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Combination of Microstereolithography and Electrospinning to Produce Membranes Equipped with Niches for Corneal Regeneration

Corneal problems affect millions of people worldwide reducing their quality of life significantly. Corneal disease can be caused by illnesses such as ...

University of Sheffield

Primary fatty acid amides (R-CO-NH2) and N-acylglycines (R-CO-NH-CH2-COOH) are classes of compounds that have only recently been isolated and characterized from biological sources. Key questions remain regarding how these lipid amides are produced and degraded in biological systems. Relative to the fatty acids, little has been done to develop methods to separate and quantify the fatty acid amides and N-acylglycines. We describe reversed phase HPLC methods for the separation of C2-C12 primary fatty acid amides and N-acylglycines and also C12-C22 fatty acid amides. Separation within each class occurs primarily on the basis of simple interactions between the acyl chain and the chromatographic stationary phase, but the polar headgroups on these and related fatty acids and N-acylethanolamides modulate the absolute retention in reversed phase mode. We use these methods to measure the enzyme-mediated, two-step conversion of N-octanoylglycine to octanoamide.

Use of reversed phase HP liquid chromatography to assay conversion of N-acylglycines to primary fatty acid amides by peptidylglycine-alpha-amidating monooxygenase.

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Our aim was to develop an improved cell transfer system for delivering laboratory-cultured human limbal epithelial cells to the cornea, which would be low risk for the patient and convenient to use for the surgeon. We took a standard contact lens and developed a plasma polymer layer for coating this for attachment of cells to the lens and subsequent transfer of cells to the cornea. A range of plasma polymer surfaces were examined for initial cell attachment using three different combinations of human and rabbit epithelial and stromal cells, initially expanding cells both with and without bovine serum. The most promising surfaces, based on acrylic acid, were then coated onto contact lenses. Cell transfer from the lenses to the denuded surface of a 3D rabbit organ culture model was then used to make a second selection of substrates, which permitted reliable cell transfer. Primary rabbit and human corneal cells attached and proliferated well on acrylic acid-coated surfaces. Reliable transfer of primary epithelial cells from the coated contact lenses to a rabbit cornea was achieved by coating lenses with acrylic acid at 5 W/10 cm(3)/min and using cell densities of 1 x 10(5)/lens and above.

Development of a surface-modified contact lens for the transfer of cultured limbal epithelial cells to the cornea for ocular surface diseases.

Notre objectif &eacute;tait de d&eacute;velopper un syst&egrave;me de transfert de cellule am&eacute;lior&eacute;e pour livraison cultiv&eacute;es en laboratoire humains limbique cellules &eacute;pith&eacute;liales de la corn&eacute;e, ce qui serait &agrave; faible risque pour le patient et pratique &agrave; utiliser pour le chirurgien. Nous avons pris une lentille de contact standard et d&eacute;velopp&eacute; une couche de polym&egrave;re de plasma pour ce rev&ecirc;tement pour la fixation des cellules &agrave; la lentille et transfert ult&eacute;rieur des cellules de la corn&eacute;e. Une gamme de surfaces polym&egrave;res plasma ont &eacute;t&eacute; examin&eacute;s pour la fixation des cellules initiales en utilisant trois diff&eacute;rentes combinaisons d&#39;homme et de cellules &eacute;pith&eacute;liale et stromale lapin, initialement en expansion des cellules avec et sans s&eacute;rum bovin. Les surfaces plus prometteurs, bas&eacute;s sur l&#39;acide acrylique, ont ensuite &eacute;taient adsorb&eacute; sur les lentilles de contact. Transfert de cellules de lentilles &agrave; la surface d&eacute;nud&eacute;e d&#39;un mod&egrave;le de culture d&#39;organes 3D lapin fut ensuite utilis&eacute; pour faire un deuxi&egrave;me choix de substrats, ce qui a permis le transfert fiable de cellules. Lapin primaire et des cellules corn&eacute;ennes humaines attach&eacute; et se sont multipli&eacute;s bien sur les surfaces recouvertes d&#39;acide acrylique. Transfert fiable des cellules &eacute;pith&eacute;liales primaires depuis les enduits lentilles de contact &agrave; une corn&eacute;e de lapin a &eacute;t&eacute; r&eacute;alis&eacute; par rev&ecirc;tement de lentilles avec de l&#39;acide acrylique &agrave; 5 W/10 cm 3/min et &agrave; l&#39;aide de la densit&eacute; des cellules de 1 x 10 5/objectif et au-dessus.

D&eacute;veloppement d&#39;une lentille de contact surface-modifi&eacute;e pour le transfert de cellules &eacute;pith&eacute;liales limbique cultiv&eacute;es &agrave; la corn&eacute;e pour maladies oculaires de surfaces.

Unser Ziel war es, eine verbesserte Zell-Transfersystem f&uuml;r liefernde Labor-kultivierte menschliche limbal Epithelzellen auf der Hornhaut zu entwickeln, die geringes Risiko f&uuml;r den Patienten und f&uuml;r den Chirurgen benutzerfreundlich sein w&uuml;rde. Wir nahmen eine Kontakt-Standardobjektiv und entwickelt eine Polymerschicht Plasma f&uuml;r die Beschichtung von dies f&uuml;r Anhaftung von Zellen der Linse und nachfolgende &Uuml;bertragung der Zellen auf der Hornhaut. Eine Reihe von Plasma Polymer Oberfl&auml;chen wurden f&uuml;r die erste Zelle-Anlage, die mit drei verschiedenen Kombinationen von Mensch und Kaninchen epitheliale und Stromale Zellen, zun&auml;chst Ausbau Zellen sowohl mit als auch ohne Rinderserum untersucht. Die vielversprechendsten Oberfl&auml;chen, auf der Grundlage von Acryls&auml;ure, wurden dann auf Kontaktlinsen beschichtet. Zelle &Uuml;bertragung von Linsen auf die nachwachsendes Oberfl&auml;che eines 3D Kaninchen-Orgel-Kultur-Modells wurde dann verwendet, um eine zweite Auswahl von Substraten, machen die zuverl&auml;ssige Zellen erlaubt. Prim&auml;re Kaninchen und menschlichen Hornhaut Zellen angef&uuml;gt und stark vermehrt auch auf Acryls&auml;ure-beschichteten Oberfl&auml;chen. Zuverl&auml;ssige Daten&uuml;bermittlung prim&auml;re Epithelzellen aus beschichtetem Kontaktlinsen auf der Hornhaut Kaninchen wurde durch Beschichtung Objektive mit Acryls&auml;ure mit 5 W/10 cm 3/min und mit Zelldichten von 1 x 10 5/Objektiv und dar&uuml;ber erreicht.

