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Scalable 96-well Plate Based iPSC Culture and Production Using a Robotic Liquid Handling System

Continued advancement in pluripotent stem cell culture is closing the gap between bench and bedside for using these cells in regenerative medicine, drug ...

InvivoSciences, Inc.

&#x9700;&#x8981;&#x5728;&#x90A3;&#x91CC;&#x5B83;&#x529F;&#x80FD;&#x4EE5;&#x603B;&#x7406; exocytic &#x673A;&#x68B0; Ca(2+) &#x89E6;&#x53D1;&#x878D;&#x5408;&#x7684;&#x5185;&#x5206;&#x6CCC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x6700;&#x4F18;&#x56CA;&#x6CE1;&#x80DE;&#x5E3D; &#xFF08;aka CADPS)&#x3002;&#x878D;&#x5408;&#x88AB;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x6865;&#x6881;&#x56CA;&#x6CE1;&#x4E0E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x7684;&#x8DE8;&#x914D;&#x5408;&#x7269;&#x7F51;&#x7F57;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x978B;&#x9762; 2&#x3001; syntaxin-1 &#x548C;&#x7BA1;&#x7406;&#x5355;&#x5143; 25&#x3002;&#x5E3D;&#x5BA3;&#x4F20;&#x7F51;&#x7F57;&#x590D;&#x6742;&#x5730;&#x5C42;&#x4E0A;&#x8102;&#x8D28;&#x4F53;&#xFF0C;&#x4F46;&#x7F51;&#x7F57;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5C5E;&#x6027;&#x7684;&#x4E0A;&#x9650;&#x662F;&#x672A;&#x77E5;&#x3002;&#x5F53;&#x524D;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x8868;&#x660E;&#x5E3D;&#x5C55;&#x54C1;&#x5230;&#x7BA1;&#x7406;&#x5355;&#x5143; 25 &#x548C; syntaxin-1 &#x9AD8;&#x4EB2;&#x548C;&#x6027;&#x7ED3;&#x5408;&#x548C;&#x6E29;&#x548C;&#x7684;&#x4EB2;&#x548C;&#x6027;&#x7ED3;&#x5408;&#x5230;&#x978B;&#x9762; 2&#x3002;&#x5177;&#x6709;&#x7EA6;&#x675F;&#x529B;&#x7684;&#x4E0A;&#x9650;&#x662F;&#x7279;&#x5B9A;&#x5B50;&#x96C6;&#x7684; exocytic &#x7F51;&#x7F57;&#x86CB;&#x767D;&#x5F02;&#x6784;&#x4F53;&#xFF0C;&#x9700;&#x8981;&#x7F51;&#x7F57;&#x86CB;&#x767D;&#x819C;&#x878D;&#x5408;&#x3002;&#x7528;&#x5E3D;&#x76D6;&#x7F51;&#x7F57;&#x86CB;&#x767D;&#x7ED3;&#x5408;&#x662F;&#x5C0F;&#x8BF4;&#x548C;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x4E0E;&#x8FD9;&#x4E09;&#x79CD;&#x86CB;&#x767D;&#x4E2D;&#x7684;&#x9677;&#x9631;&#x56FE;&#x6848;&#x7684;&#x4EA4;&#x4E92;&#x3002;C &#x7EC8;&#x7AEF;&#x7AD9;&#x70B9;&#x627F;&#x53F0; syntaxin-1 &#x4E0A;&#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x4E0D;&#x91CD;&#x53E0;&#x7684; Munc18-1 &#x7ED1;&#x5B9A;&#x7AD9;&#x70B9;&#x548C;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x86CB;&#x767D;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5BF9;&#x819C;&#x96C6;&#x6210; syntaxin-1 co-reside&#x3002;&#x4E00;&#x5982;&#x9884;&#x671F;&#x4E0A; syntaxin 1 C &#x7EC8;&#x7AEF;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7F51;&#x7AD9;&#xFF0C;&#x5E3D;&#x523A;&#x6FC0; C &#x7EC8;&#x7AEF; syntaxin-1 &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x4E0E; N-&#x7AEF;&#x622A;&#x65AD; syntaxin-1 &#x4F46;&#x5C55;&#x54C1;&#x53D7;&#x635F;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7F51;&#x7F57;&#x4F9D;&#x8D56;&#x8102;&#x8D28;&#x4F53;&#x878D;&#x5408;&#x3002;&#x6574;&#x4F53;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x7F51;&#x7F57;&#x590D;&#x6742;&#x5730;&#x5C42;&#x63D0;&#x5021;&#x7684;&#x4E0A;&#x9650;&#x53EF;&#x80FD;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x5E3D;&#x4E0E;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x56CA;&#x6CE1;&#x80DE;&#x7684;&#x4E09;&#x4E2A;&#x9677;&#x9631;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x76F4;&#x63A5;&#x4EA4;&#x4E92;&#x3002;

