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<em>In vivo</em> Imaging of Transgenic <em>Leishmania</em> Parasites in a Live Host

Distinct species of Leishmania, a protozoan parasite of the family Trypanosomatidae, typically cause different human disease manifestations. The most ...

University of Iowa

&#x8131;&#x6C22;&#x8868;&#x96C4;&#x916E; (DHEA) &#x548C; DHEA &#x786B;&#x9178; (DHEAS) &#x5F71;&#x54CD;&#x8840;&#x7CD6;&#x523A;&#x6FC0;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x5206;&#x6CCC;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x7684;&#x884C;&#x52A8;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x673A;&#x5236;&#x4E0D;&#x597D;&#x7684;&#x7279;&#x70B9;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x7684;&#x5047;&#x8BBE;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x751F;&#x7406;&#x6D53;&#x5EA6;&#x7684; DHEA &#x7684;&#x884C;&#x52A8;&#xFF0C;&#x5728; beta &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x4E0A;&#x5F00;&#x59CB;&#x6539;&#x53D8;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x5206;&#x6CCC;&#x3002;DHEA &#x5355;&#x5E76;&#x4E0D;&#x5F71;&#x54CD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x9499;&#x79BB;&#x5B50;&#x6D53;&#x5EA6; (&#x9F20; &beta; &#x7EC6;&#x80DE;&#x7CFB; (INS-1) [Ca(2+)](i))&#x3002;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x5B83;&#x4E0E;&#x96F6; 25%&#x6291;&#x5236;&#x9020;&#x6210;&#x7ACB;&#x5373;&#x548C;&#x5242;&#x91CF;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x6291;&#x5236;&#x80C6;&#x78B1;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x7684;&#x5546;&#x5E97;&#xFF0C;&#x7ECF;&#x91CA;&#x653E;&#x3002;&#x4E00;&#x7EB3;&#x7C73; DHEA&#x3002;DHEA &#x4E5F;&#x6291;&#x5236;&#x7ECF;&#x52A8;&#x5458;&#x7684;&#x86D9; (29%&#x51CF;&#x5C11;)&#xFF0C;&#x5F71;&#x54CD;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x4F1A;&#x59A8;&#x788D;&#x80DE;&#x5916;&#x7ECF;&#x8BF1;&#x53D1;&#x683C;&#x5217;&#x672C;&#x8132; &#xFF08;100 microM&#xFF09; &#x6216;&#x8461;&#x8404;&#x7CD6; &#xFF08;15 &#x6BEB;&#x7C73;&#xFF09; &#x7684;&#x5927;&#x91CF;&#x6D8C;&#x5165;&#x3002;&#x7C7B;&#x56FA;&#x9187; (&#x96C4;&#x70EF;&#x4E8C;&#x916E;&#x3001; 17-&alpha;-hydroxypregnenolone &#x548C; DHEAS) &#x6709;&#x6CA1;&#x6709;&#x5BF9;&#x80C6;&#x78B1;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7ECF;&#x91CA;&#x653E;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;DHEA &#x7684;&#x884C;&#x52A8;&#x53D6;&#x51B3;&#x4E8E;&#x7531;&#x4E8E;&#x819C; impermeant DHEA-&#x725B;&#x8840;&#x6E05;&#x767D;&#x86CB;&#x767D;&#x590D;&#x5408;&#x7269;&#x8FD8;&#x5BF9;&#x6291;&#x5236;&#x80C6;&#x78B1;&#x4F5C;&#x7528;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#xFF0C;&#x5F00;&#x59CB;&#x4FE1;&#x53F7; [Ca(2+)](i) (39%&#x51CF;&#x5C11;)&#x3002;&#x7531;&#x4E8E;&#x767E;&#x65E5;&#x54B3;&#x6BD2;&#x7D20; &#xFF08;PTX&#xFF09; &#x800C;&#x53D7;&#x963B; DHEA &#x7684;&#x80C6;&#x78B1;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7ECF;&#x91CA;&#x653E;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;DHEA &#x4E5F;&#x6291;&#x5236;&#x80C6;&#x78B1;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684;&#x78F7;&#x8102;&#x9170;&#x808C;&#x9187;&#x4EE3;&#xFF0C;&#x5177;&#x6709;&#x6781;&#x5927;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x5728; 0.1 nM DHEA&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;DHEA &#x6291;&#x5236;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x5206;&#x6CCC;&#x8BF1;&#x5BFC; INS 1 &#x7EC6;&#x80DE;&#x80C6;&#x78B1; 25%&#xFF0C;&#x5E76;&#x5728;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7684;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7684; 53%&#x3002;&#x4E24;&#x8005;&#x5408;&#x8BA1;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x662F;&#x663E;&#x793A;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x751F;&#x7406;&#x6D53;&#x5EA6;&#x7684; DHEA &#x51CF;&#x5C0F; INS 1 &#x7EC6;&#x80DE;&#x5FEB;&#x901F;&#x3001; &#x975E;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x673A;&#x5236;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7ECF;&#x91CA;&#x653E;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B21;&#x62A5;&#x544A;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x63D0;&#x4F9B;&#x8BC1;&#x636E;&#x7B26;&#x5408;&#x7279;&#x5B9A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C; DHEA &#x7684;&#x53D7;&#x4F53;&#xFF0C;&#x6B64;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x901A;&#x8DEF;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x767E;&#x65E5;&#x54B3;&#x6BD2;&#x7D20;&#x654F;&#x611F;&#x7684;&#x5B58;&#x5728; G &#x86CB;&#x767D;&#x3002;

&#x8131;&#x6C22;&#x8868;&#x96C4;&#x916E;&#x7684;&#x4E00;&#x79CD;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x6291;&#x5236; &beta; &#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x9499;&#x79BB;&#x5B50;&#x91CA;&#x653E;&#x3002;

Both dehydroepiandrosterone (DHEA) and DHEA sulfate (DHEAS) affect glucose stimulated insulin secretion, though their cellular mechanisms of action are not well characterized. We tested the hypothesis that human physiological concentrations of DHEA alter insulin secretion by an action initiated at the plasma membrane of beta-cells. DHEA alone had no effect on intracellular calcium concentration ([Ca(2+)](i)) in a rat beta-cell line (INS-1). However, it caused an immediate and dose-dependent inhibition of carbachol-induced Ca(2+) release from intracellular stores, with a 25% inhibition at zero. One nanometer DHEA. DHEA also inhibited the Ca(2+) mobilizing effect of bombesin (29% decrease), but did not inhibit the influx of extracellular Ca(2+) evoked by glyburide (100 microM) or glucose (15 mM). The steroids (androstenedione, 17-alpha-hydroxypregnenolone, and DHEAS) had no inhibitory effect on carbachol-induced intracellular Ca(2+) release. The action of DHEA depended on a signal initiated at the plasma membrane, since membrane impermeant DHEA-BSA complexes also inhibited the carbachol effect on [Ca(2+)](i) (39% decrease). The inhibition of carbachol-induced Ca(2+) release by DHEA was blocked by pertussis toxin (PTX). DHEA also inhibited the carbachol induction of phosphoinositide generation, with a maximal inhibition at 0.1 nM DHEA. Furthermore, DHEA inhibited insulin secretion induced by carbachol in INS-1 cells by 25%, and in human pancreatic islets by 53%. Taken together, this is the first report showing that human physiological concentrations of DHEA decrease agonist-induced Ca(2+) release by a rapid, non-genomic mechanism in INS-1 cells. Furthermore, these data provide evidence consistent with the existence of a specific plasma membrane DHEA receptor, mediating this signal transduction pathway by pertussis toxin-sensitive G-proteins.

Dehydroepiandrosterone inhibits intracellular calcium release in beta-cells by a plasma membrane-dependent mechanism.

Tant d&eacute;hydro&eacute;piandrost&eacute;rone (DHEA) et du DHEA sulfate (DHEAS) affectent glucose stimulent la s&eacute;cr&eacute;tion d&#39;insuline, bien que leurs m&eacute;canismes cellulaires d&#39;action ne sont pas bien caract&eacute;ris&eacute;s. Nous avons test&eacute; l&#39;hypoth&egrave;se que les concentrations physiologiques humaines de DHEA modifient la s&eacute;cr&eacute;tion d&#39;insuline par une action intent&eacute;e &agrave; la membrane plasmique des cellules b&ecirc;ta. DHEA seule n&#39;avait aucun effet sur la concentration de calcium intracellulaire ([Ca(2+)](i)) dans une lign&eacute;e de cellules b&ecirc;ta de rat (INS-1). Cependant, il cause une inhibition imm&eacute;diate et dose-d&eacute;pendante de la lib&eacute;ration de Ca(2+) induite par le carbachol des r&eacute;serves intracellulaires, avec une inhibition de 25 % &agrave; z&eacute;ro. Un nanom&egrave;tre DHEA. DHEA aussi inhib&eacute; le Ca(2+) mobilisant l&#39;effet de la bomb&eacute;sine (diminution de 29 %), mais n&#39;a pas inhib&eacute; l&#39;afflux de Ca(2+) extracellulaire &eacute;voqu&eacute;e par glyburide (100 microM) ou du glucose (15 mM). Les st&eacute;ro&iuml;des (androst&egrave;nedione, 17-alpha-hydroxypregnenolone et DHEAS) n&#39;avaient aucun effet inhibiteur sur la lib&eacute;ration de Ca(2+) intracellulaire induite par le carbachol. L&#39;action de la DHEA d&eacute;pendait d&#39;un signal lanc&eacute; &agrave; la membrane plasmique, &eacute;tant donn&eacute; que les complexes de DHEA-BSA imperm&eacute;ants membranaires inhibent aussi l&#39;effet de carbachol sur [Ca(2+)](i) (diminution de 39 %). L&#39;inhibition de la lib&eacute;ration de Ca(2+) induite par le carbachol de DHEA a &eacute;t&eacute; bloqu&eacute;e par la toxine pertussique (PTX). DHEA inhibe &eacute;galement l&#39;induction de carbachol de phosphoinositide g&eacute;n&eacute;ration, avec une inhibition maximale &agrave; 0,1 nM DHEA. En outre, DHEA inhibe la s&eacute;cr&eacute;tion d&#39;insuline induite par le carbachol dans les cellules de l&#39;INS-1 de 25 % et dans les &icirc;lots pancr&eacute;atiques humaines de 53 %. Pris ensemble, il s&#39;agit du premier rapport montrant que des concentrations physiologiques humaines de DHEA diminuent induite par l&#39;agoniste Ca(2+) communiqu&eacute; par un m&eacute;canisme rapid, non g&eacute;nomique dans les cellules de l&#39;INS-1. En outre, ces donn&eacute;es fournissent des preuves compatibles avec l&#39;existence d&#39;un r&eacute;cepteur de la membrane plasmique sp&eacute;cifique DHEA, m&eacute;diation de cette voie de transduction de signal par la coqueluche sensibles &agrave; la toxine G-prot&eacute;ines.