Entwicklung einer Oberfl&auml;che-modifiziert-Kontakt-Linse f&uuml;r die &Uuml;bertragung der kultivierten limbal Epithelzellen auf der Hornhaut f&uuml;r Augenerkrankungen Oberfl&auml;che.

Il nostro obiettivo era quello di sviluppare un sistema di trasferimento migliorato cella per consegna coltivate in laboratorio limbare cellule epiteliali umane alla cornea, che sarebbe stato a basso rischio per il paziente e comodo da usare per il chirurgo. Abbiamo preso una lente a contatto standard e sviluppato uno strato di polimero di plasma per questo rivestimento per fissaggio delle cellule alla lente e successivo trasferimento delle cellule alla cornea. Una vasta gamma di superfici polimeriche di plasma sono stati esaminati per fissaggio cellula iniziale utilizzando tre diverse combinazioni di umani e di cellule epiteliali e stromali coniglio, inizialmente espandendo cellule con e senza siero bovino. Le superfici pi&ugrave; promettenti, basate su acido acrilico, sono stati poi rivestiti su lenti a contatto. Trasferimento di cellule dalle lenti alla superficie di un modello di cultura organo coniglio 3D denudata fu usato per fare una seconda selezione dei substrati, che ha consentito il trasferimento affidabile cella. Coniglio primaria e le cellule della cornea umane associata e proliferavano anche su superfici rivestite con acido acrilico. Trasferimento affidabile di cellule epiteliali primarie dalle lenti a contatto rivestite di una cornea di coniglio &egrave; stato raggiunto da lenti di rivestimento con acido acrilico a 5 W/10 cm (3) / min e con densit&agrave; di 1 x 5 di cella / lente e sopra.

Sviluppo di una lente a contatto superficie modificata per il trasferimento di cellule epiteliali limbici coltivate alla cornea per malattie oculari superficiali.

&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x76EE;&#x7684;&#x306F;&#x3001;&#x6539;&#x5584;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30BB;&#x30EB;&#x8EE2;&#x9001;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x691C;&#x67FB;&#x5BA4;&#x57F9;&#x990A;&#x3072;&#x3068;&#x8F2A;&#x90E8;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x7528;&#x4F4E;&#x30EA;&#x30B9;&#x30AF;&#x60A3;&#x8005;&#x3068;&#x5916;&#x79D1;&#x533B;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x4FBF;&#x5229;&#x3068;&#x306A;&#x308B;&#x89D2;&#x819C;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x6A19;&#x6E96;&#x7684;&#x306A;&#x30B3;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AF;&#x30C8; &#x30EC;&#x30F3;&#x30BA;&#x3092;&#x53D6;&#x308A;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30A2;&#x30BF;&#x30C3;&#x30C1;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8; &#x30EC;&#x30F3;&#x30BA;&#x3078;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5F8C;&#x7D9A;&#x306E;&#x8EE2;&#x9001;&#x304C;&#x89D2;&#x819C;&#x306B;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x7528;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE; &#x30DD;&#x30EA;&#x30DE;&#x30FC;&#x5C64;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x9AD8;&#x5206;&#x5B50;&#x8868;&#x9762;&#x306E;&#x7BC4;&#x56F2;&#x306F; 3 &#x3064;&#x306E;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3068;&#x30A6;&#x30B5;&#x30AE;&#x306E;&#x4E0A;&#x76AE;&#x3084;&#x9593;&#x8CEA;&#x7D30;&#x80DE;&#x3001;&#x5F53;&#x521D;&#x7D30;&#x80DE;&#x4E21;&#x65B9;&#x3068;&#x30A6;&#x30B7;&#x8840;&#x6E05;&#x306A;&#x3057;&#x62E1;&#x5927;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x521D;&#x671F;&#x7D30;&#x80DE;&#x63A5;&#x7740;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x305F;&#x3002;&#x5F53;&#x6642;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30EA;&#x30EB;&#x9178;&#x4E0A;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x6700;&#x3082;&#x6709;&#x671B;&#x306A;&#x30B5;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30B9;&#x4E0A;&#x306B;&#x30B3;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AF;&#x30C8; &#x30EC;&#x30F3;&#x30BA;&#x3092;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30EC;&#x30F3;&#x30BA;&#x304B;&#x3089; 3 D &#x30A6;&#x30B5;&#x30AE;&#x5668;&#x5B98;&#x57F9;&#x990A;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306E;&#x88F8;&#x51FA;&#x8868;&#x9762;&#x3078;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x8EE2;&#x9001;&#x306F;&#x3001;&#x4FE1;&#x983C;&#x6027;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x30BB;&#x30EB;&#x8EE2;&#x9001;&#x8A31;&#x53EF;&#x57FA;&#x677F;&#x306E;&#x7B2C; 2 &#x9078;&#x629E;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DE;&#x30EA; &#x30A6;&#x30B5;&#x30AE;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x3072;&#x3068;&#x89D2;&#x819C;&#x7D30;&#x80DE;&#x6DFB;&#x4ED8;&#x3001;&#x3088;&#x304F;&#x3001;&#x30A2;&#x30AF;&#x30EA;&#x30EB;&#x9178;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x306B;&#x5897;&#x6B96;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4E0A;&#x5857;&#x3092;&#x65BD;&#x3057;&#x3066;&#x3042;&#x308B;&#x30B3;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AF;&#x30C8; &#x30EC;&#x30F3;&#x30BA; &#x30A6;&#x30B5;&#x30AE;&#x89D2;&#x819C;&#x3078;&#x306E;&#x4E00;&#x6B21;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x4FE1;&#x983C;&#x6027;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x8EE2;&#x9001;&#x3068;&#x30A2;&#x30AF;&#x30EA;&#x30EB;&#x9178; 5 W/10 &#x30BB;&#x30F3;&#x30C1;&#x30E1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30EB; (3) &#x3067;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; &#x30EC;&#x30F3;&#x30BA;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x9054;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;/min &#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x306E; 5 x 1/&#x30EC;&#x30F3;&#x30BA;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x4E0A;&#x8A18;&#x3002;

&#x8868;&#x9762;&#x6539;&#x8CEA;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AF;&#x30C8; &#x30EC;&#x30F3;&#x30BA;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306B;&#x773C;&#x8868;&#x9762;&#x75BE;&#x60A3;&#x306F;&#x89D2;&#x819C;&#x8F2A;&#x90E8;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x8EE2;&#x9001;&#x3002;

