muster von konventioneller und neuartiger PKCs (cPKCs und nPKCs, beziehungsweise) auf Ei-Aktivierung. Konfokale Mikroskopie angegeben, den Ausdruck und die Lokalisierung von RACK1, einen spezifischen Rezeptor-Protein f&uuml;r cPKCs. Aktivierung des MII-Eier, f&uuml;hrte zur Translokation, die Ei-Kortex PKC&alpha;, &beta;II und &delta; und die Co-translocation Rack 1, mit PKC&alpha; und PKC&beta;II. Co-Immunopr&auml;zipitation zeigte der Verband der PKC und Actin, beide bekannt in kortikalen Granulat Exozytose (CGE) mit RACK1, einbezogen werden. Ei Aktivierung ergab eine erh&ouml;hte RACK1 zusammen mit einem verringerten Ma&szlig; an PKC&beta;II. Auf der Grundlage dieser Ergebnisse empfehlen wir, dass nach der Aktivierung Ei RACK1 Shuttles cPKCs, die Ei-Rinde, aktiviert und erleichtert so CGE.

Rezeptor f&uuml;r C-Kinase (RACK) und Proteinkinase C (PKC) in ei Aktivierung aktiviert.

Nelle cellule somatiche, traslocazione di PKCs &egrave; facilitata dal recettore per attivata chinasi C (RACK); Tuttavia il suo coinvolgimento nell&#39;attivazione uovo &egrave; ancora sfuggente. Abbiamo seguito il modello di traslocazione di PKCs convenzionale e romanzo (cPKCs e nPKCs, rispettivamente) dopo l&#39;attivazione di uovo. Microscopia confocale indicato l&#39;espressione e la localizzazione di RACK1, una proteina recettore specifico per cPKCs. Attivazione delle uova MII, ha portato alla traslocazione della corteccia di uovo di PKC&alpha;, &beta;II e &delta; e la co-translocation di RACK1, sia con PKC&alpha; e PKC&beta;II. L&#39;associazione di PKC e actina, entrambi noti per essere coinvolti nella esocitosi granuli corticali (CGE) con RACK1, &egrave; stato dimostrato da co-immunoprecipitazione. Attivazione uovo ha provocato un maggiore livello di RACK1 insieme a un livello diminuito di PKC&beta;II. Basato su questi risultati, suggeriamo che all&#39;attivazione dell&#39;uovo, navette RACK1 attivato cPKCs della corteccia di uovo, facilitando cos&igrave; la CGE.

Recettore per attivata chinasi C (RACK) e protein chinasi C (PKC) nell&#39;attivazione di uovo.

&#xCCB4;&#xC138;&#xD3EC;, PKCs &#xC804;&#xC740; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB41C; C &#xD0A4; (&#xB799;);&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAC00;&#xB2A5; &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; &#xB09C; &#xC790; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0;&#xC758; &#xCC38;&#xC5EC;&#xB294; &#xC5EC;&#xC804;&#xD788; &#xC560;&#xB9E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xAE30;&#xC874; &#xBC0F; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; PKCs &#xC804; &#xD328;&#xD134;&#xC744; &#xB530;&#xB77C; (cPKCs &#xBC0F; nPKCs, &#xAC01;&#xAC01;)&#xC5D0; &#xADF8; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC2DC;. Confocal &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95; &#xC2DD; RACK1, Cpkcs&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD2B9;&#xC815; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654;&#xB97C; &#xD45C;&#xC2DC;. MII &#xACC4;&#xB780;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC804; PKC&alpha;, &beta;II &#xBC0F; &delta;&#xC5D0; &#xADF8; &#xD53C; &#xC9C8; &#xD558; &#xACE0; RACK1, PKC&alpha; &#xBC0F; PKC&beta;II co-translocation&#xB97C; &#xC774;&#xB04C;&#xC5C8;&#xB2E4;. PKC &#xD611;&#xD68C; &#xB9D0;&#xB77C;, RACK1, &#xD568;&#xAED8; &#xB300;&#xB1CC; &#xD53C; &#xC9C8;&#xACFC; &#xB9BD; exocytosis (CGE)&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4; &#xB458; &#xB2E4; &#xACF5;&#xB3D9;-immunoprecipitation&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC785;&#xC99D; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xACC4;&#xB780; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; PKC&beta;II&#xC758; &#xAC10;&#xC18C; &#xC218;&#xC900;&#xACFC; &#xD568;&#xAED8; &#xC99D;&#xAC00; RACK1 &#xC218;&#xC900; &#xADC0;&#xCC29;&#xB418; &#xC5C8; &#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xBC14;&#xD0D5;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xACC4;&#xB780; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC2DC; RACK1 &#xC154;&#xD2C0; cPKCs &#xACC4;&#xB780; &#xD53C; &#xC9C8; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; CGE&#xC744; &#xCD09;&#xC9C4;.