D&eacute;hydro&eacute;piandrost&eacute;rone inhibe la lib&eacute;ration de calcium intracellulaire dans les cellules b&ecirc;ta par un m&eacute;canisme d&eacute;pendant de la membrane plasmique.

Dehydroepiandrosteron (DHEA) und DHEA-Sulfat (DHEAS) Affekt Glukose stimuliert Insulin-Sekretion, obwohl ihre zellul&auml;ren Wirkungsmechanismen nicht gut charakterisiert sind. Wir testeten die Hypothese, dass die menschliche physiologische Konzentrationen von DHEA Insulinsekretion durch eine Aktion auf der Plasmamembran von Beta-Zellen initiiert &auml;ndern. DHEA allein hatte keinen Einfluss auf die intrazellul&auml;ren Calcium-Konzentration ([Ca(2+)](i)) in einer Ratte-Beta-Zell-Linie (INS-1). Jedoch verursacht es eine sofortige und dosisabh&auml;ngige Hemmung der Carbachol-induzierte Ca(2+)-Freisetzung aus intrazellul&auml;ren speichern, mit einem 25 % Hemmung bei Null. Ein Nanometer DHEA. DHEA auch hemmte die Ca(2+) Wirkung von Bombesin (29 % Abnahme) zu mobilisieren, aber nicht hemmen den Zustrom von extrazellul&auml;ren Ca(2+) hervorgerufen durch Glyburide (100 MicroM) oder Glucose (15 mM). Die Steroide (Androstendion, 17-Alpha-Hydroxypregnenolone und DHEAS) hatte keine hemmende Wirkung auf Carbachol-induzierte intrazellul&auml;re Ca(2+) Version. Die Wirkung von DHEA hing ein Signal an die Plasmamembran initiiert, da Membran impermeant DHEA-BSA-komplexe den Carbachol-Effekt auch auf gehemmt [Ca(2+)](i) (39 % Abnahme). Die Hemmung der Carbachol-induzierte Ca(2+)-Release von DHEA wurde von Pertussis-Toxin (PTX) blockiert. DHEA auch hemmte die Carbachol Induktion Phosphoinositid-Generation, mit einer maximalen Hemmung bei 0,1 nM DHEA. Au&szlig;erdem hemmte DHEA Insulinsekretion induziert durch Carbachol in INS-1 Zellen um 25 % und in menschlichen Pankreas Inseln um 53 %. Zusammengenommen ist dies der erste Bericht zeigt, dass die menschliche physiologische Konzentrationen von DHEA Agonist-induzierte Ca(2+) Freigabe durch eine schnelle, nicht-genomische Mechanismus in INS-1 Zellen verringern. Dar&uuml;ber hinaus diese Daten belegen konsistent mit der Existenz einer bestimmten Plasmamembran DHEA Rezeptor, Vermittlung von diesem Signaltransduktion Weg von Pertussis-Toxin-Sensitive G-Proteinen.

Dehydroepiandrosteron hemmt intrazellul&auml;re Kalzium Freigabe in Beta-Zellen durch einen Plasmamembran-abh&auml;ngige Mechanismus.

Deidroepiandrosterone (DHEA) e del DHEA solfato (DHEAS) influenzano glucosio stimolata la secrezione di insulina, anche se i meccanismi cellulari dell&#39;azione non sono ben caratterizzati. Abbiamo testato l&#39;ipotesi che umani fisiologici concentrazioni di DHEA alterano la secrezione di insulina da un&#39;azione iniziata alla membrana del plasma delle cellule beta. DHEA da sola ha avuto alcun effetto sulla concentrazione di calcio intracellulare ([Ca(2+)](i)) in una linea di cellule beta di ratto (INS-1). Tuttavia, essa ha causato un&#39;inibizione immediata e dose-dipendente di Carbacolo-induced Ca(2+) rilascio dai depositi intracellulari, con una 25% di inibizione a zero. Un nanometro DHEA. DHEA anche inibito il Ca(2+) mobilitando effetto della Bombesina (diminuzione del 29%), ma non ha fatto inibisce l&#39;afflusso di Ca(2+) extracellulare evocato da glyburide (100 microM) o glucosio (15 mM). Gli steroidi (androstenedione, 17-alfa-idrossipregnenolone e DHEAS) ha avuto alcun effetto inibitorio su Carbacolo-induced release Ca(2+) intracellulare. L&#39;azione del DHEA dipendeva da un segnale iniziato alla membrana del plasma, poich&eacute; complessi di membrana impermeant DHEA-BSA inibiscono anche l&#39;effetto di Carbacolo su [Ca(2+)](i) (diminuzione del 39%). L&#39;inibizione del rilascio di Ca(2+) Carbacolo-indotta di DHEA &egrave; stato bloccato dalla tossina pertosse (PTX). DHEA inibisce anche l&#39;induzione di Carbacolo di phosphoinositide generazione, con una massima inibizione a 0,1 nM DHEA. Inoltre, DHEA inibita la secrezione di insulina indotta da Carbacolo nelle cellule INS-1 del 25% e nelle isole pancreatiche umane del 53%. Presi insieme, questo &egrave; il primo rapporto mostrando che umani fisiologici concentrazioni di DHEA diminuiscono rilascio Ca(2+) agonista-indotta da un meccanismo rapido, non genomico nelle cellule INS-1. Inoltre, questi dati forniscono prove coerenti con l&#39;esistenza di un recettore di membrana del plasma specifico DHEA, mediando questo pathway di trasduzione del segnale da pertosse tossina sensibile G-proteine.

Deidroepiandrosterone inibisce il rilascio di calcio intracellulare nelle cellule beta da un meccanismo dipendente dalla membrana plasmatica.

&#x305D;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0; &#x30A2;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x306A;&#x3044;&#x3088;&#x304F;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3051;&#x308C;&#x3069;&#x3082;&#x30C7;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30A8;&#x30D4;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C9;&#x30ED;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30F3; (DHEA) &#x3068; DHEA &#x786B;&#x9178; (DHEAS) &#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9; &#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x5206;&#x6CCC;&#x3092;&#x523A;&#x6FC0;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x751F;&#x7406;&#x7684;&#x6FC3;&#x5EA6; DHEA &#x306E;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x539F;&#x5F62;&#x8CEA;&#x819C;&#x306B;&#x958B;&#x59CB;&#x3057;&#x305F;&#x64CD;&#x4F5C;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x5206;&#x6CCC;&#x3092; alter &#x4EEE;&#x8AAC;&#x3092;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;DHEA &#x5358;&#x72EC;&#x3067;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x6FC3;&#x5EA6; ([Ca(2+)](i)) &#x30E9;&#x30C3;&#x30C8; &#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x7D30;&#x80DE;&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3; (INS-1)&#x3002; &#x52B9;&#x679C;&#x304C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;25 &#xFF05; &#x6291;&#x5236;&#x30BC;&#x30ED;&#x3067;&#x30AB;&#x30EB;&#x30D0;&#x30B3;&#x30FC;&#x30EB;&#x8A98;&#x767A;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0; &#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30B9;&#x30C8;&#x30A2;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x5373;&#x6642;&#x304B;&#x3064;&#x7528;&#x91CF;&#x4F9D;&#x5B58;&#x963B;&#x6B62;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;1 &#x30CA;&#x30CE;&#x30E1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30EB; DHEA&#x3002;DHEA &#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x6291;&#x5236;&#x52B9;&#x679C;&#x306E; bombesin &#xFF08;29 &#xFF05; &#x6E1B;&#xFF09;&#x3001;&#x52D5;&#x54E1;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;glyburide (100 microM) &#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9; &#xFF08;15 mM&#xFF09; &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A98;&#x767A;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x306E;&#x6D41;&#x5165;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30A4;&#x30C9; (&#x30A2;&#x30F3;&#x30C9;&#x30ED;&#x30B9;&#x30C6;&#x30F3;&#x30B8;&#x30AA;&#x30F3;&#x3001;17-&alpha;-&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30AD;&#x30B7;&#x30D7;&#x30EC;&#x30B0;&#x30CD;&#x30CE;&#x30ED;&#x30F3;&#x3068; DHEAS) &#x30AB;&#x30EB;&#x30D0;&#x30B3;&#x30FC;&#x30EB;&#x8A98;&#x767A;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x653E;&#x51FA;&#x6291;&#x5236;&#x52B9;&#x679C;&#x304C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;DHEA &#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x819C;&#x975E;&#x900F;&#x904E;&#x6027; DHEA BSA &#x932F;&#x4F53;&#x3082;&#x3001;&#x4E0A;&#x30AB;&#x30EB;&#x30D0;&#x30B3;&#x30FC;&#x30EB;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3057;&#x305F;&#x306E;&#x3067;&#x539F;&#x5F62;&#x8CEA;&#x819C;&#x306B;&#x958B;&#x59CB;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4F9D;&#x5B58; [&#x3055;&#x305B;&#x305F; &#xFF08;39% &#x6E1B;&#x5C11;&#xFF09;&#x3002;&#x30AB;&#x30EB;&#x30D0;&#x30B3;&#x30FC;&#x30EB;&#x8A98;&#x767A;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0; &#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066; DHEA &#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x306F;&#x767E;&#x65E5;&#x54B3;&#x6BD2;&#x7D20; (PTX) &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;DHEA &#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x30DB;&#x30B9;&#x30DB;&#x30A4;&#x30CE;&#x30B7;&#x30C1;&#x30C9;&#x4E16;&#x4EE3;&#x6700;&#x5927;&#x6291;&#x5236;&#x3067; 0.1 &#x306E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30D0;&#x30B3;&#x30FC;&#x30EB;&#x8A98;&#x5C0E;&#x963B;&#x5BB3; nM DHEA&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;DHEA &#x30AB;&#x30EB;&#x30D0;&#x30B3;&#x30FC;&#x30EB; INS 1 &#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;25 &#xFF05; &#x3068;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x81B5;&#x5CF6;&#x3067; 53 &#xFF05; &#x3067;&#x8A98;&#x767A;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x5206;&#x6CCC;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x53D6;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x751F;&#x7406;&#x7684;&#x6FC3;&#x5EA6; DHEA &#x306E; INS 1 &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6025;&#x901F;&#x306A;&#x975E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x904A;&#x96E2;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x767E;&#x65E5;&#x54B3;&#x6BD2;&#x7D20;&#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3053;&#x306E;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x819C; DHEA &#x306E;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x3068;&#x77DB;&#x76FE;&#x306E;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B; G &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3002;