Nuestro objetivo era desarrollar un sistema de transferencia de c&eacute;lula mejorada para entregar cultivadas en laboratorio humanos limbares c&eacute;lulas epiteliales a la c&oacute;rnea, que ser&iacute;a de bajo riesgo para el paciente y conveniente utilizar para el cirujano. Tomamos una lente de contacto est&aacute;ndar y hab&iacute;a desarrollado una capa de pol&iacute;mero de plasma para esta capa para fijaci&oacute;n de c&eacute;lulas a la lente y posterior traslado de las c&eacute;lulas a la c&oacute;rnea. Una gama de superficies de pol&iacute;mero de plasma fueron examinados para la fijaci&oacute;n de la c&eacute;lula inicial usando tres diferentes combinaciones de humanos y c&eacute;lulas epiteliales y stromal de conejo, expandiendo inicialmente las c&eacute;lulas tanto con como sin suero bovino. Las superficies m&aacute;s prometedores, basadas de &aacute;cido acr&iacute;lico, fueron luego recubierto lentes de contacto. Transferencia de c&eacute;lulas en las lentes a la superficie denudada de un modelo de cultura de &oacute;rgano de conejo 3D entonces fue utilizado para hacer una segunda selecci&oacute;n de substratos, que permite la transferencia de c&eacute;lulas confiable. Conejo primaria y c&eacute;lulas c&oacute;rneas humanas Unido y proliferaron bien en superficies recubiertas de &aacute;cido acr&iacute;lico. Transferencia fiable de las c&eacute;lulas epiteliales primarias en las lentes de contacto recubiertas a una c&oacute;rnea de conejo fue alcanzada por el recubrimiento de lentes con &aacute;cido acr&iacute;lico a 5 W/10 cm 3/min y con densidades de celda de 1 x 10 5/lente y por encima de.

Desarrollo de una lente de contacto de superficie modificada para la transferencia de c&eacute;lulas epiteliales limbares cultivadas a la c&oacute;rnea para enfermedades de superficies oculares.

&#x82E5;&#x8981;&#x8BC4;&#x4F30;&#x7684;&#x89D2;&#x819C;&#x7F18;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x63D0;&#x4F9B;&#x53EF;&#x751F;&#x7269;&#x964D;&#x89E3;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8F7D;&#x4F53;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7EBA; poly(lactide-co-glycolide) &#x819C;&#x7684;&#x6F5C;&#x529B;&#x3002;

&#x4F7F;&#x7528; poly(lactide-co-glycolide) &#x7535;&#x7EBA;&#x652F;&#x67B6;&#x9001;&#x89D2;&#x819C;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;

To assess the potential of electrospun poly(lactide-co-glycolide) membranes to provide a biodegradable cell carrier system for limbal epithelial cells.

Using poly(lactide-co-glycolide) electrospun scaffolds to deliver cultured epithelial cells to the cornea.

Pour &eacute;valuer le potentiel des membranes poly(lactide-co-glycolide) &eacute;lectrofil&eacute;es pour fournir un syst&egrave;me de support de cellule biod&eacute;gradables pour les cellules &eacute;pith&eacute;liales limbique.

&Agrave; l&#39;aide d&#39;&eacute;chafaudages &eacute;lectrofil&eacute;es poly(lactide-co-glycolide) pour livrer des cellules &eacute;pith&eacute;liales de la corn&eacute;e.

Um das Potenzial der Electrospun poly(lactide-co-glycolide) Membranen, ein biologisch abbaubare Zelle-Tr&auml;gersystem f&uuml;r limbal Epithelzellen zu bewerten.

Verwenden poly(lactide-co-glycolide)-Electrospun-Ger&uuml;sten kultivierte Epithelzellen an der Hornhaut zu liefern.

Per valutare il potenziale delle membrane poly(lactide-co-glycolide) elettrofilate per fornire un sistema di trasporto cellulare biodegradabile per limbare cellule epiteliali.

Utilizzando poly(lactide-co-glycolide) elettrofilate ponteggi per fornire cellule epiteliali coltivate alla cornea.

&#x8F2A;&#x90E8;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x751F;&#x5206;&#x89E3;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x30AD;&#x30E3;&#x30EA;&#x30A2; &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x30A8;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x30ED;&#x30B9;&#x30D4;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0; poly(lactide-co-glycolide) &#x819C;&#x306E;&#x30DD;&#x30C6;&#x30F3;&#x30B7;&#x30E3;&#x30EB;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3002;

Poly(lactide-co-glycolide) &#x30A8;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x30ED;&#x30B9;&#x30D4;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x8DB3;&#x5834;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x89D2;&#x819C;&#x306B;&#x57F9;&#x990A;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Limbal &#xC0C1;&#xD53C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0DD; &#xBD84;&#xD574;&#xC131; &#xC140; &#xCE90;&#xB9AC;&#xC5B4; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; electrospun poly(lactide-co-glycolide) &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9;&#xC758; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825;&#xC744; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Poly(lactide-co-glycolide) electrospun &#xAC74;&#xC124; &#xAE30;&#xACC4; &#xC784;&#xB300;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xAC01; &#xB9C9;&#xC5D0; &#xBC30;&#xC591;&#xB41C; &#xC0C1;&#xD53C; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5;.

Para evaluar el potencial de las membranas de poly(lactide-co-glycolide) de electrospun para proporcionar un sistema de portador de c&eacute;lula biodegradables para c&eacute;lulas epiteliales limbares.

Uso poly(lactide-co-glycolide) electrospun andamios para ofrecer las c&eacute;lulas epiteliales cultivadas a la c&oacute;rnea.