&#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; C &#xD0A4; (&#xB799;) &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; C (PKC) &#xACC4;&#xB780; &#xC815;&#xD488; &#xC778;&#xC99D;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;.

&#x4F53;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x8EE2;&#x5EA7; PKCs &#x306E;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E; C &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; &#xFF08;&#x30E9;&#x30C3;&#x30AF;&#xFF09;; &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x4FC3;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x5375;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3078;&#x306E;&#x95A2;&#x4E0E;&#x306F;&#x307E;&#x3060;&#x3068;&#x3089;&#x3048;&#x3069;&#x3053;&#x308D;&#x306E;&#x306A;&#x3044;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x5F93;&#x6765;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x65B0;&#x898F;&#x306E; PKCs &#x306E;&#x8EE2;&#x6D41;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x304C;&#x7D9A;&#x3044;&#x3066;&#x3044;&#x308B; &#xFF08;cPKCs&#x3001;nPKCs&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;) &#x5375;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3002;&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x5F0F;&#x3068; RACK1&#x3001;cPKCs &#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x5C40;&#x5728;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;MII &#x5375;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x4E3B;&#x5C0E;&#x5375;&#x76AE;&#x8CEA; PKC&alpha; &#x30FB; &beta;II &#x30FB; &delta; &#x3078;&#x306E;&#x8EE2;&#x6D41;&#x3068; RACK1&#x3001;PKC&alpha; &#x3068; PKC&beta;II &#x306E; co-translocation&#x3002;&#x5354;&#x4F1A;&#x306E; PKC &#x3068;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9; RACK1 &#x3068;&#x8868;&#x5C64;&#x7C92;&#x30A8;&#x30AD;&#x30BD;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9; &#xFF08;CGE&#xFF09; &#x95A2;&#x4E0E;&#x304C;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x308B; co-&#x514D;&#x75AB;&#x6C88;&#x964D;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5375;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB; PKC&beta;II &#x306E;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x3068;&#x3068;&#x3082;&#x306B;&#x5897;&#x52A0; RACK1 &#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x8D77;&#x56E0;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x5375;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x308A; RACK1 &#x30B7;&#x30E3;&#x30C8;&#x30EB; cPKCs &#x5375;&#x76AE;&#x8CEA;&#x306B;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x3053;&#x3068;&#x305F;&#x3081; CGE &#x4FC3;&#x9032;&#x63D0;&#x6848;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E; C &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; &#xFF08;&#x30E9;&#x30C3;&#x30AF;&#xFF09; &#x3068;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; C (PKC) &#x306E;&#x5375;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3002;