&#x30C7;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30A8;&#x30D4;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C9;&#x30ED;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30F3; &#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x653E;&#x51FA;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x819C;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x6A5F;&#x69CB;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Dehydroepiandrosterone (DHEA) &#xBC0F; DHEA &#xD669;&#xC0B0; (DHEAS)&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5; &#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9; &#xD589;&#xB3D9;&#xC758; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xC798; &#xD2B9;&#xC9D5; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC778;&#xC290;&#xB9B0; &#xBD84; &#xBE44;&#xB97C; &#xC790;&#xADF9;. DHEA&#xC758; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801; &#xB18D;&#xB3C4; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC6D0;&#xD615;&#xC9C8; &#xB9C9;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DC;&#xC791; &#xC791;&#xC5C5; &#xD558; &#xC5EC; &#xC778;&#xC290;&#xB9B0; &#xBD84; &#xBE44;&#xB97C; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD558;&#xB294; &#xAC00;&#xC124;&#xC744; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. DHEA &#xD63C;&#xC790; &#xD588;&#xB2E4; (&#xC950; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xC140; &#xB77C;&#xC778; (&#xAE30;&#xB2A5;-1) [Ca(2+)](i)) &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xCE7C;&#xC298; &#xB18D;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC8FC;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; 0&#xC5D0;&#xC11C; 25% &#xC5B5;&#xC81C; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xC0C1;&#xC810;&#xC5D0;&#xC11C; Ca(2+) &#xBC84;&#xC804; carbachol &#xC720;&#xB3C4;&#xC758; &#xC989;&#xAC01;&#xC801;&#xC774; &#xACE0; &#xBCF5;&#xC6A9;&#xB7C9; &#xC758;&#xC874; &#xC5B5;&#xC81C;&#xB97C; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD55C; &#xB098;&#xB178;&#xBBF8;&#xD130; DHEA&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. DHEA&#xB294; &#xB610;&#xD55C; Ca(2+) &#xB3D9;&#xC6D0; bombesin (29% &#xAC10;&#xC18C;)&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC800;&#xD574; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; Ca(2+) glyburide (100 microM) &#xB610;&#xB294; &#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9; (15 m m)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; evoked&#xC758; &#xC720;&#xC785; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;. &#xC2A4;&#xD14C;&#xB85C;&#xC774;&#xB4DC; (androstenedione, 17-&#xC54C;&#xD30C;-hydroxypregnenolone&#xC640; DHEAS) &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; Ca(2+) &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; carbachol &#xC720;&#xBC1C; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD6A8;&#xACFC;&#xAC00; &#xC5C6; &#xC5C8;. &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; impermeant DHEA BSA &#xB2E8;&#xC9C0; &#xB610;&#xD55C;&#xC5D0; carbachol &#xD6A8;&#xACFC; &#xC800;&#xD574; &#xD558;&#xBBC0;&#xB85C; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xB9C9;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DC;&#xC791; &#xD558;&#xB294; &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xC758;&#xC874; &#xD558;&#xB294; DHEA&#xC758; &#xD589;&#xB3D9; [Ca(2+)](i) (39% &#xAC10;&#xC18C;). DHEA&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; Ca(2+) &#xCD9C;&#xC2DC; carbachol &#xC720;&#xBC1C;&#xC758; &#xC800;&#xD574;&#xB294; &#xBC31; &#xC77C; &#xD574; &#xB3C5; &#xC18C; (PTX)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCC28;&#xB2E8; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. DHEA&#xB294; &#xB610;&#xD55C; 0.1&#xC5D0;&#xC11C; &#xCD5C;&#xB300;&#xD55C; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC640; phosphoinositide &#xC138;&#xB300;&#xC758; carbachol &#xC720;&#xB3C4; &#xC800;&#xD574; DHEA nM. &#xB610;&#xD55C;, DHEA&#xB294; 53%&#xB85C; 25%&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xCDCC; &#xC7A5; &#xB3C5;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAE30;&#xB2A5;-1 &#xC140;&#xC5D0; carbachol&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C; &#xC778;&#xC290;&#xB9B0; &#xBD84; &#xBE44;&#xB97C; &#xC800;&#xD574;. &#xD568;&#xAED8; &#xCD2C;&#xC601;,&#xC774; DHEA&#xC758; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801; &#xB18D;&#xB3C4; &#xAE30;&#xB2A5;-1 &#xC140;&#xC5D0; &#xC2E0;&#xC18D; &#xD558; &#xAC8C;, &#xBE44; &#xAC8C;&#xB188; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C;&#xB97C; &#xC774;&#xC6A9;&#xD55C; Ca(2+) &#xCD9C;&#xC2DC;&#xB97C; &#xC904;&#xC77C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xB294; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xBCF4;&#xACE0;&#xC11C;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xC2E0;&#xD638; &#xBCC0;&#xD658; &#xD1B5;&#xB85C; &#xB450; &#xC77C; &#xD574; &#xB3C5; &#xC18C; &#xAD6C;&#xBD84; &#xD558; &#xC5EC; &#xC911;&#xC7AC;&#xB97C; &#xD2B9;&#xC815; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; DHEA &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xC640; &#xC77C;&#xCE58; &#xC99D;&#xAC70;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xB294; &#xB610;&#xD55C;, G-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;.

Dehydroepiandrosterone &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xC885;&#xC18D; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xCE7C;&#xC298; &#xCD9C;&#xC2DC;&#xB97C; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD55C;&#xB2E4;.

Dehidroepiandrosterona (DHEA) y la DHEA sulfato (DHEAS) afectan glucosa estimulan la secreci&oacute;n de insulina, aunque sus mecanismos celulares de acci&oacute;n no est&aacute;n bien caracterizadas. Probamos la hip&oacute;tesis que concentraciones fisiol&oacute;gicas humanas de DHEA alteran la secreci&oacute;n de insulina por una acci&oacute;n iniciada en la membrana plasm&aacute;tica de las c&eacute;lulas beta. DHEA sola no tuvo ning&uacute;n efecto en la concentraci&oacute;n de calcio intracelular ([Ca(2+)](i)) en una l&iacute;nea de c&eacute;lulas beta de rata (INS-1). Sin embargo, caus&oacute; una inhibici&oacute;n inmediata y dosis-dependiente de la liberaci&oacute;n de CA Carbacol-inducida de almacenes intracelulares, con un 25% de inhibici&oacute;n a cero. Un nan&oacute;metro DHEA. DHEA tambi&eacute;n inhibe la CA movilizando a efecto de Bombesina (disminuci&oacute;n del 29%), pero no inhiben la afluencia de CA extracelular evocada por gliburida (100 microM) o glucosa (15 mM). Los esteroides (androstenediona, 17-alfa-hydroxypregnenolone y DHEAS) no ten&iacute;an ning&uacute;n efecto inhibitorio sobre la liberaci&oacute;n de CA intracelular inducida por carbacol. La acci&oacute;n de la DHEA depend&iacute;a de una se&ntilde;al iniciada en la membrana plasm&aacute;tica, desde complejos de DHEA-BSA impermeant membrana tambi&eacute;n inhibici&oacute;n el efecto Carbacol en [Ca(2+)](i) (disminuci&oacute;n del 39%). La inhibici&oacute;n de la liberaci&oacute;n de CA Carbacol-inducida por DHEA fue bloqueada por la toxina pertussis (PTX). DHEA tambi&eacute;n inhibe la inducci&oacute;n Carbacol de Fosfoinositol generaci&oacute;n, con un m&aacute;ximo de inhibici&oacute;n a 0.1 nM DHEA. Adem&aacute;s, DHEA inhibe la secreci&oacute;n de insulina inducida por carbacol en c&eacute;lulas INS-1 en un 25% y en los islotes pancre&aacute;ticos humanos en 53%. Tomados en conjunto, este es el primer informe que demuestra que concentraciones fisiol&oacute;gicas humanas de DHEA disminuyen liberaci&oacute;n de CA agonista-inducida por un mecanismo r&aacute;pido, no-gen&oacute;mico en c&eacute;lulas INS-1. Adem&aacute;s, estos datos proporcionan evidencia consistente con la existencia de un receptor espec&iacute;fico de membrana plasm&aacute;tica DHEA, mediar esta v&iacute;a de transducci&oacute;n de se&ntilde;al por pertussis sensibles a la toxina prote&iacute;nas G.