&#x8FD9;&#x9879;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x7684;&#x76EE;&#x7684;&#x662F;&#x8BC4;&#x4F30;&#x57FA;&#x4E8E;&#x900F;&#x660E;&#x8D28;&#x9178; (HA) &#x4E0E; &alpha;,&beta;-poly(N-2-hydroxyethyl) (2 aminoethylcarbamate) &#x5316;&#x5B66;&#x4EA4;&#x8054;&#x51DD;&#x80F6;&#x7684;&#x6F5C;&#x5728;&#x4F7F;&#x7528;-D&#xFF0C;L-aspartamide (PHEA-EDA) &#x4F5C;&#x4E3A;&#x66FF;&#x4EE3;&#x7F8A;&#x819C;&#x80FD;&#x591F;&#x91CA;&#x653E;&#x89D2;&#x819C;&#x518D;&#x751F;&#x7F18;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x6C34;&#x51DD;&#x80F6;&#xFF0C;&#x5F62;&#x72B6;&#x50CF;&#x90E8;&#x7535;&#x5F71;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x4E09;&#x4E2A;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x6469;&#x5C14;&#x6BD4; (X) &#x4E4B;&#x95F4; PHEA EDA &#x548C;&#x533B;&#x7BA1;&#x5C40; (X = 0.5&#x3001; 1.0 &#x548C; 1.5&#xFF09; &#x5DF2;&#x8FDB;&#x884C;&#x8C03;&#x67E5;&#x3002;&#x7B2C;&#x4E00;&#xFF0C;&#x636E;&#x5176;&#x81A8;&#x80C0;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x3001; &#x6C34;&#x89E3;&#x62B5;&#x6297;&#x5728;&#x6A21;&#x62DF;&#x751F;&#x7406;&#x4F53;&#x6DB2;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x76F8;&#x5BB9;&#x6027;&#x4F7F;&#x7528;&#x8FDB;&#x884C;&#x8BA1;&#x7B97;&#x9009;&#x62E9;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x6A21;&#x578B;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x884C;&#x7684;&#x76AE;&#x80A4;&#x6210;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x7136;&#x540E;&#x4E0E;&#x80F6;&#x539F;&#x51DD;&#x80F6;&#x7C98;&#x9644;&#x7814;&#x7A76;&#x5DF2;&#x901A;&#x8FC7;&#x4F7F;&#x7528;&#x6C38;&#x751F;&#x5316;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x5982;&#x89D2;&#x819C;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE; (HCEC) &#x6216;&#x539F;&#x4EE3;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x5982;&#x5154;&#x89D2;&#x819C;&#x7F18;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE; (RLEC) &#x548C;/&#x6216;&#x5154;&#x89D2;&#x819C;&#x6210;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE; (&#x98DE;&#x884C;) &#x8FDB;&#x884C;&#x3002;&#x533B;&#x7BA1;&#x5C40;/PHEA-EDA &#x6C34;&#x51DD;&#x80F6;&#x5141;&#x8BB8;&#x9002;&#x5EA6;&#x4E0E;&#x7A77;&#x4EBA;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9644;&#x7740;&#x7684;&#x6240;&#x6709;&#x8C03;&#x67E5;&#x4ECE;&#x800C;&#x8868;&#x660E;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x8FD0;&#x8F7D;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x5176;&#x6F5C;&#x5728;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x5546;&#x4E1A;&#x9690;&#x5F62;&#x773C;&#x955C;&#x6709;&#x6D82;&#x5C42;&#xFF0C;&#x5728;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x7684;&#x5185;&#x8868;&#x9762;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x533B;&#x7BA1;&#x5C40;/PHEA-EDA &#x7535;&#x5F71;&#x548C;&#x5B83;&#x5DF2;&#x88AB;&#x53D1;&#x73B0;&#x5728;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x66F4;&#x591A;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7C98;&#x9644;&#x53D1;&#x751F;&#xFF0C;&#x5C24;&#x5176;&#x662F;&#x5F53; RLEC &#x662F;&#x5728;&#x8054;&#x5408;&#x57F9;&#x517B;&#x7684;&#x98DE;&#x884C;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x6B64;&#x7C98;&#x9644;&#x4EC5;&#x53EA;&#x662F;&#x6619;&#x82B1;&#x4E00;&#x73B0;&#xFF0C;&#x5176;&#x5B9E;&#x662F;&#x4E09;&#x5929;&#x540E;&#xFF0C;&#x53EF;&#x884C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x91CA;&#x653E;&#x4ECE;&#x800C;&#x8868;&#x660E;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x5E94;&#x7528;&#x8303;&#x56F4;&#x7684;&#x533B;&#x7BA1;&#x5C40;/PHEA-EDA &#x6C34;&#x51DD;&#x80F6;&#xFF0C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x6CBB;&#x7597;&#x89D2;&#x819C;&#x635F;&#x4F24;&#x89D2;&#x819C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x57F9;&#x517B;&#x57FA;&#x4E2D;&#x3002;

&#x57FA;&#x4E8E;&#x900F;&#x660E;&#x8D28;&#x9178;&#x4EA4;&#x8054; polyaspartamide &#x884D;&#x751F;&#x7269;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x8FD0;&#x8F7D;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x89D2;&#x819C;&#x7F18;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x76F8;&#x5BB9;&#x6027;&#x6C34;&#x51DD;&#x80F6;&#x3002;

The aim of this work was to evaluate the potential use of hydrogels based on hyaluronic acid (HA) chemically cross-linked with Î±,Î²-poly(N-2-hydroxyethyl) (2-aminoethylcarbamate)-D,L-aspartamide (PHEA-EDA) as substitutes for the amniotic membrane able to release limbal cells for corneal regeneration. Hydrogels, shaped as films, with three different molar ratios (X) between PHEA-EDA and HA (X = 0.5, 1.0 and 1.5) have been investigated. First, it has been evaluated their swelling ability, hydrolytic resistance in simulated physiological fluid and cell compatibility by using human dermal fibroblasts chosen as a model cell line. Then adhesion studies in comparison with collagen gel, have been performed by using immortalized cells, such as human corneal epithelial cells (HCEC) or primary cells, such as rabbit limbal epithelial cells (RLEC) and/or rabbit limbal fibroblasts (RLF). HA/PHEA-EDA hydrogels allow a moderate/poor adhesion of all investigated cells thus suggesting their potential ability to act as cell delivery systems. Finally, commercial contact lenses have been coated, in their inner surface, with each HA/PHEA-EDA film and it has been found that in these conditions, a greater cell adhesion occurs, particularly when RLEC are in co-culture with RLF. However, this adhesion is only transitory, in fact after three days, viable cells are released in the culture medium thus suggesting a potential application of HA/PHEA-EDA hydrogels, for delivering limbal cells in the treatment of corneal damage.

Biocompatible hydrogels based on hyaluronic acid cross-linked with a polyaspartamide derivative as delivery systems for epithelial limbal cells.