&#x5728;&#x4F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x6613;&#x4F4D;&#x7684; pkcs # &#x88AB;&#x901A;&#x8FC7;&#x53D7;&#x4F53;&#x6FC0;&#x9176; C &#x6FC0;&#x6D3B; &#xFF08;&#x673A;&#x67B6;&#xFF09; &#xFF1B;&#x4E0D;&#x8FC7;&#x86CB;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x5176;&#x53C2;&#x4E0E;&#x662F;&#x4ECD;&#x7136;&#x96BE;&#x4EE5;&#x6349;&#x6478;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x9075;&#x5FAA;&#x7684;&#x5E38;&#x89C4;&#x548C;&#x65B0;&#x578B; pkcs # &#x6613;&#x4F4D;&#x6A21;&#x5F0F; &#xFF08;cPKCs &#x548C; nPKCs&#xFF0C;&#x5206;&#x522B;) &#x86CB;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x540E;&#x3002;&#x5171;&#x805A;&#x7126;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x663E;&#x793A;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x7684;&#x673A;&#x67B6; 1&#xFF0C;cPKCs &#x7684;&#x4E00;&#x79CD;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684;&#x53D7;&#x4F53;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x4FE1;&#x4EA7;&#x90E8;&#x9E21;&#x86CB;&#xFF0C;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x5BFC;&#x81F4;&#x79FB;&#x4F4D;&#x5230;&#x86CB;&#x76AE;&#x8D28;&#x7684; PKC&alpha;&#x3001; &beta;II &#x548C; &delta; &#x548C;&#x673A;&#x67B6; 1&#xFF0C;&#x4E0E; PKC&alpha; &#x548C; PKC&beta;II &#x7684; co-translocation&#x3002;&#x534F;&#x4F1A; PKC &#x548C;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x4E24;&#x4E2A;&#x5DF2;&#x77E5;&#x53C2;&#x4E0E;&#x76AE;&#x8D28;&#x9897;&#x7C92;&#x80DE; (CGE) &#x4E0E;&#x673A;&#x67B6; 1&#xFF0C;&#x8BC1;&#x660E;&#x4E86; co &#x6C89;&#x6DC0;&#x3002;&#x86CB;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x5BFC;&#x81F4;&#x4E00;&#x8D77;&#x7387;&#x4E0B;&#x964D;&#x7684; PKC&beta;II &#x7684;&#x673A;&#x67B6; 1 &#x6709;&#x6240;&#x589E;&#x52A0;&#x3002;&#x6839;&#x636E;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x86CB;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x540E;&#x673A;&#x67B6; 1 &#x822A;&#x5929;&#x98DE;&#x673A;&#x6FC0;&#x6D3B; cPKCs &#x5230;&#x86CB;&#x76AE;&#x5C42;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x4FBF;&#x5229;&#x4E13;&#x5BB6;&#x54A8;&#x8BE2;&#x5C0F;&#x7EC4;&#x3002;

&#x53D7;&#x4F53;&#x6FC0;&#x6D3B; C &#x6FC0;&#x9176; &#xFF08;&#x673A;&#x67B6;&#xFF09; &#x548C;&#x86CB;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; C (PKC)&#x3002;

In somatic cells, translocation of PKCs is facilitated by receptor for activated C kinase (RACK); however its involvement in egg activation is still elusive. We have followed the translocation pattern of conventional and novel PKCs (cPKCs and nPKCs, respectively) upon egg activation. Confocal microscopy indicated the expression and localization of RACK1, a specific receptor protein for cPKCs. Activation of MII eggs, led to translocation to the egg cortex of PKCÎ±, Î²II and Î´ and the co-translocation of RACK1, with both PKCÎ± and PKCÎ²II. The association of PKC and actin, both known to be involved in cortical granules exocytosis (CGE) with RACK1, was demonstrated by co-immunoprecipitation. Egg activation resulted in an increased RACK1 level along with a decreased level of PKCÎ²II. Based on these results, we suggest that upon egg activation, RACK1 shuttles activated cPKCs to the egg cortex, thus facilitating CGE.

Receptor for activated C kinase (RACK) and protein kinase C (PKC) in egg activation.