&#x5E3D;&#x7684;&#x65B0;&#x578B;&#x4E92;&#x52A8; (Ca2 +-&#x4F9D;&#x8D56;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x5206;&#x6CCC;&#xFF09; &#x4E0E;&#x56CA;&#x6CE1;&#x878D;&#x5408;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x4E09;&#x4E2A;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7F51;&#x7F57;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3002;

CAPS (aka CADPS) is required for optimal vesicle exocytosis in neurons and endocrine cells where it functions to prime the exocytic machinery for Ca(2+)-triggered fusion. Fusion is mediated by trans complexes of the SNARE proteins VAMP-2, syntaxin-1, and SNAP-25 that bridge vesicle and plasma membrane. CAPS promotes SNARE complex formation on liposomes, but the SNARE binding properties of CAPS are unknown. The current work revealed that CAPS exhibits high affinity binding to syntaxin-1 and SNAP-25 and moderate affinity binding to VAMP-2. CAPS binding is specific for a subset of exocytic SNARE protein isoforms and requires membrane integration of the SNARE proteins. SNARE protein binding by CAPS is novel and mediated by interactions with the SNARE motifs in the three proteins. The C-terminal site for CAPS binding on syntaxin-1 does not overlap the Munc18-1 binding site and both proteins can co-reside on membrane-integrated syntaxin-1. As expected for a C-terminal binding site on syntaxin-1, CAPS stimulates SNARE-dependent liposome fusion with N-terminal truncated syntaxin-1 but exhibits impaired activity with C-terminal syntaxin-1 mutants. Overall the results suggest that SNARE complex formation promoted by CAPS may be mediated by direct interactions of CAPS with each of the three SNARE proteins required for vesicle exocytosis.

Novel interactions of CAPS (Ca2+-dependent activator protein for secretion) with the three neuronal SNARE proteins required for vesicle fusion.

CAPS (aka CADPS) est n&eacute;cessaire pour l&#39;exocytose des v&eacute;sicules optimale dans les neurones et les cellules endocrines o&ugrave; il fonctionne pour amorcer le m&eacute;canisme de s&eacute;cr&eacute;tion de fusion Ca(2+)-d&eacute;clench&eacute;e. Fusion est m&eacute;di&eacute;e par des complexes trans de la VAMP-2 les prot&eacute;ines SNARE, syntaxine-1 et SNAP-25 qui comblent la v&eacute;sicule et la membrane plasmique. CASQUETTES favorise la formation d&#39;un complexe SNARE sur des liposomes, mais les propri&eacute;t&eacute;s de liaison de SNARE de casquettes sont inconnues. Les travaux en cours a r&eacute;v&eacute;l&eacute; que casquettes pr&eacute;sente une haute affinit&eacute; pour la syntaxine-1 et SNAP-25 et une affinit&eacute; mod&eacute;r&eacute;e pour VAMP-2. CASQUETTES contraignant sont sp&eacute;cifiques pour un sous-ensemble de s&eacute;cr&eacute;tion isoformes de prot&eacute;ines SNARE et n&eacute;cessite l&#39;int&eacute;gration de la membrane des prot&eacute;ines SNARE. La liaison aux prot&eacute;ines SNARE par CAPS est in&eacute;dite et m&eacute;di&eacute;e par les interactions avec les motifs SNARE dans trois prot&eacute;ines. Le site de C-terminal pour bouchons lie syntaxine-1 ne chevauche pas le site de liaison Munc18-1 et les deux prot&eacute;ines peuvent cohabiter sur la membrane int&eacute;gr&eacute;e syntaxine-1. Comme pr&eacute;vu pour un site de liaison C-terminal sur la syntaxine-1, casquettes stimule la fusion de liposome SNARE-d&eacute;pendante avec N-terminal tronqu&eacute; syntaxine-1 mais l&#39;activit&eacute; expositions avec facult&eacute;s affaiblies avec des mutants syntaxine-1 C-terminal. Dans l&#39;ensemble, les r&eacute;sultats sugg&egrave;rent que formation du complexe SNARE promue par CAPS peut &ecirc;tre m&eacute;di&eacute;e par des contacts directs de casquettes avec chacune des trois prot&eacute;ines SNARE requis pour l&#39;exocytose des v&eacute;sicules.