Le but de ce travail &eacute;tait d&#39;&eacute;valuer l&#39;utilisation potentielle des hydrogels bas&eacute;s sur l&#39;acide hyaluronique (HA) r&eacute;ticul&eacute; chimiquement avec &alpha;,&beta;-poly(N-2-hydroxyethyl) (2-amino&eacute;thylcarbamate)-D, L-aspartamide (PHEA-EDA) en remplacement de la membrane amniotique capable de lib&eacute;rer les cellules limbique pour la r&eacute;g&eacute;n&eacute;ration de corn&eacute;e. Hydrogels, en forme de films, avec trois diff&eacute;rents rapports molaires (X) entre PHEA-AED et HA (X = 0,5, 1,0 et 1,5) ont &eacute;t&eacute; &eacute;tudi&eacute;s. Tout d&#39;abord, il a &eacute;t&eacute; &eacute;valu&eacute; leur capacit&eacute; de gonflement, de la r&eacute;sistance hydrolytique simul&eacute; compatibilit&eacute; fluide et cellulaire physiologique &agrave; l&#39;aide des fibroblastes dermiques humains choisis comme une lign&eacute;e de cellules de mod&egrave;le. Puis des &eacute;tudes d&#39;adh&eacute;rence par rapport aux gel de collag&egrave;ne, sont r&eacute;alis&eacute;es avec des cellules immortalis&eacute;es, telles que les cellules &eacute;pith&eacute;liales corn&eacute;ennes humaines (HCEC) ou de cellules primaires, telles que les cellules &eacute;pith&eacute;liales limbique lapin (RLEC) et/ou des fibroblastes limbique lapin (RLF). HA/PHEA-EDA hydrogels permettent une adh&eacute;rence faible ou mod&eacute;r&eacute; de toutes les cellules d&#39;enqu&ecirc;t&eacute;s sugg&eacute;rant ainsi leur capacit&eacute; potentielle &agrave; agir en tant que vecteurs de cellule. Enfin, les lentilles de contact commerciales ont &eacute;t&eacute; enduits, dans leur surface int&eacute;rieure, avec chaque HA/PHEA-EDA film et il a &eacute;t&eacute; trouv&eacute; que dans ces conditions, une plus grande adh&eacute;sion des cellules survient, en particulier lorsque les RLEC sont en co-culture avec RLF. Toutefois, cette adh&eacute;rence est seulement transitoire, en effet apr&egrave;s trois jours, les cellules viables sont lib&eacute;r&eacute;s dans le milieu de culture, ce qui sugg&egrave;re une application potentielle des hydrogels HA/PHEA-EDA, pour livrer des cellules limbique dans le traitement des l&eacute;sions corn&eacute;ennes.

Hydrogels biocompatibles bas&eacute;s sur l&#39;acide hyaluronique r&eacute;ticul&eacute; avec un d&eacute;riv&eacute; de polyaspartamide comme vecteurs d&#39;ent&eacute;rocytes limbique.

Ziel dieser Arbeit war es, die Verwendungsm&ouml;glichkeiten von Hydrogele basierend auf Hyalurons&auml;ure (HA) chemisch vernetzt mit &alpha;,&beta;-poly(N-2-hydroxyethyl) (2-Aminoethylcarbamate) zu bewerten-D, L-Aspartamide (PHEA-EDA) als Ersatz f&uuml;r die amniotische Membran limbal Zellen zur Regeneration der Hornhaut freisetzen. Hydrogele, geformt wie Filme, mit drei unterschiedlichen molaren Verh&auml;ltnis (X) zwischen PHEA-EDA und HA (X = 0.5, 1.0 und 1.5) haben untersucht worden. Erstens, es war ihre Schwellung F&auml;higkeit, Wasserbest&auml;ndigkeit in simulierten physiologische Fluid und Zelle-Kompatibilit&auml;t mit menschliche dermale Fibroblasten als ein Modell-Zelllinie ausgewertet. Dann wurden Adh&auml;sion Studien im Vergleich zu Kollagengel, mithilfe von verewigt Zellen, wie menschliche Hornhaut Epithelzellen (HCEC) oder Prim&auml;rzellen, wie Kaninchen limbal Epithelzellen (RLEC) und/oder Kaninchen limbal Fibroblasten (RLF) durchgef&uuml;hrt. HA/PHEA-EDA Hydrogele erm&ouml;glichen eine Moderate/schlechte Haftung aller untersuchten Zellen, die so ihre potenziellen Handlungsf&auml;higkeit als Zelle-Delivery-Systeme vorgeschlagen. Schlie&szlig;lich haben kommerzielle Kontaktlinsen &uuml;berzogen wurden, in ihre innere Oberfl&auml;che, mit jedem HA/PHEA-EDA Film und es gefunden wurde, dass unter diesen Bedingungen eine gr&ouml;&szlig;ere Zelladh&auml;sion geschieht, insbesondere, wenn RLEC in Kokulturen mit RLF. Aber diese Haftung ist nur vor&uuml;bergehend, in der Tat nach drei Tagen, entwicklungsf&auml;higen Zellen werden in dem Kulturmedium, so schl&auml;gt eine m&ouml;gliche Anwendung der HA/PHEA-EDA Hydrogele, f&uuml;r die Bereitstellung von limbal Zellen bei der Behandlung von Hornhaut Schaden freigegeben.

Biokompatible Hydrogele basierend auf Hyalurons&auml;ure vernetzt mit einem Polyaspartamide-Derivat als Delivery-Systemen f&uuml;r limbal Epithelzellen.

Lo scopo di questo lavoro era quello di valutare il potenziale utilizzo di idrogel a base di acido ialuronico (HA) reticolato chimicamente con &alpha;,&beta;-poly(N-2-hydroxyethyl) (2-aminoethylcarbamate)-20D, L-aspartamide (PHEA-EDA) come sostituti per la membrana amniotica in grado di rilasciare limbare cellule per la rigenerazione corneale. A forma di idrogel, come film, con tre rapporti molari differenti (X) tra PHEA-EDA e HA (X = 0.5, 1.0 e 1.5) sono state indagate. In primo luogo, &egrave; stato valutato loro capacit&agrave; gonfiore, resistenza idrolitica in simulato compatibilit&agrave; fisiologica delle cellule e fluidi usando fibroblasti dermici umani scelti come una linea cellulare modello. Poi gli studi di adesione rispetto al gel di collagene, sono state eseguite utilizzando celle immortalate, come cellule corneale epiteliali umane (HCEC) o celle primarie, come ad esempio le coniglio limbare cellule epiteliali (RLEC) e/o coniglio limbico fibroblasti (RLF). HA/PHEA-EDA idrogel permettono una moderata o insufficiente adesione di tutte le cellule studiate, suggerendo cos&igrave; la loro potenziale capacit&agrave; di agire come sistemi di consegna delle cellule. Infine, hanno rivestite le lenti a contatto commerciale, nella loro superficie interna, con ogni HA/PHEA-EDA film e &egrave; stato trovato che in queste condizioni, una maggiore adesione delle cellule avviene specialmente quando RLEC sono in co-culture con RLF. Tuttavia questa adesione &egrave; solo transitorio, infatti dopo tre giorni, cellule vitali vengono rilasciate nel terreno di coltura, suggerendo cos&igrave; una potenziale applicazione di idrogel HA/PHEA-EDA, per la consegna di limbare cellule nel trattamento di danni alla cornea.