Dans les cellules somatiques, la translocation de PKCs est facilit&eacute;e par les r&eacute;cepteurs activ&eacute;s C kinase (RACK) ; Cependant, son implication dans l&#39;activation de l&#39;oeuf est toujours insaisissable. Nous avons suivi le mod&egrave;le de la translocation de PKCs classiques et nouveaux (cPKCs et nPKCs, respectivement) lors de l&#39;activation de l&#39;oeuf. Microscopie confocale, a indiqu&eacute; l&#39;expression et la localisation des racks 1, une prot&eacute;ine de r&eacute;cepteur sp&eacute;cifique pour cPKCs. Activation des oeufs MII, conduit &agrave; la translocation vers le cortex de l&#39;oeuf de PKC&alpha;, &beta;II et &delta; et le co-translocation de RACK1, avec PKC&alpha; et PKC&beta;II. L&#39;association de la PKC et l&#39;actine, tous deux connus pour &ecirc;tre impliqu&eacute;es dans l&#39;exocytose des granules corticaux (CGE) avec racks 1, a &eacute;t&eacute; d&eacute;montr&eacute;e par co-immunopr&eacute;cipitation. Activation de l&#39;oeuf a entra&icirc;n&eacute; un niveau accru de racks 1 ainsi qu&#39;un baisse du niveau de PKC&beta;II. Selon ces r&eacute;sultats, nous sugg&eacute;rons que lors de l&#39;activation de l&#39;oeuf, des navettes de racks 1 activ&eacute; cPKCs vers le cortex de le &oelig;uf, ce qui facilitera la CGE.

R&eacute;cepteur pour activ&eacute; la kinase C (RACK) et la prot&eacute;ine kinase C (PKC) dans l&#39;activation de l&#39;oeuf.

En las c&eacute;lulas som&aacute;ticas, desplazamiento de PKCs es facilitada por el receptor activado C quinasa (RACK); sin embargo, su participaci&oacute;n en la activaci&oacute;n del huevo es todav&iacute;a dif&iacute;cil. Hemos seguido el patr&oacute;n de desplazamiento de PKCs convencionales y novela (cPKCs e isoformas, respectivamente) activaci&oacute;n del huevo. Microscop&iacute;a confocal indica la expresi&oacute;n y localizaci&oacute;n de RACK1, una prote&iacute;na del receptor espec&iacute;fico para cPKCs. Activaci&oacute;n de huevos MII, condujo al desplazamiento a la corteza del huevo de PKC&alpha;, &beta;II y &delta; y el co-translocation de RACK1, PKC&alpha; y PKC&beta;II. La Asociaci&oacute;n de PKC y actina, ambos conocidos por estar involucrados en la exocitosis de gr&aacute;nulos corticales (CGE) con RACK1, fue demostrada por la co-inmunoprecipitaci&oacute;n. Activaci&oacute;n del huevo dio lugar a un mayor nivel de RACK1 junto con una disminuci&oacute;n del nivel de PKC&beta;II. Basado en estos resultados, le sugerimos que despu&eacute;s de la activaci&oacute;n del huevo, lanzaderas RACK1 activan cPKCs a la corteza del huevo, facilitando as&iacute; la CGE.

Receptor activado cinasa C (RACK) y prote&iacute;na quinasa C (PKC) en la activaci&oacute;n del huevo.