Dehidroepiandrosterona inhibe la liberaci&oacute;n de calcio intracelular en las c&eacute;lulas beta por un mecanismo dependiente de la membrana plasm&aacute;tica.

&#x5B9A;&#x6027;&#x4E3A;&#x8131;&#x6C22;&#x8868;&#x96C4;&#x916E; (DHEA) &#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x53D7;&#x4F53;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5408;&#x6210;&#x542B;&#x751F;&#x7269;&#x7D20;&#x548C;&#x4E8C;&#x82EF;&#x7532;&#x916E; (DHEA-BP-Bt&#xFF09; DHEA &#x6A21;&#x62DF;&#x3002;DHEA-BP-Bt &#x662F; DHEA &#x7684;&#x6362;&#x7B97; [(3) H] DHEA &#x7528;&#x4E8E;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x819C;&#x4E0A;&#x7684;&#x725B;&#x4E3B;&#x52A8;&#x8109;&#x5185;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE; (&#x548C;&#x6280;&#x672F;) &#x76F8;&#x62B5;&#x89E6;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;DHEA-BP-Bt pre-conjugated &#x5230;&#x4EB2;&#x548C;&#x56FA;&#x5B9A;&#x5316;&#x743C;&#x8102;&#x7CD6;&#xFF0C;&#x4E5F;&#x6291;&#x5236;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x7684; [(3) H] DHEA &#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;DHEA-BP-Bt &#x6FC0;&#x6D3B;&#x5185;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E00;&#x6C27;&#x5316;&#x6C2E;&#x5408;&#x9176;&#xFF0C;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x4E8E; DHEA&#x3002;&#x5171;&#x7126;&#x663E;&#x5FAE;&#x7167;&#x7247;&#x663E;&#x793A;&#x5728; photoirradiation&#xFF0C;DHEA-BP-Bt &#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x7F51;&#x7AD9;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x7684;&#x5B5F;&#x52A0;&#x62C9;&#x539F;&#x5B50;&#x80FD;&#x59D4;&#x5458;&#x4F1A; DHEA &#x7684; inhibitable &#x65B9;&#x5F0F;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;DHEA-BP-Bt &#x7ED1;&#x5B9A;&#x5177;&#x4F53;&#x5230;&#x5927;&#x7EA6; 55 kDa &#x548C; 80 kDa&#xFF0C;&#x8981;&#x4E48;&#x5F53;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x88AB;&#x7D2B;&#x5916;&#x7EBF;&#x8F90;&#x7167;&#x4E0E;&#x6A21;&#x62DF;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x7535;&#x6CF3;&#x9694;&#x5F00;&#x6216;&#x914D;&#x4F53;&#x5728;&#x514D;&#x75AB;&#x5370;&#x8FF9;&#x5206;&#x6790;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x786E;&#x8BA4;&#x6210;&#x529F;&#x5149;&#x654F;&#x7684;&#x7D20; DHEA &#x6A21;&#x62DF;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x662F;&#x80FD;&#x591F;&#x5BF9;&#x4EA4;&#x8054;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C; DHEA &#x7ED1;&#x5B9A;&#x7269;&#x8272;&#x548C;&#x8FD9;&#x5C06;&#x4F7F;&#x6211;&#x4EEC;&#x80FD;&#x591F;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x51C0;&#x5316;&#x8FD9;&#x79CD;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x5408;&#x6210;&#x3002;

&#x6A21;&#x62DF;&#x65B0;&#x578B;&#x5149;&#x654F;&#x548C;&#x7D20;&#x8131;&#x6C22;&#x7684;&#x8BC4;&#x4EF7;&#x3002;

To characterize the cell surface receptor for dehydroepiandrosterone (DHEA), we synthesized a DHEA analog containing biotin and benzophenone groups (DHEA-BP-Bt). DHEA-BP-Bt was equipotent with DHEA in competing with [(3)H]DHEA for binding to solubilized plasma membranes of bovine aortic endothelial cells (BAEC). Additionally, DHEA-BP-Bt pre-conjugated to avidin and immobilized on agarose, also inhibited plasma membrane binding of [(3)H]DHEA. Furthermore, DHEA-BP-Bt activated endothelial nitric oxide synthase, similar to DHEA. Confocal micrographs showed that, upon photoirradiation, DHEA-BP-Bt bound to sites on the cell surface of BAEC in a DHEA inhibitable manner. Finally, DHEA-BP-Bt bound specifically to proteins of approximately 55 kDa and 80 kDa, either when live cells were UV irradiated with the analog and plasma membrane proteins separated by SDS-PAGE or in a ligand blot analysis. These data confirm the successful synthesis of a photoactive, biotinylated DHEA analog which is capable of cross-linking to and identifying plasma membrane DHEA binding sites and which will allow us to further purify this receptor.

Evaluation of a novel photoactive and biotinylated dehydroepiandrosterone analog.

Afin de caract&eacute;riser le r&eacute;cepteur de surface cellulaire pour la d&eacute;hydro&eacute;piandrost&eacute;rone (DHEA), nous avons synth&eacute;tis&eacute; un analogue de la DHEA contenant des groupes de biotine et de la benzoph&eacute;none (DHEA-BP-Bt). DHEA-BP-Bt &eacute;tait aussi puissante avec la DHEA en concurrence avec la [3 H] DHEA pour la liaison solubilis&eacute; des membranes plasmiques des cellules endoth&eacute;liales aortiques bovines (CEAB). En outre, DHEA-BP-Bt pre-conjugated &agrave; l&#39;avidine et immobilis&eacute;s sur gel d&#39;agarose, inhibe &eacute;galement la liaison de la membrane plasmique du [3 H] DHEA. En outre, la DHEA-BP-Bt activ&eacute; endothelial nitric oxide synthase, semblable &agrave; la DHEA. La microscopie confocale a montr&eacute; que, d&egrave;s lors, DHEA-BP-Bt li&eacute; aux sites sur la surface de la cellule de BAEC a une mani&egrave;re d&#39;&ecirc;tre inhib&eacute;e par la DHEA. Enfin, la DHEA-BP-Bt li&eacute;e sp&eacute;cifiquement aux prot&eacute;ines d&#39;environ 55 kDa et 80 kDa, soit lorsque des cellules vivantes &eacute;taient UV irradi&eacute; avec l&#39;analogue et prot&eacute;ines de la membrane plasmique s&eacute;parant par SDS-PAGE, ou dans un ligand de la tache analyse. Ces donn&eacute;es confirment la synth&egrave;se r&eacute;ussie d&#39;un analogue de la DHEA biotinyl&eacute; photoactif, qui est capable de r&eacute;ticulation pour et d&#39;identifier les sites de fixation de la membrane plasmique DHEA et qui nous permettra de purifier davantage ce r&eacute;cepteur.

Evaluation d&#39;un roman d&eacute;hydro&eacute;piandrost&eacute;rone photoactif et biotinyl&eacute;s analogique.

Zur Charakterisierung des Zelle Oberfl&auml;che Rezeptors f&uuml;r Dehydroepiandrosteron (DHEA), synthetisiert wir eine DHEA-Analog, Biotin und Benzophenon Gruppen (DHEA-BP-Bt). DHEA-BP-Bt war so mit DHEA im Wettbewerb mit [(3) H] DHEA f&uuml;r die Bindung an aufgel&ouml;ster Plasma-Membranen der bovinen Aorten Endothelzellen (BAEC). Zus&auml;tzlich hemmte DHEA-BP-Bt pre-conjugated, Avidin und immobilisiert auf Agarose, auch Plasmamembran Bindung von [(3) H] DHEA. Dar&uuml;ber hinaus aktiviert DHEA-BP-Bt endotheliale Stickstoffmonoxid-Synthase, &auml;hnlich dem DHEA. Konfokale Aufnahmen zeigten, dass bei Photoirradiation, DHEA-BP-Bt an Standorten auf der Zelloberfl&auml;che von BAEC DHEA inhibitable Weise gebunden. DHEA-BP-Bt speziell an Proteine von rund 55 kDa und 80 kDa, entweder als lebenden Zellen UV Bestrahlung mit dem analogen und Plasma Membranproteine durch SDS-PAGE getrennt oder in ein Ligand Fleck-Analyse waren schlie&szlig;lich gebunden. Diese Daten best&auml;tigen die erfolgreiche Synthese einer fotoaktiven, biotinylierten DHEA Analog-Was ist in der Lage Vernetzung und Plasmamembran DHEA Bindungsstellen zu ermitteln und die erlauben uns, dieses Rezeptors weiter zu reinigen.

Bewertung eines neuartigen fotoaktiven und biotinylierten Dehydroepiandrosteron analog.