Idrogel biocompatibile a base di acido ialuronico reticolato con un derivato di polyaspartamide come sistemi di consegna per le cellule epiteliali limbare.

&#x3053;&#x306E;&#x4F5C;&#x696D;&#x306E;&#x76EE;&#x7684;&#x306F;&#x3001;&#x30D2;&#x30A2;&#x30EB;&#x30ED;&#x30F3;&#x9178; (HA) &#x5316;&#x5B66;&#x67B6;&#x6A4B; &alpha;,&beta;-poly(N-2-hydroxyethyl) (2-aminoethylcarbamate) &#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x304F;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30B2;&#x30EB;&#x306E;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x4F7F;&#x7528;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3059;&#x308B;&#x3060;&#x3063;&#x305F;-D&#x3001;L-aspartamide &#xFF08;PHEA-EDA&#xFF09; &#x7F8A;&#x819C;&#x89D2;&#x819C;&#x518D;&#x751F;&#x306E;&#x8F2A;&#x90E8;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x89E3;&#x653E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306E;&#x4EE3;&#x66FF;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3002;&#x30B2;&#x30EB;&#x306E;&#x5F62;&#x306B; 3 &#x3064;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30E2;&#x30EB;&#x6BD4; (X) PHEA EDA &#x3068; HA &#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x6620;&#x753B;&#x3068; (X = 0.5, 1.0, 1.5) &#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6700;&#x521D;&#x306B;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB; &#x30BB;&#x30EB;&#x884C;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x9078;&#x629E;&#x3072;&#x3068;&#x76AE;&#x819A;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x30B7;&#x30DF;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x751F;&#x7406;&#x6D41;&#x4F53;&#x3068;&#x30BB;&#x30EB;&#x4E92;&#x63DB;&#x6027;&#x5F7C;&#x3089;&#x306E;&#x816B;&#x308C;&#x306E;&#x80FD;&#x529B;&#x3001;&#x8010;&#x52A0;&#x6C34;&#x5206;&#x89E3;&#x6027;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x5F8C;&#x63A5;&#x7740;&#x7814;&#x7A76;&#x30B3;&#x30E9;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3; &#x30FB; &#x30B2;&#x30EB;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x5B9F;&#x884C;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x4E0D;&#x6B7B;&#x5316;&#x7D30;&#x80DE;, &#x3072;&#x3068;&#x89D2;&#x819C;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE; (HCEC) &#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30A6;&#x30B5;&#x30AE;&#x8F2A;&#x90E8;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE; (RLEC) &#x304A;&#x3088;&#x3073;/&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30A6;&#x30B5;&#x30AE;&#x8F2A;&#x90E8;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE; &#xFF08;RLF&#xFF09; &#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x4E00;&#x6B21;&#x96FB;&#x6C60;&#x306A;&#x3069;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30CF;/PHEA-EDA &#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30B2;&#x30EB;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x643A;&#x5E2F;&#x914D;&#x4FE1;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x884C;&#x52D5;&#x3059;&#x308B;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x8ABF;&#x67FB;&#x306E;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x9069;&#x5EA6;&#x306A;/&#x8CA7;&#x3057;&#x3044;&#x63A5;&#x7740;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;&#x5546;&#x696D;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AF;&#x30C8; &#x30EC;&#x30F3;&#x30BA;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x5185;&#x5074;&#x8868;&#x9762;&#x306B;&#x5857;&#x88C5;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3001;&#x5404; HA/PHEA-EDA &#x306E;&#x30D5;&#x30A3;&#x30EB;&#x30E0;&#x3068;&#x305D;&#x308C;&#x304C;&#x898B;&#x3064;&#x304B;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x767A;&#x751F;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6761;&#x4EF6;&#x3067;&#x3088;&#x308A;&#x5927;&#x304D;&#x3044;&#x7D30;&#x80DE;&#x63A5;&#x7740;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3001;&#x7279;&#x306B; RLEC &#x306F; RLF &#x5171;&#x57F9;&#x990A;&#x3067;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x63A5;&#x7740;&#x306E;&#x307F;&#x5B9F;&#x969B; 3 &#x65E5;&#x5F8C;&#x306B;&#x4E00;&#x904E;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x5B9F;&#x884C;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x30BB;&#x30EB;&#x306F;&#x3053;&#x3046;&#x3057;&#x3066;&#x8F2A;&#x90E8;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x89D2;&#x819C;&#x640D;&#x50B7;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3001;HA/PHEA-EDA &#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30B2;&#x30EB;&#x306E;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x9069;&#x7528;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x57F9;&#x5730;&#x89E3;&#x653E;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Polyaspartamide &#x6D3E;&#x751F;&#x3057;&#x305F;&#x8F2A;&#x90E8;&#x4E0A;&#x76AE;&#x306E;&#x914D;&#x4FE1;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x67B6;&#x6A4B;&#x30D2;&#x30A2;&#x30EB;&#x30ED;&#x30F3;&#x9178;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x304F;&#x751F;&#x4F53;&#x9069;&#x5408;&#x6027;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30B2;&#x30EB;&#x3002;