&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7684;&#x7CD6;&#x539F;&#x5408;&#x9176;&#x6FC0;&#x9176;-3 (GSK-3&#xFF09;&#xFF0C;&#x5173;&#x952E;&#x8C03;&#x8282;&#x5668;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3001; &#x8BA4;&#x77E5;&#x548C;&#x884C;&#x4E3A;&#xFF0C;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E24;&#x4E2A;&#x540C;&#x5DE5;&#x9176; GSK 3&alpha; &#x548C;&#x845B;&#x5170;&#x7D20;&#x53F2;&#x514B; 3&beta; &#x5B58;&#x5728;&#x3002;&#x5176;&#x72EC;&#x7279;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x529F;&#x80FD;&#x4E3B;&#x8981;&#x662F;&#x4E0D;&#x5F97;&#x800C;&#x77E5;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5BA1;&#x67E5;&#x4E86;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x540C;&#x5DE5;&#x9176;&#x7684;&#x8FDB;&#x5316;&#x610F;&#x4E49;&#x3002;&#x5947;&#x602A;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x4E0D;&#x540C;&#x4E8E;&#x5176;&#x4ED6;&#x6E2F;&#x53E3;&#x845B;&#x5170;&#x7D20;&#x53F2;&#x514B; 3 &#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x810A;&#x690E;&#x52A8;&#x7269;&#xFF0C;GSK 3&alpha; &#x57FA;&#x56E0;&#x662F;&#x9E1F;&#x7C7B;&#x4E2D;&#x7F3A;&#x5C11;&#x3002;GSK 3 &#x4ECB;&#x5BFC; tau &#x86CB;&#x767D;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x662F;&#x5F88;&#x4F4E;&#x7684;&#x6210;&#x5E74;&#x9E1F;&#x7684;&#x5927;&#x8111;&#x6BD4;&#x5728;&#x8001;&#x9F20;&#x7684;&#x5927;&#x8111;&#x4E2D;&#x4E00;&#x79CD;&#x73B0;&#x8C61;&#xFF0C;&#x8F6C;&#x8F7D; GSK 3&alpha; &#x6572;&#x9664;&#x5C0F;&#x9F20;&#x5927;&#x8111;&#x7684;&#x3002;Tau &#x86CB;&#x767D;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x4ECE;&#x6697;&#x793A;&#x845B;&#x5170;&#x7D20;&#x53F2;&#x514B; 3 &#x540C;&#x5DE5;&#x9176; tau &#x86CB;&#x767D;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x5728;&#x53D1;&#x5C55;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x626E;&#x6F14;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x89D2;&#x8272;&#x7684;&#x5C0F;&#x9E1F;&#x80DA;&#x80CE;&#x5927;&#x8111;&#x4E2D;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#x3002;&#x9E1F;&#x7C7B;&#x662F; GSK 3&alpha; &#x6316;&#x7A7A;&#x7684;&#x81EA;&#x7136;&#x751F;&#x7269;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B0;&#x6A21;&#x578B;&#x7814;&#x7A76;&#x804C;&#x80FD;&#x845B;&#x5170;&#x7D20;&#x53F2;&#x514B; 3 &#x540C;&#x5DE5;&#x9176;&#x7684;&#x533A;&#x522B;&#x3002;

&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x635F;&#x5931;&#x7684;&#x7CD6;&#x539F;&#x5408;&#x9176;&#x6FC0;&#x9176;-3&alpha; &#x9E1F;&#x7C7B;&#x4E2D;&#x63ED;&#x793A;&#x4E86;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x89D2;&#x8272;&#xFF0C;&#x4E3A;&#x845B;&#x5170;&#x7D20;&#x53F2;&#x514B; 3 tau &#x86CB;&#x767D;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x3002;

Mammalian glycogen synthase kinase-3 (GSK-3), a critical regulator in neuronal signaling, cognition, and behavior, exists as two isozymes GSK-3Î± and GSK-3Î². Their distinct biological functions remains largely unknown. Here, we examined the evolutionary significance of each of these isozymes. Surprisingly, we found that unlike other vertebrates that harbor both GSK-3 genes, the GSK-3Î± gene is missing in birds. GSK-3-mediated tau phosphorylation was significantly lower in adult bird brains than in mouse brains, a phenomenon that was reproduced in GSK-3Î± knockout mouse brains. Tau phosphorylation was detected in brains from bird embryos suggesting that GSK-3 isozymes play distinct roles in tau phosphorylation during development. Birds are natural GSK-3Î± knockout organisms and may serve as a novel model to study the distinct functions of GSK-3 isozymes.

Selective loss of glycogen synthase kinase-3Î± in birds reveals distinct roles for GSK-3 isozymes in tau phosphorylation.