Nouvelles interactions entre les CAPS (Ca2 +-prot&eacute;ine d&eacute;pendant de l&#39;activateur pour la s&eacute;cr&eacute;tion) avec trois prot&eacute;ines SNARE neuronales n&eacute;cessaires pour la fusion des v&eacute;sicules.

CAPS (aka CADPS) ist erforderlich f&uuml;r optimale Vesikel-Exozytose in Neuronen und endokrinen Zellen, wo er zu die Exocytic-Maschinen f&uuml;r Ca(2+) ausgel&ouml;ste Fusion prime funktioniert. Fusion ist durch Trans-komplexe der SNARE-Proteine VAMP-2, Syntaxin-1 und SNAP-25 vermittelt, die Vesikel und Plasmamembran zu &uuml;berbr&uuml;cken. CAPS f&ouml;rdert SNARE Komplexbildung auf Liposomen, aber die SNARE-Bindungseigenschaften der CAPS sind unbekannt. Die aktuelle Arbeit ergab, dass die CAPS weist hohe Affinit&auml;t zu Syntaxin-1 und SNAP-25 und moderate Affinit&auml;t Bindung zu VAMP-2. CAPS, die Bindung ist spezifisch f&uuml;r eine Teilmenge der Exocytic SNARE-Proteine-Isoformen und Membran-Integration der SNARE-Proteine erfordert. Schlinge Proteinbindung von CAPS ist Roman und von Interaktionen mit den SNARE-Motiven in die drei Proteine vermittelt. Der C-terminalen-Website f&uuml;r CAPS Bindung auf Syntaxin-1 &uuml;berschneidet sich nicht die Munc18-1-Bindungsstelle und beide Proteine k&ouml;nnen reside auf Membran-integrierte Syntaxin-1. Bei einer C-terminalen-Bindungsstelle auf Syntaxin-1 erwartungsgem&auml;&szlig; CAPS stimuliert SNARE-abh&auml;ngige Liposomen Fusion mit N-terminalen abgeschnitten Syntaxin-1 aber Exponate beeintr&auml;chtigt T&auml;tigkeit mit C-terminalen Syntaxin-1 Mutanten. Die Ergebnissen zufolge insgesamt SNARE-Komplexbildung von CAPS gef&ouml;rdert durch direkte Interaktionen von CAPS mit jedem der drei SNARE-Proteine, die f&uuml;r die Vesikel-Exozytose vermittelt werden kann.

Neuartige Interaktionen von CAPS (Ca2 +-abh&auml;ngige Activator Protein f&uuml;r Sekretion) mit den drei neuronalen SNARE-Proteine ben&ouml;tigt, f&uuml;r die Fusion der Vesikel.