Per caratterizzare il recettore di superficie delle cellule per deidroepiandrosterone (DHEA), abbiamo sintetizzato un analogico DHEA che contiene biotina e benzofenone gruppi (DHEA-BP-Bt). DHEA-BP-Bt &egrave; stato equipotenti con DHEA in competizione con [(3) H] DHEA per l&#39;associazione di solubilizzata plasma membrane delle cellule endoteliali aortiche bovina (BAEC). Inoltre, DHEA-BP-Bt pre-conjugated di avidina e immobilizzato su agarosio, inibisce anche la membrana plasmatica associazione [3 h] DHEA. Inoltre, DHEA-BP-Bt attivato endoteliale di ossido nitrico sintasi, simile al DHEA. Micrografie confocale ha mostrato che, su photoirradiation, DHEA-BP-Bt associato a siti sulla superficie delle cellule di BAEC in maniera inhibitable DHEA. Infine, DHEA-BP-Bt legati in particolare alle proteine di circa 55 kDa e 80 kDa, o quando le cellule vive erano UV irradiati con l&#39;analogico e le proteine di membrana plasmatica separati da SDS-PAGE o in un ligand analisi della macchia. Questi dati confermano la riuscita sintesi di un analogico DHEA biotinilato fotoattivo, che &egrave; in grado di cross-linking a e l&#39;identificazione di siti di legame di membrana del plasma DHEA e che ci permetter&agrave; di purificare ulteriormente questo recettore.

Valutazione di un romanzo deidroepiandrosterone fotoattivo e biotinilato analogico.

&#x30C7;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30A8;&#x30D4;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C9;&#x30ED;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30F3; (DHEA) &#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x30D3;&#x30AA;&#x30C1;&#x30F3;&#x3068;&#x30D9;&#x30F3;&#x30BE;&#x30D5;&#x30A7;&#x30CE;&#x30F3; &#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7; (DHEA BP Bt) &#x3092;&#x542B;&#x3080; DHEA &#x30A2;&#x30CA;&#x30ED;&#x30B0;&#x3092;&#x5408;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;DHEA BP Bt DHEA &#x306E; equipotent [3 H] DHEA &#x30A6;&#x30B7;&#x5927;&#x52D5;&#x8108;&#x5185;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE; (BAEC) &#x306E;&#x6EB6;&#x539F;&#x5F62;&#x8CEA;&#x819C;&#x3078;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3068;&#x7AF6;&#x5408;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;DHEA-BP-Bt &#x30A2;&#x30D3;&#x30B8;&#x30F3;&#x3092; pre-conjugated &#x3057;&#x3001;&#x30A2;&#x30AC;&#x30ED;&#x30FC;&#x30B9;&#x3067;&#x56FA;&#x5B9A;&#x5316; [3 H] DHEA &#x306E;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x819C;&#x7D50;&#x5408;&#x3082;&#x6291;&#x5236;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;DHEA BP Bt &#x5185;&#x76AE;&#x4E00;&#x9178;&#x5316;&#x7A92;&#x7D20;&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#x3001;DHEA &#x306B;&#x985E;&#x4F3C;&#x3092;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3002;&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x306E;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x5199;&#x771F;&#x306F;&#x3001;&#x5149;&#x7167;&#x5C04;&#x306B;&#x4F34;&#x3044; DHEA BP Bt &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306B; BAEC &#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x306B; DHEA &#x306E; inhibitable &#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;DHEA BP Bt &#x7D04; 55 kDa &#x3068;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x751F;&#x304D;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x30A2;&#x30CA;&#x30ED;&#x30B0; UV &#x3092;&#x7167;&#x5C04;&#x3057;&#x3066;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE;&#x819C;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E; SDS-PAGE &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5206;&#x96E2;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x3067;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x306E;&#x3057;&#x307F;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x306E;&#x3044;&#x305F;&#x3068;&#x304D; 80 kDa &#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306B;&#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306B;&#x67B6;&#x6A4B;&#x3068;&#x539F;&#x5F62;&#x8CEA;&#x819C; DHEA &#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x304C;&#x53EF;&#x80FD;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306F;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3053;&#x306E;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3092;&#x6D44;&#x5316;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3001;&#x5149;&#x6D3B;&#x6027;&#x3001;&#x30D3;&#x30AA;&#x30C1;&#x30F3;&#x6A19;&#x8B58; DHEA &#x30A2;&#x30CA;&#x30ED;&#x30B0;&#x306E;&#x5408;&#x6210;&#x306B;&#x6210;&#x529F;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30A2;&#x30CA;&#x30ED;&#x30B0;&#x3001;&#x5C0F;&#x8AAC;&#x306E;&#x5149;&#x6D3B;&#x6027;&#x3068;&#x30D3;&#x30AA;&#x30C1;&#x30F3;&#x5316;&#x30C7;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30A8;&#x30D4;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C9;&#x30ED;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3002;

Dehydroepiandrosterone (DHEA)&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xBA74; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; DHEA &#xC544;&#xB0A0;&#xB85C;&#xADF8; biotin benzophenone &#xADF8;&#xB8F9; (DHEA-&#xD608;&#xC555;-Bt)&#xC774; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xD569;&#xC131;. DHEA-&#xD608;&#xC555;-Bt DHEA&#xC640; equipotent [(3) H] solubilized &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xB9C9; &#xC18C; &#xB300;&#xB3D9;&#xB9E5; &#xB0B4; &#xD53C; &#xC138;&#xD3EC; (BAEC)&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; DHEA&#xC640; &#xACBD;&#xC7C1; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C; DHEA-&#xD608;&#xC555;-Bt avidin&#xC5D0; pre-conjugated &#xBC0F; agarose&#xC5D0; &#xC6C0;&#xC9C1;&#xC77C; &#xC218;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; [(3) H] DHEA&#xC758; &#xC800;&#xD574;. &#xB610;&#xD55C;, DHEA-&#xD608;&#xC555;-Bt &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB0B4; &#xD53C; &#xC0B0;&#xD654; &#xC9C8;&#xC18C; synthase, DHEA&#xC640; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Confocal &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;, photoirradiation, &#xB530;&#xB77C; DHEA-&#xD608;&#xC555;-Bt&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; BAEC&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; DHEA inhibitable &#xBC29;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, DHEA &#xD608;&#xC555; bt&#xAC00; &#xC57D; 55 Kda&#xACFC; UV&#xB294; &#xC544;&#xB0A0;&#xB85C;&#xADF8; &#xBC18;&#xAD6C; &#xBC0F; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; SDS-PAGE&#xB85C; &#xBD84;&#xB9AC; &#xB610;&#xB294; &#xC624; &#xC810; &#xBD84;&#xC11D;&#xC740; &#xB9AC;&#xAC04;&#xB4DC;&#xC5D0; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xC140; &#xB54C; &#xC911; 80 kDa &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD2B9;&#xD788; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xD655;&#xC778; &#xAD11;, biotinylated DHEA &#xC544;&#xB0A0;&#xB85C;&#xADF8;&#xB97C; &#xAD50;&#xCC28; &#xD558; &#xACE0; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; DHEA &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xC218; &#xACE0;&#xB294; &#xB354; &#xC815;&#xD654;&#xC774; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xB97C; &#xC218; &#xC788;&#xB3C4;&#xB85D;&#xC758; &#xC131;&#xACF5;&#xC801;&#xC778; &#xD569;&#xC131;.

&#xC544;&#xB0A0;&#xB85C;&#xADF8;&#xB294; &#xC18C;&#xC124; &#xAD11; &#xACE0; biotinylated dehydroepiandrosterone&#xC758; &#xD3C9;&#xAC00;.

Para caracterizar el receptor de superficie celular de dehidroepiandrosterona (DHEA), nos sintetiza un an&aacute;logo DHEA que contiene grupos de biotina y benzofenona (DHEA-BP-Bt). DHEA-BP-Bt fue equipotente con DHEA en competir con [3 H] DHEA Uni&oacute;n solubilizadas membranas de plasma de c&eacute;lulas endoteliales a&oacute;rticas bovinas (BAEC). Adem&aacute;s, DHEA-BP-Bt pre-conjugated a avidina e inmovilizados en agarosa, tambi&eacute;n inhibi&oacute; el atascamiento de la membrana plasm&aacute;tica de [3 H] DHEA. Adem&aacute;s, DHEA-BP-Bt activa la &oacute;xido n&iacute;trico sintasa endotelial, similar a la DHEA. Micrograf&iacute;as confocales demostraron que, al photoirradiation, DHEA-BP-Bt destinada a sitios en la superficie celular de BAEC de manera inhibitable DHEA. Finalmente, DHEA-BP-Bt destinada espec&iacute;ficamente a prote&iacute;nas de aproximadamente 55 kDa y 80 kDa, ya sea cuando c&eacute;lulas vivas fueron UV irradiado con el an&aacute;logo y prote&iacute;nas de la membrana plasm&aacute;tica separaron por SDS-PAGE o en un ligando seque los an&aacute;lisis. Estos datos confirman la s&iacute;ntesis exitosa de un an&aacute;logo DHEA biotinilado fotoactivas, que es capaz de cross-linking para e identificar sitios de uni&oacute;n de membrana plasm&aacute;tica DHEA y que permite purificar m&aacute;s este receptor.

Evaluaci&oacute;n de una novela dehidroepiandrosterona fotoactivas y biotinilado anal&oacute;gico.