Glycog&#xE8;ne synthase kinase-3 chez les mammif&#xE8;res (GSK-3), un r&#xE9;gulateur essentiel dans la signalisation neuronale, la cognition et le comportement, comme cela existe deux isozymes de la GSK-3&#x3B1; et GSK-3&#x3B2;. Leurs fonctions biologiques distinctes reste largement inconnu. Ici, nous avons examin&#xE9; l&#x26;#39;importance de l&#x26;#39;&#xE9;volution de chacun de ces isoenzymes. &#xC9;tonnamment, nous avons trouv&#xE9; que, contrairement &#xE0; d&#x26;#39;autres vert&#xE9;br&#xE9;s qui abritent les deux GSK-3 g&#xE8;nes, le g&#xE8;ne de la GSK-3&#x3B1; est manquant chez les oiseaux. Phosphorylation de tau GSK-3-m&#xE9;diation &#xE9;tait significativement plus faible dans les cerveaux d&#x26;#39;oiseaux adultes que dans les cerveaux de souris, un ph&#xE9;nom&#xE8;ne qui a &#xE9;t&#xE9; reproduite dans la GSK-3a cerveaux de souris knock-out. Phosphorylation de Tau a &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;tect&#xE9; dans le cerveau &#xE0; partir d&#x26;#39;embryons d&#x26;#39;oiseaux sugg&#xE9;rant que la GSK-3 isoenzymes jouent des r&#xF4;les distincts dans la phosphorylation de tau au cours du d&#xE9;veloppement. Les oiseaux sont-organismes naturels, knock-out de la GSK-3a et peut servir comme un nouveau mod&#xE8;le pour &#xE9;tudier les fonctions distinctes de la GSK-3 isozymes.

Perte s&#xE9;lective de la glycog&#xE8;ne synthase kinase-3&#x3B1; chez les oiseaux r&#xE9;v&#xE8;le des r&#xF4;les distincts pour GSK-3 isozymes de la phosphorylation de Tau

S&auml;ugetier-Glykogen-Synthase Kinase-3 (GSK-3), einen kritischen Regulator in neuronale Signale, Kognition und Verhalten, vorhanden als zwei Isoenzyme GSK-3&alpha; und GSK-3&beta;. Ihre eindeutigen biologischen Funktionen bleibt weitgehend unbekannt. Hier haben wir die evolution&auml;re Bedeutung der einzelnen dieser Isoenzyme gepr&uuml;ft. &Uuml;berraschenderweise fanden wir, dass im Gegensatz zu anderen Wirbeltieren, die beide GSK-3-Gene zu beherbergen, das GSK-3&alpha;-gen bei V&ouml;geln fehlt. GSK-3-vermittelter Tau Phosphorylierung war Erwachsenen Vogel Gehirne erheblich niedriger als in Maus-Gehirn, Gehirn, ein Ph&auml;nomen, das in GSK-3&alpha;-Knockout-Maus reproduziert wurde. Tau Phosphorylierung wurde festgestellt, in den Gehirnen von Vogel-Embryos, die darauf hindeutet, dass GSK-3 Isoenzyme unterschiedliche Rollen in Tau Phosphorylierung w&auml;hrend der Entwicklung spielen. V&ouml;gel sind nat&uuml;rliche Organismen, GSK-3&alpha; k.o. und dienen als neuartige Modell die unterschiedlichen Funktionen der GSK-3 Isoenzyme zu studieren.

Selektive Verlust der Glykogen-Synthase Kinase-3&alpha; V&ouml;geln zeigt unterschiedliche Rollen f&uuml;r GSK-3 Isoenzyme der Tau-Phosphorylierung.

Mammiferi glicogeno sintasi chinasi-3 (GSK-3), un regolatore critico nella segnalazione neuronale, cognizione e comportamento, esiste come due isoenzimi GSK-3 &alpha; e GSK-3beta. Loro funzioni biologiche distinte rimane in gran parte sconosciuto. Qui, abbiamo esaminato il significato evolutivo di ciascuno di questi isoenzimi. Sorprendentemente, abbiamo scoperto che a differenza di altri vertebrati che porto entrambi GSK-3 i geni, il gene di GSK-3 &alpha; &egrave; manca in uccelli. La fosforilazione mediata da GSK-3 tau era significativamente inferiore nel cervello adulto uccello nel cervello del mouse, un fenomeno che &egrave; stato riprodotto nel topo knockout GSK-3 &alpha; cervelli. La fosforilazione di tau &egrave; stata rilevata nel cervello da embrioni di uccelli suggerendo che GSK-3 isoenzimi svolgono ruoli distinti nella fosforilazione tau durante lo sviluppo. Gli uccelli sono naturali GSK-3 &alpha; knockout organismi e possono servire come modello per studiare le funzioni distinte di GSK-3 isoenzimi romanzo.

