Zamierzamy pomóc innym zespołom badawczym w przeprowadzaniu operacji transferu zarodków u loszek, ponieważ transfer zarodków jest kluczowym krokiem w produkcji genetycznie zmodyfikowanych świń, które zostaną wykorzystane jako modele eksperymentalne. Istnieją inne nowoczesne metody chirurgicznego transferu zarodków świń, takie jak laparoskopia. Jednak, jak opisano w naszym badaniu, laparotomia pozostaje najbardziej niezawodną metodą przenoszenia gatunków choroby Rungego.
Obecne wyzwania obejmują zarówno produkcję in vitro zarodków świń, jak i doskonałą synchronizację między loszkami zastępczymi w stadium embrionalnym. Ponadto zabieg chirurgiczny wymaga od chirurga sprawności manualnej, aby nie doprowadzić do uszkodzenia zwężeń jajników i znalezienia odpowiedniego miejsca do osadzenia się zarodka. Nasz protokół wypełnia lukę badawczą, opisując i szczegółowo pokazując wszystkie typy, które wykonują szczyty operacji transferu zarodków, wspominając w trendach przedwstępnych i opiece pooperacyjnej, że konieczne jest bezpieczne i skuteczne przeprowadzenie operacji.
Konieczne jest odsłonięcie tylko jajników, co ogranicza manipulację narządów, minimalizuje ryzyko zrostu i niepowodzenia ciąży. Zastosowanie szwów zamiast szwów do zamykania skóry sprawia również, że procedura jest szybsza i mniej prawdopodobne, że spowoduje stres u zwierząt podczas zdejmowania szwów. Na początek przygotuj stół operacyjny z odpowiednimi sterylnymi narzędziami.
Po wykonaniu antyseptyki pola operacyjnego u znieczulonego zwierzęcia, należy umieścić serwetę chirurgiczną na przedostatniej parze pachwinowych gruczołów sutkowych. Za pomocą nożyczek utwórz prostokątny otwór w serwety chirurgicznej i umieść cztery zaciski tylne, aby zabezpieczyć serwetę chirurgiczną na skórze zwierzęcia Za pomocą skalpela wykonaj nacięcie o długości około 10 centymetrów. Osiągnij hemostazę naczyń podskórnych za pomocą kleszczy hemostatycznych i wchłanialnego szwu o rozmiarze dwa.
Za pomocą cienkich spiczastych nożyczek lub palców wypreparuj tkankę podskórną, pogłębiając nacięcie, aby dotrzeć do kresy białej w mięśniach brzucha. Za pomocą kleszczy Alice chwyć i unieś mięśnie, aby wykonać nacięcie w linea alba za pomocą skalpela. Włóż palec wskazujący do nacięcia, aby ocenić obecność zrostów.
Rozciągnij nacięcie na kresę białą w kierunku czaszki, unikając obrażeń innych narządów i leżących poniżej struktur. Włóż jedną rękę do jamy brzusznej, aby zlokalizować i zewnętrzizować jajniki. Jeśli znajduje się jeden z rogów macicy, delikatnie podążaj za nim, aż dojdziesz do czubka rogu macicy i jajnika ipsilateralnego.
Po zlokalizowaniu jajnika delikatnie go pociągnij i ostrożnie odsłoń. Oceń obecność pęcherzyków przedowulacyjnych, krwotocznych corpraludia, cyklicznych corpraludia i ciał albicans, aby ocenić, czy synchronizacja loszek jest zgodna z oczekiwaniami. Delikatnie usuń włókniste jajowody zakrywającego jajnik i skieruj jego błonę śluzową, aby zlokalizować osteum jajowodu.
Następnie ostrożnie włóż cewnik kociaka zawierający zarodki do osteum fimbrii, aż dotrze do impali jajowodu. Podłącz strzykawkę o pojemności jednego mililitra do cewnika kocura, aby wepchnąć zarodek zawierający płyn do rurki macicy. Przykryj jajnik fimbriami i przywróć go do jamy brzusznej.
Jeśli trudno jest zidentyfikować osteum, użyj okrągłej igły do szwów, aby utworzyć kieszeń na impali jajowodu. Następnie włóż cewnik kocura zawierający zarodki. Następnie zmień położenie struktur wewnątrz jamy brzusznej.
Aby zapobiec zrostom, dodaj do jamy brzusznej jeden litr soli fizjologicznej lub roztworu mleczanu Ringera o temperaturze 39 stopni Celsjusza. Następnie zszyj mięśnie brzucha szwem wchłanialnym w rozmiarze 2 w X przerwanych szwach. Zamknij skórę klejem z cyjanoakrytem etylu.
Po oczyszczeniu rany pooperacyjnej nałóż rapamycynę lub maść Pearsona i przykryj obszar gazą. Na koniec nałóż klej chirurgiczny. Dziewięć loszek przeszło operację, przy czym średnio 185 sklonowanych zarodków przeniesiono na jedną loszkę, co daje w sumie 1 664 zarodki przeniesione obustronnie.
Żadne zwierzę nie wykazywało oznak intensywnego bólu po operacji, a średnia ocena bólu wahała się od 0,33 do 4,67 w skali bólu od zera do 18 wykonanej w ciągu trzech dni pooperacyjnych dla każdej z loszek.