&#xC774; &#xC791;&#xD488;&#xC758; &#xBAA9;&#xC801;&#xC740; hydrogels &#xAE30;&#xBC18;&#xC73C;&#xB85C; &#xD788; &#xC54C;&#xB8E8; &#xB860; &#xC0B0; (HA) &alpha;,&beta;-poly(N-2-hydroxyethyl) (2-aminoethylcarbamate)&#xC640; &#xD654;&#xD559;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC2ED;&#xC790;&#xAC00;&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC744; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD558;&#xB294;-D, L-aspartamide (PHEA-EDA) &#xC591;&#xC218; &#xB0B4; &#xB9C9; &#xAC01; &#xB9C9; &#xC7AC;&#xC0DD;&#xC744; &#xC704;&#xD574; limbal &#xC140; &#xC218;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB300;&#xC6A9;&#xD488;&#xC73C;&#xB85C;. Hydrogels, 3 &#xAC1C;&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; &#xC5B4; &#xAE08; &#xB2C8; (X) &#xAC04;&#xC758; &#xBE44;&#xC728; PHEA EDA &#xBC0F; HA&#xC640; &#xC601;&#xD654;&#xB85C; &#xBAA8;&#xC591; (X = 0.5, 1.0, 1.5) &#xC870;&#xC0AC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC788;&#xB2E4; &#xCCAB;&#xC9F8;, &#xBAA8;&#xB378; &#xC140; &#xB77C;&#xC778;&#xC73C;&#xB85C; &#xC120;&#xD0DD; &#xB41C; &#xC778;&#xAC04; &#xD53C;&#xBD80; &#xC12C;&#xC720; &#xC544; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC2DC;&#xBBAC;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xB41C; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801; &#xBC0F; &#xC140; &#xD638;&#xD658;&#xC131;&#xC5D0; &#xBD93;&#xAE30; &#xB2A5;&#xB825;, &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xC800;&#xD56D; &#xD3C9;&#xAC00;. &#xB2E4;&#xC74C; &#xCF5C;&#xB77C;&#xAC90; &#xC824;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xC811;&#xCC29; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xAC01; &#xB9C9; &#xC0C1;&#xD53C; &#xC138;&#xD3EC; (HCEC) &#xB610;&#xB294; &#xD1A0;&#xB07C; limbal &#xC0C1;&#xD53C; &#xC138;&#xD3EC; (RLEC) &#xD1A0;&#xB07C; limbal &#xAC8C;&#xC7AC; (RLF) &#xB4F1; 1 &#xCC28; &#xC140; &#xB4F1; &#xBD88;&#xBA78; &#xD558; &#xAC8C; &#xC140;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC218;&#xD589; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. HA/PHEA-EDA hydrogels &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC7A0;&#xC7AC; &#xB2A5;&#xB825; &#xC138;&#xD3EC; &#xC804;&#xB2EC; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC73C;&#xB85C; &#xC11C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC870;&#xC0AC; &#xC140;&#xC758; &#xBCF4;&#xD1B5;/&#xAC00;&#xB09C;&#xD55C; &#xC811;&#xCC29; &#xD5C8;&#xC6A9;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC0C1;&#xC5C5; &#xCF58;&#xD0DD;&#xD2B8; &#xB80C;&#xC988; &#xCF54;&#xD305; &#xB41C; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xB0B4;&#xBD80; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0;, &#xAC01; &#xD558;/PHEA-EDA&#xC640; &#xD544;&#xB984;&#xACFC; &#xADF8;&#xAC83; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB354; &#xD070; &#xC138;&#xD3EC; &#xC811;&#xCC29; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294;&#xC9C0;, RLF&#xC640; co-culture&#xC5D0; RLEC&#xB97C; &#xC788;&#xB294; &#xACBD;&#xC6B0;&#xC5D0; &#xD2B9;&#xD788;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;,&#xC774; &#xC811;&#xCC29;&#xC740; &#xB2E8;&#xC9C0; &#xC77C;&#xC2DC;&#xC801;&#xC778;, &#xC0AC;&#xC2E4; 3 &#xC77C; &#xD6C4;, &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xC140; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; limbal &#xC140;&#xC5D0; &#xAC01; &#xB9C9; &#xC190;&#xC0C1;&#xC758; &#xCE58;&#xB8CC;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; HA/PHEA-EDA hydrogels&#xC758; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; &#xBB38;&#xD654; &#xB9E4;&#xCCB4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD574;&#xC81C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC0DD;&#xCCB4; hydrogels limbal &#xC0C1;&#xD53C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC804;&#xB2EC; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC73C;&#xB85C; polyaspartamide &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; &#xC2ED;&#xC790;&#xAC00; &#xD788; &#xC54C;&#xB8E8; &#xB860; &#xC0B0; &#xAE30;&#xBC18;.

El objetivo de este trabajo fue evaluar el uso potencial de Hidrogeles basados en &aacute;cido hialur&oacute;nico (HA) qu&iacute;micamente reticulado con &alpha;,&beta;-poly(N-2-hydroxyethyl) (2-aminoethylcarbamate)-D, L-aspartamide (DOUE-EDA) como sustitutos de la membrana amni&oacute;tica capaz de liberar las c&eacute;lulas limbares para la regeneraci&oacute;n de la c&oacute;rnea. Hidrogeles, en forma de pel&iacute;culas, con tres diferentes relaciones molares (X) entre AESP-EDA y HA (X = 0.5, 1.0 y 1.5) han sido investigados. En primer lugar, ha sido evaluada su capacidad de hinchamiento, resistencia hidrol&iacute;tica en compatibilidad fisiol&oacute;gica simulada del l&iacute;quido y c&eacute;lulas usando fibroblastos d&eacute;rmicos humanos elegidos como una l&iacute;nea celular de modelo. Entonces, se han realizado estudios de adherencia en comparaci&oacute;n con el gel de col&aacute;geno, mediante el uso de c&eacute;lulas inmortalizadas, como c&eacute;lulas epiteliales corneales humanas (HCEC) o c&eacute;lulas primarias, tales como c&eacute;lulas epiteliales limbal de conejo (RLEC) y/o los fibroblastos limbal del conejo (RLF). HA/AESP-EDA hidrogeles permiten una adherencia moderada/pobres de todas las c&eacute;lulas investigadas as&iacute;, lo que sugiere su capacidad potencial para actuar como sistemas de administraci&oacute;n de la c&eacute;lula. Finalmente, lentes de contacto comerciales han sido cubiertas, en su superficie interna, con cada HA/AESP-EDA pel&iacute;cula y se ha encontrado que en estas condiciones, una mayor adherencia de la c&eacute;lula ocurre, particularmente cuando son RLEC en co-cultivo con RLF. Sin embargo, esta adhesi&oacute;n es s&oacute;lo transitoria, despu&eacute;s de tres d&iacute;as, c&eacute;lulas viables son liberadas en el medio de cultivo as&iacute;, lo que sugiere una posible aplicaci&oacute;n de hidrogeles HA/AESP-EDA, para entregar limbares c&eacute;lulas en el tratamiento del da&ntilde;o de la c&oacute;rnea.