&#x5A92;&#x7684;&#x539F;&#x751F;&#x52A8;&#x7269;&#x675C;&#x6C0F;&#x5229;&#x4EC0;&#x66FC;&#x539F;&#x866B; chagasi &#x63A5;&#x79CD;&#x5230;&#x76AE;&#x80A4;&#x540E;&#x4F1A;&#x5BFC;&#x81F4;&#x8F7B;&#x5FAE;&#x708E;&#x75C7;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4F20;&#x64AD;&#x9020;&#x6210;&#x81F4;&#x547D;&#x5185;&#x810F;&#x5229;&#x4EC0;&#x66FC;&#x75C5;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x5B9A;&#x4E49;&#x5728;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x63A5;&#x79CD;&#x90E8;&#x4F4D;&#x7684;&#x708E;&#x75C7;&#x53CD;&#x5E94;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F15;&#x5165;&#x4E9A;&#x5FAA;&#x73AF;&#x7FA4; L.&#x539F;&#x866B; chagasi promastigotes intradermally &#x5230; BALB/c &#x5C0F;&#x9F20;&#x8033;&#x548C;&#x7814;&#x7A76;&#x708E;&#x75C7;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D85;&#x8FC7; 7 &#x5929;&#x3002;Ly6G(+) &#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC5;&#x901F;&#x6E17;&#x900F;&#x5230;&#x771F;&#x76AE;&#x5C42;&#xFF0C;&#x8FBE;&#x5230;&#x9AD8;&#x5CF0;&#x540E; 6 &#x81F3; 24 h.&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C; NK &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0B;&#x4E00;&#x6B65;&#x6E17;&#x900F;&#x771F;&#x76AE;&#x5C42;&#xFF0C;&#x548C; NK &#x8DDF;&#x6269;&#x5927;&#x5F15;&#x6D41;&#x533A;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x7ED3;&#x4E2D;&#x7684; B &#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x542B;&#x6709;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x7684;&#x541E;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0E;&#x8367;&#x5149;&#x6807;&#x8BB0; mCherry L.&#x539F;&#x866B; chagasi &#x88AB;&#x8DDF;&#x8E2A;&#x3002;Ly6G(+) &#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5728;&#x63A5;&#x79CD;&#x4E4B;&#x540E;&#x8F7D;&#x80DE;&#x5185;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B; 6 &#x81F3; 24 h &#x7684;&#x6700;&#x5927;&#x6BD4;&#x4F8B;&#xFF0C;&#x800C;&#x771F;&#x76AE;&#x7684;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x540E; 2 &#x5230; 7 &#x5929;&#x6000;&#x80DE;&#x5185;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x7684;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x89C2;&#x5BDF;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x4E0B;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x9A8C;&#x8BC1;&#x3002;&#x4F4E;&#x5242;&#x91CF;&#x6297;&#x4F53;&#x7684;&#x6682;&#x6001;&#x8D2B;&#x5316;&#x5C0F;&#x9F20;&#x7684;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x5176;&#x4ED6;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4FDD;&#x6301;&#x4E0D;&#x53D8;&#x3002;&#x5408;&#x5E76;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x7684;&#x6D3B;&#x4F53;&#x6210;&#x50CF;&#x6D41;&#x5F0F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x672F;&#xFF0C;&#x548C;&#x5B9A;&#x91CF; pcr &#x65B9;&#x6CD5;&#x663E;&#x793A;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6D88;&#x8017;&#x6709;&#x6240;&#x653E;&#x7F13;&#x671F;&#x95F4;&#x7B2C;&#x4E00;&#x4E2A; 24 &#x5C0F;&#x65F6;&#x7684;&#x80DE;&#x5916; &#xFF08;&#x8367;&#x5149;&#x7D20;&#x9176;&#x6297;&#x4F53;&#x9633;&#x6027;) promastigotes &#x8FC7;&#x5173;&#x540E;&#x63A5;&#x79CD;&#x5C1A;&#x672A;&#x4E0B;&#x964D;&#x7684;&#x542B;&#x6E38;&#x79BB; (mCherry &#x6297;&#x4F53;&#x9633;&#x6027;) &#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x7684;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6570;&#x76EE;&#x3002;3 &#x5929;&#x4EE5;&#x540E;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x603B; L.&#x539F;&#x866B; chagasi &#x542B;&#x771F;&#x76AE;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x5F15;&#x6D41;&#x533A;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x7ED3;&#x603B; L.&#x539F;&#x866B; chagasi &#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x662F;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x7EC4;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x6CE2; L.&#x539F;&#x866B; chagasi &#x5305;&#x542B;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53D1;&#x751F;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8017;&#x5C3D;&#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#xFF0C;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6062;&#x590D;&#x7684;&#x65F6;&#x95F4;&#x5BF9;&#x5E94;&#x5230;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x63A5;&#x79CD;&#x540E; 7 &#x5929;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x5728;&#x63A5;&#x79CD;&#x4E4B;&#x540E;&#x751A;&#x81F3;&#x665A;&#x5230;&#x771F;&#x76AE;&#x5C42;&#x62DB;&#x8058;&#x4E86;&#x55DC;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE; L.&#x539F;&#x866B; chagasi &#x8D29;&#x8FD0;&#x548C;&#x901A;&#x8FC7;&#x4E24;&#x4E2A;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CF;&#x5C11;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x5BF9;&#x7167;&#x7EC4;&#x5C0F;&#x9F20;&#xFF0C;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x6709;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x3002;&#x55DC;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5728;&#x77AC;&#x6001;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x5C45;&#x4F4F;&#x7684;&#x62DB;&#x8058;&#x53EF;&#x80FD; nonulcerative &#x5F62;&#x5F0F;&#x7684;&#x5229;&#x4EC0;&#x66FC;&#x75C5;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6E17;&#x5165;&#x76AE;&#x80A4;&#x53CA;&#x5F15;&#x6D41;&#x533A;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x7ED3;&#x675C;&#x6C0F;&#x5229;&#x4EC0;&#x66FC;&#x539F;&#x866B; chagasi &#x539F;&#x751F;&#x52A8;&#x7269;&#x7FA4;&#x843D;&#x7684;&#x56DE;&#x5E94;&#x3002;

The vector-borne protozoan Leishmania infantum chagasi causes minimal inflammation after inoculation into skin but disseminates to cause fatal visceral leishmaniasis. To define the inflammatory response at the parasite inoculation site, we introduced metacyclic L. infantum chagasi promastigotes intradermally into BALB/c mouse ears and studied inflammatory cells over 7 days. Ly6G(+) neutrophils rapidly infiltrated the dermis, peaking after 6 to 24 h. Macrophages and NK cells next infiltrated the dermis, and NK followed by B cells expanded in draining lymph nodes. Parasite-containing phagocytes were tracked with fluorescent mCherry-labeled L. infantum chagasi. Ly6G(+) neutrophils contained the greatest proportion of intracellular parasites 6 to 24 h after inoculation, whereas dermal macrophages harbored the majority of intracellular parasites after 2 to 7 days. These observations were validated microscopically. Low doses of antibody transiently depleted mice of neutrophils, leaving other cells intact. Combined results of in vivo imaging, flow cytometry, and quantitative PCR showed that neutrophil depletion slowed the clearance of extracellular (luciferase-positive) promastigotes during the first 24 h after inoculation yet decreased the numbers of leukocytes containing intracellular (mCherry-positive) parasites. From 3 days onward, total L. infantum chagasi-containing dermal leukocytes and total L. infantum chagasi parasites in draining lymph nodes were similar in both groups. Nonetheless, a second wave of L. infantum chagasi-containing neutrophils occurred 7 days after parasite inoculation into neutrophil-depleted mice, corresponding to the time of neutrophil recovery. Thus, neutrophils were recruited to the dermis even late after inoculation, and L. infantum chagasi trafficked through neutrophils in both neutrophil-depleted and control mice, albeit with different kinetics. Recruitment of neutrophils and transient parasite residence in neutrophils may play a role in nonulcerative forms of leishmaniasis.

Leukocytes infiltrate the skin and draining lymph nodes in response to the protozoan Leishmania infantum chagasi.

Le vecteur d&#x26;#39;origine protozoaire Leishmania infantum chagasi provoque une inflammation minime apr&#xE8;s l&#x26;#39;inoculation dans la peau, mais diffuse de causer la mort la leishmaniose visc&#xE9;rale. Pour d&#xE9;finir la r&#xE9;ponse inflammatoire au site d&#x26;#39;inoculation du parasite, nous avons introduit m&#xE9;tacyclique L. infantum promastigotes chagasi par voie intradermique dans les oreilles de souris BALB / c et a &#xE9;tudi&#xE9; les cellules inflammatoires pendant 7 jours. Ly6G (+) neutrophiles sont rapidement infiltr&#xE9;s dans le derme, avec un pic au bout de 6 &#xE0; 24 h. Les macrophages et les cellules NK prochaine infiltr&#xE9; le derme, et NK suivie par les cellules B &#xE9;largi dans les ganglions lymphatiques. Parasite contenant les phagocytes ont &#xE9;t&#xE9; suivis avec fluorescente chagasi mCherry marqu&#xE9; L. infantum. Ly6G (+) neutrophiles contenait la plus grande proportion de parasites intracellulaires 6 &#xE0; 24 h apr&#xE8;s l&#x26;#39;inoculation, alors que les macrophages dermiques regroupait la majorit&#xE9; des parasites intracellulaires apr&#xE8;s 2 &#xE0; 7 jours. Ces observations ont &#xE9;t&#xE9; valid&#xE9;s au microscope. De faibles doses d&#x26;#39;anticorps transitoirement appauvri souris de neutrophiles, laissant les autres cellules intactes. Les r&#xE9;sultats combin&#xE9;s de imagerie in vivo, cytom&#xE9;trie de flux, et PCR quantitative a montr&#xE9; que l&#x26;#39;appauvrissement des neutrophiles ralenti le jeu de promastigotes extracellulaires (lucif&#xE9;rase-positif) durant les 24 premi&#xE8;res heures apr&#xE8;s l&#x26;#39;inoculation encore diminu&#xE9; le nombre de leucocytes contenant des parasites intracellulaires (mCherry-positif). Du 3 partir jours, au total L. infantum chagasi-dermiques contenant des leucocytes et le total des parasites L. infantum chagasi dans les ganglions lymphatiques &#xE9;taient semblables dans les deux groupes. N&#xE9;anmoins, une deuxi&#xE8;me vague de L. infantum chagasi contenant des neutrophiles a eu lieu 7 jours apr&#xE8;s l&#x26;#39;inoculation du parasite dans les neutrophiles appauvri souris, correspondant au temps de la r&#xE9;cup&#xE9;ration des neutrophiles. Ainsi, les neutrophiles ont &#xE9;t&#xE9; recrut&#xE9;s pour le derme, m&#xEA;me tard apr&#xE8;s l&#x26;#39;inoculation, et L. infantum chagasi victimes de la traite par le biais des neutrophiles dans les deux neutrophiles appauvri et les souris de contr&#xF4;le, mais avec des cin&#xE9;tiques diff&#xE9;rentes. Le recrutement des neutrophiles et de s&#xE9;jour des parasites transitoires dans les neutrophiles peut jouer un r&#xF4;le dans les formes de leishmaniose non ulc&#xE9;reuse.