Perdita selettiva di glicogeno sintasi chinasi-3 &alpha; in uccelli rivela ruoli distinti per GSK-3 isoenzimi della fosforilazione tau.

&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306E;&#x30B0;&#x30EA;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;-3&#xFF08;GSK-3&#xFF09;&#x3001;&#x795E;&#x7D4C;&#x4F1D;&#x9054;&#x3001;&#x8A8D;&#x77E5;&#x3001;&#x884C;&#x52D5;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;2&#x3064;&#x306E;&#x30A2;&#x30A4;&#x30BD;&#x30B6;&#x30A4;&#x30E0;GSK-3&#x3B1;&#x3068;GSK-3&#x3B2;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x5B58;&#x5728;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x5927;&#x90E8;&#x5206;&#x306F;&#x4F9D;&#x7136;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x4E0D;&#x660E;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30A2;&#x30A4;&#x30BD;&#x30B6;&#x30A4;&#x30E0;&#x306E;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x306E;&#x9032;&#x5316;&#x306E;&#x610F;&#x7FA9;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x9A5A;&#x304F;&#x3079;&#x304D;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x4ED6;&#x306E;&#x810A;&#x690E;&#x52D5;&#x7269;&#x3068;&#x306F;&#x7570;&#x306A;&#x308A;&#x3001;&#x6E2F;GSK-3&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x304C;&#x3001;GSK-3&#x3B1;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306F;&#x9CE5;&#x985E;&#x306B;&#x6B20;&#x3051;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x308F;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002; GSK-3&#x5A92;&#x4ECB;&#x30BF;&#x30A6;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306F;&#x3001;GSK-3&#x3B1;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30A2;&#x30A6;&#x30C8;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x8133;&#x3067;&#x518D;&#x73FE;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x73FE;&#x8C61;&#x306F;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x8133;&#x306B;&#x6BD4;&#x3079;&#x3066;&#x5927;&#x4EBA;&#x306E;&#x9CE5;&#x306E;&#x8133;&#x3067;&#x6709;&#x610F;&#x306B;&#x4F4E;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x30BF;&#x30A6;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306F;GSK-3&#x30A2;&#x30A4;&#x30BD;&#x30B6;&#x30A4;&#x30E0;&#x306F;&#x958B;&#x767A;&#x4E2D;&#x306E;&#x30BF;&#x30A6;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x9CE5;&#x306E;&#x80DA;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x8133;&#x304C;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x9CE5;&#x306F;&#x81EA;&#x7136;&#x306E;GSK-3&#x3B1;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30A2;&#x30A6;&#x30C8;&#x751F;&#x7269;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;GSK-3&#x30A2;&#x30A4;&#x30BD;&#x30B6;&#x30A4;&#x30E0;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x7814;&#x7A76;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x5F79;&#x7ACB;&#x3064;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;

&#x9CE5;&#x306E;&#x30B0;&#x30EA;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;-3&#x3B1;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x640D;&#x5931;&#x306F;&#x3001;Tau&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;GSK-3&#x30A2;&#x30A4;&#x30BD;&#x30B6;&#x30A4;&#x30E0;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;