Hidrogel biocompatible basado en &aacute;cido hialur&oacute;nico reticulado con un derivado de la polyaspartamide como sistemas de entrega para c&eacute;lulas epiteliales limbares.

Corneal stem cell niches are located within the limbus of the eye and are believed to play an important role in corneal regeneration. These niches are often lost in corneal disease or trauma. Our work explores the design of artificial limbal stem cell niches by the fabrication of biodegradable electrospun rings containing bespoke microfeatures. In creating artificial niches, we seek to provide a physically protective environment for limbal cells to act as a cell reservoir for tissue regeneration purposes. This study describes the first step in this challenge to produce structures which structurally approximate to the limbal niches. This was achieved using a combination of electrospinning and microfabrication. Initial microfabricated structures were developed using microstereolithography via a layer-by-layer photocuring approach based on the patterning of photocurable polymers, in this case polyethylene glycol diacrylate. This was then used as a template on which to electrospin a biodegradable membrane of poly(lactic-co-glycolic acid) 50:50, which incorporates the features of the underlying microfabricated structures. The study describes preliminary evaluation of these constructs using rabbit limbal epithelial and stromal cells.

Combined microfabrication and electrospinning to produce 3-D architectures for corneal repair.

Currently, damage to the ocular surface can be repaired by transferring laboratory cultured limbal epithelial cells (LECs) to the cornea using donor human amniotic membrane as the cell carrier. We describe the development of a synthetic biodegradable membrane of Poly D,L-lactide-co-glycolide (PLGA) with a 50:50 ratio of lactide and glycolide for the delivery of both isolated LECs and of cells grown out from limbal tissue explants. Both isolated LECs and limbal explants produced confluent limbal cultures within 2 weeks of culture on the membranes without the need for fibroblast feeder layers. Outgrowth of cells from explants was promoted by the inclusion of fibrin. Membranes with cells on them broke down predictably within 4-6 weeks in vitro and the breakdown was faster for a lower molecular weight (MW) (44 kg/mol) rather than a higher MW (153 kg/mol) PLGA. Membranes could be reproducibly produced, sterilised with gamma irradiation and stored dry at -20 °C for at least 12 months, and the ability to support cell outgrowth from explants was retained. We demonstrate transfer of cells (both isolated LECs and of cells grown out from limbal explants) from the membranes to an ex vivo rabbit cornea model. Characterisations of the cells by immunohistochemistry showed both differentiated and stem cell populations. A synthetic membrane combined with limbal explants in theatre would avoid the need for tissue banked human amniotic membrane and also avoid the need for specialist laboratory facilities for LEC expansion making this more accessible to many more surgeons and patients.

Simplifying corneal surface regeneration using a biodegradable synthetic membrane and limbal tissue explants.

The aim of this study was to develop a synthetic alternative to the human corneal limbus for use initially as an ex vivo model in which to study corneal stem cell function within a niche environment and ultimately to develop an implantable limbus for future clinical use. Microstereolithography was used for the fabrication of polyethylene glycol diacrylate (PEGDA) based rings on a macroscopic (1.2 cm) scale containing unique microfeatures (pockets) which were then modified with fibronectin to promote cell adhesion. These rings were designed to mimic the limbal area of the eye containing structures of the approximate size and shape of the stem cell microenvironments found in the palisades of Vogt. The attachment of rabbit limbal fibroblasts and rabbit limbal epithelial cells to the PEGDA rings was increased by pretreating the microfabricated structures with biotinylated fibronectin. Cell outgrowth from fibronectin coated microfabricated structures was 50% greater than from rings without structures or fibronectin coating. The cell loaded rings were then placed on an ex vivo wounded cornea model and the outgrowth of cells to form a multilayered epithelium was observed. We suggest this is a new approach to investigating limbal stem cells niches and the first steps towards a new approach for corneal regeneration.

Development of a microfabricated artificial limbus with micropockets for cell delivery to the cornea.

In delivering tissues to the body, both natural and synthetic materials have been used. Currently, a natural membrane, the human amniotic membrane (AM), is used to deliver limbal epithelial cells (LEC) to the cornea. AM presents inherent problems with structural variation and requires extensive serological screening before use. Therefore alternatives are required to improve the predictability in clinical outcomes and economic costs associated with the use of this biological substrate. In this chapter, we describe the development of an alternative, structurally simple, synthetic biodegradable electrospun scaffold based on poly(lactide-co-glycolide) (PLGA: materials used in dissolvable sutures) to replace AM.

Cultivation of limbal epithelial cells on electrospun poly (lactide-co-glycolide) scaffolds for delivery to the cornea.

The aim of this study was to develop a synthetic hydrogel to act as a corneal substitute capable of selectively supporting the adhesion and proliferation of limbal epithelial cells (LECs) while inhibiting growth of limbal fibroblasts. Deficiency of LECs causes conjunctival epithelial cells to move over the cornea, producing a thick scar pannus. Unilateral defects can be treated using LEC cultured from the unaffected eye, transplanting them to the affected cornea after scar tissue is removed. The underlying wound bed is often damaged, however, hence the need to develop a corneal inlay to aid in corneal re-epithelialization. Transparent epoxy-functional polymethacrylate networks were synthesized using a combination of glycerol monomethacrylate, ethylene glycol dimethacrylate, lauryl methacrylate and glycidyl methacrylate that produced two different bulk hydrogel compositions with different equilibrium water contents (EWCs): Base 1 and Base 2, EWC=55% and 35%, respectively. Two sets of amine-functional hydrogels were produced following reaction of the epoxide groups with excesses of either ammonia, 1,2-diamino ethane, 1,3-diamino propane, 1,4-diamino butane or 1,6-diamino hexane. Neither series of hydrogels supported the proliferation of limbal fibroblasts irrespective of amine functionalization but they both supported the adhesion and proliferation of limbal epithelial cells, particularly when functionalized with 1,4-diamino butane. With Base 1 hydrogels (less so with Base 2) a vigorous epithelial outgrowth was seen from small limbal explants and a confluent epithelial layer was achieved in vitro within 6days. The data support the development of hydrogels specific for epithelial formation.

Pallavi Deshpande

Department of Materials Science and Engineering

University of Sheffield

Combination of Microstereolithography and Electrospinning to Produce Membranes Equipped with Niches for Corneal Regeneration

Pallavi Deshpande

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University of Sheffield

Combination of Microstereolithography and Electrospinning to Produce Membranes Equipped with Niches for Corneal Regeneration

Department of Materials Science and Engineering