CAPS (aka CADPS) &egrave; richiesto per esocitosi della vescicola ottimale in neuroni e cellule endocrine dove esso funziona per innescare la macchina exocytic per Ca(2+)-innescata la fusione. Fusion &egrave; mediata da complessi trans il SNARE proteine VAMP-2 1 Sintaxina e SNAP-25 che ponte della vescicola e la membrana plasmatica. TAPPI promuove la formazione dei complessi SNARE su liposomi, ma le propriet&agrave; di associazione rullante dei tappi sono sconosciute. Il lavoro attuale ha rivelato che tappi esibisce legame ad alta affinit&agrave; per 1 Sintaxina e SNAP-25 e associazione moderata affinit&agrave; a VAMP-2. TAPPI associazione sono specifici per un sottoinsieme delle isoforme della proteina di exocytic SNARE e richiede l&#39;integrazione di membrana delle proteine SNARE. Associazione proteina SNARE da CAPS &egrave; romanzo e mediata da interazioni con i motivi SNARE delle tre proteine. Il sito C-terminale per tappi associazione Sintaxina-1 non si sovrappongono il sito di legame Munc18-1 ed entrambe le proteine possono co-reside su membrana integrata Sintaxina-1. Come previsto per un sito di legame C-terminale su Sintaxina-1, tappi stimola la fusione di liposomi SNARE-dipendente con N-terminale troncato Sintaxina-1 ma esposizioni deteriorate attivit&agrave; con mutanti Sintaxina-1 C-terminale. Nel complesso i risultati suggeriscono che formazione dei complessi SNARE promosso da tappi potrebbe essere mediata da interazioni dirette dei tappi con ognuna delle tre proteine SNARE necessarie per esocitosi della vescicola.

Romanzo interazioni dei tappi (Ca2 +-proteina attivatore dipendente per secrezione) con le tre proteine SNARE neuronale necessarie per la fusione della vescicola.

&#x30AD;&#x30E3;&#x30C3;&#x30D7; (&#x5225;&#x540D; CADPS) &#x6700;&#x9069;&#x306A;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306E;&#x958B;&#x53E3;&#x653E;&#x51FA;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x3068;&#x5185;&#x5206;&#x6CCC;&#x7D30;&#x80DE;&#x878D;&#x5408; Ca(2+) &#x30C8;&#x30EA;&#x30AC;&#x30FC;&#x306E; exocytic &#x6A5F;&#x68B0;&#x3092;&#x9996;&#x76F8;&#x306B;&#x6A5F;&#x80FD;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x878D;&#x5408;&#x6A4B;&#x5C0F;&#x80DE;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x3001;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066; SNARE &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x9B54;&#x6027;&#x306E;&#x5973; 2&#x3001;&#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3; 1 &#x30B9;&#x30CA;&#x30C3;&#x30D7; 25 &#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x932F;&#x4F53;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30AD;&#x30E3;&#x30C3;&#x30D7;&#x306E;&#x30EA;&#x30DD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E; SNARE &#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x30AD;&#x30E3;&#x30C3;&#x30D7;&#x306E;&#x30B9;&#x30CD;&#x30A2;&#x7D50;&#x5408;&#x7279;&#x6027;&#x304C;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x4F5C;&#x696D;&#x30AD;&#x30E3;&#x30C3;&#x30D7;&#x5C55;&#x793A;&#x9AD8;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x7D50;&#x5408;&#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3; 1 &#x3068;&#x30B9;&#x30CA;&#x30C3;&#x30D7; 25 &#x3068;&#x9B54;&#x6027;&#x306E;&#x5973; 2 &#x3078;&#x306E;&#x9069;&#x5EA6;&#x306A;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x7D50;&#x5408;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9; &#x30AD;&#x30E3;&#x30C3;&#x30D7; exocytic SNARE &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30A2;&#x30A4;&#x30BD; &#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x56FA;&#x6709;&#x3067;&#x3001;SNARE &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x819C;&#x306E;&#x7D71;&#x5408;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;SNARE &#x86CB;&#x767D;&#x7D50;&#x5408;&#x30AD;&#x30E3;&#x30C3;&#x30D7;&#x306F;&#x5C0F;&#x8AAC;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x30B9;&#x30CD;&#x30A2; &#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x306E; 3 &#x3064;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3068;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;C &#x672B;&#x7AEF;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x7528;&#x30AD;&#x30E3;&#x30C3;&#x30D7; &#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3; 1 &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9; Munc18 1 &#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x3092;&#x91CD;&#x8907;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x3057;&#x3001;&#x4E21;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306F;&#x819C;&#x7D71;&#x5408;&#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3; 1 &#x306B;&#x5171;&#x5B58;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3; 1 &#x306E; C &#x672B;&#x7AEF;&#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306F;&#x6B63;&#x5E38;&#x306B;&#x306F;&#x3001;C &#x672B;&#x7AEF;&#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3; 1 &#x5909;&#x7570;&#x4F53; N &#x672B;&#x7AEF;&#x5207;&#x308A;&#x6368;&#x3066;&#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3; 1 &#x969C;&#x5BB3;&#x8005;&#x5C55;&#x793A;&#x6D3B;&#x52D5;&#x304C;&#x30B9;&#x30CD;&#x30A2;&#x4F9D;&#x5B58;&#x30EA;&#x30DD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x878D;&#x5408;&#x306B;&#x30AD;&#x30E3;&#x30C3;&#x30D7;&#x3092;&#x523A;&#x6FC0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5168;&#x4F53;&#x7684;&#x306A;&#x30AD;&#x30E3;&#x30C3;&#x30D7;&#x3067;&#x6607;&#x683C; SNARE &#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306E;&#x958B;&#x53E3;&#x653E;&#x51FA;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A; 3 &#x3064;&#x306E; SNARE &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30AD;&#x30E3;&#x30C3;&#x30D7;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x7684;&#x306A;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x304C;&#x4ECB;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x30AD;&#x30E3;&#x30C3;&#x30D7;&#x306E;&#x5C0F;&#x8AAC;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528; (ca 2 +-&#x4F9D;&#x5B58;&#x7684;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5206;&#x6CCC;) &#x5C0F;&#x80DE;&#x306E;&#x878D;&#x5408;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A; 3 &#x3064;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x306E; SNARE &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3092;&#x3002;