Leucocytes Infiltrer la peau et les ganglions lymphatiques de drainage en r&#xE9;ponse &#xE0; la chagasi Protozoaire Leishmania infantum

Die vektor&uuml;bertragbare Protozoen Leishmania Infantum Chagasi verursacht minimale Entz&uuml;ndung nach Inokulation in Haut aber verbreitet um t&ouml;dliche Leishmaniose verursachen. Um die entz&uuml;ndliche Reaktion am Standort Inokulation Parasit definieren, wir metacyclic L. Infantum Chagasi Promastigotes intradermal in BALB/c Maus Ohren eingef&uuml;hrt und studierte von Entz&uuml;ndungszellen mehr als 7 Tagen. Ly6G(+) Neutrophilen schnell infiltriert die Dermis, H&ouml;chststand nach 6 bis 24 Uhr Makrophagen und NK-Zellen infiltriert weiter der Dermis und NK gefolgt von B-Zellen in Drainierende Lymphknoten erweitert. Parasit-haltigen Fresszellen wurden mit fluoreszierenden mCherry-beschrifteten L. Infantum Chagasi verfolgt. Ly6G(+) Neutrophilen enthalten zum gr&ouml;&szlig;ten Teil intrazellul&auml;re Parasiten 6 bis 24 h nach der Inokulation, w&auml;hrend dermale Makrophagen die Mehrheit der intrazellul&auml;re Parasiten nach 2 bis 7 Tagen hegten. Diese Beobachtungen wurden mikroskopisch &uuml;berpr&uuml;ft. Niedrige Dosen von Antik&ouml;rper ersch&ouml;pft vor&uuml;bergehend M&auml;use von Neutrophilen, andere Zellen intakt. Kombinierten Ergebnisse der in-vivo Bildgebung, Durchflusszytometrie und quantitativer PCR zeigte, dass neutrophil Ersch&ouml;pfung den Rechnungsabschlu&szlig; extrazellul&auml;re (Luciferase-positiv) Promastigotes w&auml;hrend der ersten 24 Stunden verlangsamt nach Impfung noch die Zahl der Leukozyten, die intrazellul&auml;re Parasiten in (mCherry-positiv) verringert. Ab 3 Tage vorw&auml;rts waren total L. Infantum Chagasi-haltigen dermal Leukozyten und total L. Infantum Chagasi Parasiten in Drainierende Lymphknoten in beiden Gruppen &auml;hnlich. Dennoch ist eine zweite Welle von L. Infantum Chagasi-haltigen Neutrophilen 7 Tage nach der Inokulation der Parasit in Neutrophilen-abgereichertem M&auml;use, entsprechend der Zeit des neutrophil Wiederherstellung aufgetreten. So Neutrophilen wurden auch sp&auml;t nach der Inokulation der Dermis angeworben, und L. Infantum Chagasi verschleppt durch neutrophile in beiden Neutrophilen-ersch&ouml;pft und Steuerelement-M&auml;usen, wenn auch mit unterschiedlichen Kinetik. Rekrutierung von Neutrophilen und Transienten Parasit Residenz in Neutrophilen kann eine Rolle in Nonulcerative Formen der Leishmaniose.

Leukozyten infiltrieren Haut und Drainierende Lymphknoten als Reaktion auf die Protozoen Leishmania Infantum Chagasi.

Vettoriali protozoo Leishmania infantum chagasi provoca infiammazione minima dopo l&#39;inoculazione in pelle ma dissemina per causare fatale leishmaniosi viscerale. Per definire la risposta infiammatoria presso il sito di inoculazione del parassita, abbiamo introdotto per via intradermica metacyclic L. infantum chagasi promastigotes nelle orecchie di topo BALB/c e studiato le cellule infiammatorie oltre 7 giorni. Ly6G(+) neutrofili rapidamente infiltrarono il derma, piazzandosi dopo 6-24 h. macrofagi e cellule NK prossimo infiltrarono il derma, NK seguita da cellule B ampliate nei linfonodi drenanti. Fagociti contenenti parassita sono stati monitorati con fluorescente mCherry-etichettati L. infantum chagasi. Ly6G(+) neutrofili contenevano la pi&ugrave; grande percentuale di parassiti intracellulari 6-24 h dopo l&#39;inoculazione, considerando che macrofagi dermici ospitava la maggior parte dei parassiti intracellulari dopo 2-7 giorni. Queste osservazioni sono state convalidate microscopicamente. Basse dosi dell&#39;anticorpo impoverito transitoriamente topi dei neutrofili, lasciando intatte le altre cellule. Risultati combinati di imaging in vivo, citometria a flusso, e PCR quantitativa hanno mostrato che deplezione dei neutrofili ha rallentato la liquidazione dei extracellulare (luciferase-positivo) promastigotes durante le prime 24 h dopo inoculazione ancora &egrave; diminuito il numero dei leucociti contenenti parassiti intracellulari di (mCherry-positivo). Da 3 giorni in poi, totale L. infantum chagasi parassiti nei linfonodi drenanti e totali L. infantum contenenti chagasi dermico leucociti erano simili in entrambi i gruppi. Tuttavia, una seconda ondata di neutrofili contenenti chagasi di L. infantum si &egrave; verificato in 7 giorni dopo l&#39;inoculazione del parassita in topi impoverito neutrofili, corrispondente al tempo di recupero dei neutrofili. Cos&igrave;, i neutrofili sono stati reclutati per il derma anche tardi dopo l&#39;inoculazione, e L. infantum chagasi trafficate attraverso i neutrofili in entrambi i neutrofili-esaurito e topi di controllo, sia pure con diversa cinetica. Reclutamento di neutrofili e parassita temporaneo soggiorno in neutrofili pu&ograve; svolgere un ruolo in nonulcerative forme di leishmaniosi.

Leucociti infiltrano la pelle e il drenaggio dei linfonodi in risposta al protozoo Leishmania infantum chagasi.