&#xD3EC;&#xC720;&#xB958; glycogen synthase &#xB2C8; 3 (GSK-3), &#xC2E0;&#xACBD; &#xC2E0;&#xD638;, &#xC778;&#xC2DD;&#xACFC; &#xD589;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130; &#xB450; isozymes 3&alpha; GSK&#xC640; GSK-3&beta;&#xB85C; &#xC874;&#xC7AC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xACE0;&#xC720;&#xD55C; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;&#xC801; &#xAE30;&#xB2A5; &#xD06C;&#xAC8C; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C0;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; &#xB0A8;&#xC544; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0;&#xC11C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xAC01;&#xC774; isozymes&#xC758; &#xC9C4;&#xD654;&#xC758; &#xAC80;&#xC0AC;. &#xB180;&#xB78D;&#xAC8C;&#xB3C4;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xD56D;&#xAD6C;&#xC758; &#xB450; GSK-3 &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB294; &#xB2E4;&#xB978; &#xCC99;&#xCD94; &#xB3D9;&#xBB3C;, &#xB2EC;&#xB9AC; GSK 3&alpha; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC870;&#xB958;&#xC5D0;&#xB294; &#xBC1C;&#xACAC;. GSK 3 &#xC911;&#xC7AC; &#xD0C0;&#xC6B0; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xB294; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xB1CC;&#xC5D0;&#xC11C; GSK 3&alpha; &#xB179;&#xC544;&#xC6C3; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xC7AC;&#xD604; &#xB41C; &#xD604;&#xC0C1;&#xC774; &#xB450;&#xB1CC; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xC131;&#xC778; &#xC870;&#xB958; &#xB450;&#xB1CC;&#xC5D0; &#xD604;&#xC800; &#xD558; &#xAC8C; &#xB0AE;&#xC740;. &#xD0C0;&#xC6B0; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xB294; GSK-3 isozymes &#xD0C0;&#xC6B0; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xB69C;&#xB837;&#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC7AC;&#xC0DD; &#xC81C;&#xC548; &#xC870;&#xB958; &#xBC30;&#xC544;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB450;&#xB1CC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC870;&#xB958; &#xC790;&#xC5F0; GSK 3&alpha; &#xB179;&#xC544;&#xC6C3; &#xC720;&#xAE30; &#xCCB4;&#xC640; GSK-3 isozymes&#xC758; &#xACE0;&#xC720; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xACF5;&#xBD80; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xBAA8;&#xB378;&#xC774; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Glycogen synthase &#xD0A4;-3&alpha; &#xC0C8; &#xB4E4;&#xC758; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &#xC190;&#xC2E4; &#xD0C0;&#xC6B0; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC5D0; GSK-3 isozymes&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB69C;&#xB837;&#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900;&#xB2E4;.

La gluc&#xF3;geno sintasa quinasa-3 mam&#xED;feros (GSK-3), un regulador cr&#xED;tico en la se&#xF1;alizaci&#xF3;n neuronal, la cognici&#xF3;n y el comportamiento, existe como dos isoenzimas de la GSK-3&#x3B1; y GSK 3&#x3B2;-. Sus funciones biol&#xF3;gicas diferentes sigue siendo desconocida. Aqu&#xED;, examinamos el significado evolutivo de cada una de estas isoenzimas. Sorprendentemente, se encontr&#xF3; que a diferencia de otros vertebrados que albergan ambos GSK-3 genes, el gen GSK-3&#x3B1; falta en las aves. GSK-3-mediada por la fosforilaci&#xF3;n de tau fue significativamente menor en los cerebros de aves adultas que en los cerebros de los ratones, un fen&#xF3;meno que se reproduce en el GSK-3alfa cerebros de ratones knock-out. Fosforilaci&#xF3;n de tau fue detectado en cerebros de embriones de aves lo que sugiere que la GSK-3 isoenzimas desempe&#xF1;ar distintas funciones en la fosforilaci&#xF3;n de tau durante el desarrollo. Las aves son naturales de GSK-3alfa organismos knockout y puede servir como un nuevo modelo para estudiar las distintas funciones de la GSK-3 isoenzimas.

La p&#xE9;rdida selectiva de la gluc&#xF3;geno sintasa quinasa-3&#x3B1; en las aves revela que distintas funciones de la GSK-3 isoenzimas en la fosforilaci&#xF3;n de tau

Lina Alon

Department of Pathology,
Sackler School of Medicine,
Department of Pathology, Sackler School of Medicine

Tel Aviv University

Isolation of Normal and Cancer-associated Fibroblasts from Fresh Tissues by Fluorescence Activated Cell Sorting (FACS)

Lina Alon

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Department of Pathology,Sackler School of Medicine,Department of Pathology, Sackler School of Medicine

Tel Aviv University

Isolation of Normal and Cancer-associated Fibroblasts from Fresh Tissues by Fluorescence Activated Cell Sorting (FACS)

Department of Pathology,
Sackler School of Medicine,
Department of Pathology, Sackler School of Medicine