&#xBAA8;&#xC790; (&#xC77C;&#xBA85; CADPS)&#xB294; &#xCD5C;&#xC801;&#xC758; &#xC18C;&#xD3EC; exocytosis &#xC2E0;&#xACBD; &#xBC0F; &#xB0B4; &#xBD84; &#xBE44; &#xC138;&#xD3EC; &#xC5B4;&#xB514; Ca(2+) &#xD2B8;&#xB9AC;&#xAC70; &#xD4E8;&#xC804;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; exocytic &#xAE30;&#xACC4;&#xB97C; &#xC791;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD4E8;&#xC804; &#xC62C; &#xBB34; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC40;&#xD30C;&#xC774;&#xC5B4; 2, syntaxin-1 &#xBC0F; &#xC2A4;&#xB0C5;-25 &#xAE30; &#xBC0F; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xB2E4;&#xB9AC; &#xD2B8;&#xB79C;&#xC2A4; &#xB2E8;&#xC9C0; &#xC911;&#xC7AC;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCEA1; &#xB9AC;&#xC5D0; &#xC62C; &#xBB34; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xD615;&#xC131;&#xC744; &#xCD09;&#xC9C4; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB69C;&#xAED1;&#xC758; &#xC62C; &#xBB34; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC18D;&#xC131;&#xC744; &#xC54C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD604;&#xC7AC; &#xC791;&#xC5C5; &#xBAA8;&#xC790; syntaxin-1&#xACFC; &#xC2A4;&#xB0C5;-25 &#xB192;&#xC740; &#xCE5C; &#xD654;&#xB825; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBC0F; &#xC628;&#xAC74;&#xD55C; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC744; &#xBC40;&#xD30C;&#xC774;&#xC5B4; 2 &#xC804;&#xC2DC; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBAA8;&#xC790; exocytic SNARE &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; isoforms&#xC758; &#xD558;&#xC704; &#xC9D1;&#xD569;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD2B9;&#xC815; &#xACE0; SNARE &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xB9C9; &#xD1B5;&#xD569;&#xC744; &#xC694;&#xAD6C; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xBAA8;&#xC790; &#xC5EC; SNARE &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC18C;&#xC124; &#xC774;&#xBA70; 3 &#xAC1C;&#xC758; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xC62C; &#xBB34; &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C;&#xC640;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC911;&#xC7AC;. C &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xBAA8;&#xC790; syntaxin-1&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; Munc18 1 &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xC911;&#xBCF5; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB294; &#xBC0F; &#xB450; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB9C9; &#xD1B5;&#xD569; syntaxin-1&#xC5D0; co-reside &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. C &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; syntaxin-1&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC608;&#xC0C1; &#xB300;&#xB85C; &#xBAA8;&#xC790; C &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; syntaxin 1 &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC640; N &#xB2E8;&#xC790;&#xB97C; &#xC790;&#xB97C; syntaxin-1 &#xC7A5;&#xC560;&#xC778; &#xC804;&#xC2DC; &#xD65C;&#xB3D9; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC62C; &#xBB34;&#xC5D0; &#xC885;&#xC18D;&#xC801;&#xC778; liposome &#xD4E8;&#xC804;&#xC744; &#xC790;&#xADF9;. &#xC804;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xACB0;&#xACFC; &#xC62C; &#xBB34; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xD615;&#xC131; &#xBAA8;&#xC790;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCD94;&#xC9C4; &#xAC01; &#xAE30; exocytosis&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xC138; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC62C; &#xBB34; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xCEA1;&#xC758; &#xC9C1;&#xC811;&#xC801;&#xC778; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC911;&#xC7AC; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xCEA1;&#xC758; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; (Ca2 +-&#xC885;&#xC18D; &#xD65C;&#xC131; &#xC81C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBD84; &#xBE44;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C;) &#xAE30; &#xC735;&#xD569;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xC138; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC2E0;&#xACBD; &#xBB34; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;.

CAPS (aka CADPS) se requiere para la exocitosis de la ves&iacute;cula &oacute;ptima en las neuronas y las c&eacute;lulas endocrinas donde funciona para cebar la maquinaria exoc&iacute;ticas fusi&oacute;n Ca(2+)-activa. Fusi&oacute;n es mediada por complejos trans de las prote&iacute;nas VAMP-2 SNARE, sintaxina-1 y SNAP-25 que quebranten la ves&iacute;cula y la membrana plasm&aacute;tica. TAPAS promueve la formaci&oacute;n de complejos de trampa en liposomas, pero desconocen las propiedades de enlace de la trampa de casquillos. El presente trabajo revel&oacute; que los casquillos exhibe alta afinidad de uni&oacute;n a la sintaxina-1 y SNAP-25 y moderada afinidad de uni&oacute;n a VAMP-2. TAPAS de encuadernaci&oacute;n son espec&iacute;ficos para un subconjunto de las isoformas de la prote&iacute;na exoc&iacute;ticas trampa y requiere la integraci&oacute;n de la membrana de las prote&iacute;nas SNARE. Uni&oacute;n a prote&iacute;nas SNARE con tapas es novela y mediada por las interacciones con los motivos de la trampa en las tres prote&iacute;nas. El sitio de la terminal C para tapas vinculantes para sintaxina-1 no superponen el sitio de uni&oacute;n de Munc18-1 y ambas prote&iacute;nas pueden residir conjuntamente en membrana integrado sintaxina-1. Seg&uacute;n lo esperado para un sitio de uni&oacute;n del c-terminal en sintaxina-1, tapas estimula la fusi&oacute;n de liposomas de trampa-dependiente con N-terminal truncado sintaxina-1 pero exposiciones deteriorados actividad con mutantes de sintaxina-1 C-terminal. En general, los resultados sugieren que formaci&oacute;n de complejos SNARE promovida por los casquillos puede estar mediada por interacciones directas de tapas con cada una de las tres prote&iacute;nas SNARE necesarias para la exocitosis de la ves&iacute;cula.

Novela interacciones de casquillos (Ca2 +-prote&iacute;na activador dependiente de secreci&oacute;n) con las tres prote&iacute;nas SNARE neuronales que necesaria para la fusi&oacute;n de la ves&iacute;cula.

Neil J. Daily

InvivoSciences, Inc.

Scalable 96-well Plate Based iPSC Culture and Production Using a Robotic Liquid Handling System