&#x5A92;&#x4ECB;&#x539F;&#x866B;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E5;&#x30DE;&#x30CB;&#x30A2;infantum chagasi&#x306F;&#x3001;&#x76AE;&#x819A;&#x306B;&#x63A5;&#x7A2E;&#x3057;&#x305F;&#x5F8C;&#x3001;&#x6700;&#x5C0F;&#x9650;&#x306E;&#x708E;&#x75C7;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3059;&#x81F4;&#x547D;&#x7684;&#x306A;&#x5185;&#x81D3;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E5;&#x30DE;&#x30CB;&#x30A2;&#x75C7;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3059;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x767A;&#x4FE1;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x63A5;&#x7A2E;&#x90E8;&#x4F4D;&#x3067;&#x306E;&#x708E;&#x75C7;&#x53CD;&#x5FDC;&#x3092;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;metacyclic L. infantum chagasi&#x306F;&#x3001;BALB / c&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x8033;&#x306B;&#x76AE;&#x524D;&#x97AD;&#x3068;7&#x65E5;&#x9593;&#x306E;&#x708E;&#x75C7;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x7814;&#x7A76;&#x767A;&#x8868;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002; Ly6G&#xFF08;+&#xFF09;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x306F;&#x6025;&#x901F;&#x306B;6&#x304B;&#x3089;24&#x6642;&#x9593;&#x5F8C;&#x306B;&#x30D4;&#x30FC;&#x30AF;&#x306B;&#x9054;&#x3057;&#x3001;&#x771F;&#x76AE;&#x306B;&#x6D78;&#x6F64;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x3084;NK&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x6B21;&#x306E;&#x771F;&#x76AE;&#x306B;&#x4FB5;&#x5165;&#x3057;&#x3001;NK&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7BC0;&#x3092;&#x6392;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x62E1;&#x5927;&#x3057;&#x3001;B&#x7D30;&#x80DE;&#x304C;&#x7D9A;&#x304F;&#x3002;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x542B;&#x6709;&#x98DF;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x86CD;&#x5149;mCherry&#x6A19;&#x8B58;L. infantum chagasi&#x3067;&#x8FFD;&#x8DE1;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x771F;&#x76AE;&#x306E;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x304C;2&#x304B;&#x3089;7&#x65E5;&#x5F8C;&#x306B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x5BC4;&#x751F;&#x4F53;&#x306E;&#x5927;&#x534A;&#x3092;&#x62B1;&#x3044;&#x4E00;&#x65B9;Ly6G&#xFF08;+&#xFF09;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x306F;&#x3001;&#x63A5;&#x7A2E;&#x5F8C;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x5BC4;&#x751F;&#x4F53;&#x306E;&#x6700;&#x5927;&#x306E;&#x5272;&#x5408;&#x304C;6&#x304B;&#x3089;24&#x6642;&#x9593;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x89B3;&#x200B;&#x200B;&#x5BDF;&#x306F;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3067;&#x691C;&#x8A3C;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6297;&#x4F53;&#x306E;&#x4F4E;&#x7528;&#x91CF;&#x306F;&#x3001;&#x4E00;&#x6642;&#x7684;&#x306B;&#x4ED6;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x306F;&#x305D;&#x306E;&#x307E;&#x307E;&#x306B;&#x3057;&#x3001;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x306E;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3092;&#x67AF;&#x6E07;&#x3002; in vivo&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x3001;&#x30D5;&#x30ED;&#x30FC;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x3001;&#x5B9A;&#x91CF;PCR&#x3067;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x4E88;&#x9632;&#x63A5;&#x7A2E;&#x304C;&#x307E;&#x3060;&#x7D30;&#x80DE;&#xFF08;mCherry&#x967D;&#x6027;&#xFF09;&#x3001;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x767D;&#x8840;&#x7403;&#x6570;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x5F8C;&#x3001;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x67AF;&#x6E07;&#x304C;&#x6700;&#x521D;&#x306E;24&#x6642;&#x9593;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x5916;&#xFF08;&#x30EB;&#x30B7;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x967D;&#x6027;&#xFF09;&#x524D;&#x97AD;&#x306E;&#x30AF;&#x30EA;&#x30A2;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x3092;&#x9045;&#x304F;&#x3057;&#x305F;&#x3002; 3&#x65E5;&#x4EE5;&#x964D;&#x3001;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7BC0;&#x3092;&#x6392;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x7DCF;L. infantum chagasi&#x542B;&#x6709;&#x76AE;&#x819A;&#x767D;&#x8840;&#x7403;&#x3068;&#x7DCF;L. infantum chagasi&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x306F;&#x4E21;&#x7FA4;&#x3067;&#x540C;&#x7B49;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;L. infantum chagasi&#x542B;&#x6709;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x306E;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x6CE2;&#x306F;7&#x65E5;&#x9593;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x56DE;&#x5FA9;&#x306E;&#x6642;&#x9593;&#x306B;&#x76F8;&#x5F53;&#x3059;&#x308B;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x67AF;&#x6E07;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306B;&#x5BC4;&#x751F;&#x63A5;&#x7A2E;&#x5F8C;&#x306B;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x306F;&#x3001;&#x63A5;&#x7A2E;&#x3057;&#x305F;&#x5F8C;&#x3067;&#x3082;&#x9045;&#x304F;&#x771F;&#x76AE;&#x306B;&#x63A1;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3001;&#x3068;L. infantum chagasi&#x306F;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x52D5;&#x614B;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x67AF;&#x6E07;&#x3068;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x3067;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x58F2;&#x8CB7;&#x3002;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x306E;&#x4E00;&#x6642;&#x7684;&#x306A;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x306E;&#x4F4F;&#x5B85;&#x306E;&#x52DF;&#x96C6;&#x306F;&#x3001;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E5;&#x30DE;&#x30CB;&#x30A2;&#x75C7;&#x306E;nonulcerative&#x5F62;&#x3067;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3059;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x767D;&#x8840;&#x7403;&#x306F;&#x539F;&#x866B;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E5;&#x30DE;&#x30CB;&#x30A2;Infantum Chagasi&#x306B;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3057;&#x305F;&#x76AE;&#x819A;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6240;&#x5C5E;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7BC0;&#x306B;&#x6F5C;&#x5165;

Protozoan Leishmania infantum &#xBCA1;&#xD130; &#xBD80;&#xB2F4; chagasi &#xD53C;&#xBD80;&#xC5D0; &#xC811;&#xC885; &#xD6C4; &#xCD5C;&#xC18C;&#xD55C;&#xC758; &#xC5FC;&#xC99D;&#xC774; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xCE58;&#xBA85;&#xC801;&#xC778; &#xB0B4;&#xC7A5; leishmaniasis&#xB97C; &#xBC1C;&#xC2E0;. &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9; &#xC811;&#xC885; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC120; &#xB3D9;&#xC801;&#xC778; &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &#xC815;&#xC758; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; BALB/c &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xADC0;&#xC5D0; intradermally metacyclic L. infantum chagasi promastigotes&#xB97C; &#xB3C4;&#xC785; &#xD558; &#xACE0; 7 &#xC77C; &#xB3D9;&#xC548; &#xC5FC;&#xC99D; &#xC131; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xACF5;&#xBD80; &#xD588;&#xB2E4;. Ly6G(+) &#xD638; &#xC911;&#xAD6C;&#xB294; &#xAE09;&#xC18D; &#xD558; &#xAC8C; &#xC815;&#xC810; 6 ~ 24 h. &#xB300; &#xC2DD; &#xD6C4; &#xC9C4; &#xD53C; &#xCE68;&#xD22C; NK &#xC138;&#xD3EC;&#xB294; &#xB2E4;&#xC74C; &#xC9C4; &#xD53C;, &#xCE68;&#xD22C; &#xBC0F; NK &#xBC30;&#xCD9C; &#xB9BC;&#xD504;&#xC808;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD655;&#xC7A5; B &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB2E4;&#xC74C;&#xC5D0;. &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9;&#xC774; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC; &#xD615;&#xAD11; mCherry &#xD45C;&#xC2DC; &#xB41C; L. infantum chagasi&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xCD94;&#xC801; &#xD588;&#xB2E4;. Ly6G(+) &#xD638; &#xC911;&#xAD6C; &#xD53C;&#xBD80; &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9;&#xC758; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84; 2 ~ 7 &#xC77C; &#xD6C4; &#xC228;&#xACA8; &#xBC18;&#xBA74;, &#xC811;&#xC885; &#xD6C4; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9; 6 ~ 24 h&#xC758; &#xAC00;&#xC7A5; &#xD070; &#xBE44;&#xC728;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xAD00;&#xCC30; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC73C;&#xB85C; &#xD655;&#xC778; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD56D; &#xCCB4;&#xC758; &#xB0AE;&#xC740; &#xBCF5;&#xC6A9;&#xB7C9;&#xC740; transiently &#xD638; &#xC911;&#xAD6C;, &#xB2E4;&#xB978; &#xC140;&#xC740; &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; &#xB450;&#xACE0; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xACE0;&#xAC08;. Vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xC601;&#xC0C1;&#xC758; &#xACB0;&#xD569;&#xB41C; &#xACB0;&#xACFC; cytometry, &#xD750;&#xB984;&#xACFC; &#xC815;&#xB7C9;&#xC801; PCR &#xD638; &#xACE0;&#xAC08; &#xD6C4; &#xC811;&#xC885; &#xC544;&#xC9C1; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; (mCherry &#xC591;&#xC131;) &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xBC31;&#xD608;&#xAD6C;&#xC758; &#xC22B;&#xC790;&#xB97C; &#xAC10;&#xC18C; &#xCCAB; 24 &#xC2DC;&#xAC04; &#xB3D9;&#xC548; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; (&#xB8E8;&#xC2DC;&#xD398;&#xB77C;&#xC544;&#xC81C; &#xC591;&#xC131;) promastigotes&#xC758; &#xD074;&#xB9AC;&#xC5B4;&#xB7F0;&#xC2A4;&#xB97C; &#xB454;&#xD654; &#xD588;&#xB2E4;. 3 &#xC77C; &#xC774;&#xD6C4;, &#xCD1D; L. infantum chagasi &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xD53C;&#xBD80; &#xBC31;&#xD608;&#xAD6C; &#xBC0F; &#xCD1D; L. infantum chagasi &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9; &#xBC30;&#xCD9C; &#xB9BC;&#xD504;&#xC808; &#xB450; &#xADF8;&#xB8F9; &#xC804;&#xBD80;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xC0AC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7FC;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0;, L. infantum chagasi &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xD638; &#xC911;&#xAD6C;&#xC758; &#xB450; &#xBC88;&#xC9F8; &#xBB3C;&#xACB0; &#xD638; &#xBCF5;&#xAD6C; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC5D0; &#xD574;&#xB2F9; &#xD558;&#xB294; neutrophil &#xACE0;&#xAC08; &#xC950;&#xB85C; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9; &#xC811;&#xC885; &#xD6C4; 7 &#xC77C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xD638; &#xC911;&#xAD6C;, &#xC811;&#xC885; &#xD6C4;&#xC5D0; &#xB2A6;&#xAC8C; &#xC9C4; &#xD53C;&#xC5D0; &#xBAA8;&#xC9D1; &#xB41C; &#xBC0F; &#xB2E4;&#xB978; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB860;&#xC73C;&#xB85C; &#xC774;&#xAE30;&#xB294; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; neutrophil &#xACE0;&#xAC08; &#xBAA8;&#xB450;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC911; &#xC131;&#xAD6C; &#xBC0F; &#xD1B5;&#xC81C; &#xC950;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4; L. infantum chagasi. &#xC911; &#xC131;&#xAD6C; &#xBC0F; &#xD638; &#xC911;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xAC70;&#xC8FC; &#xACFC;&#xB3C4; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9;&#xC758; &#xBAA8;&#xC9D1; nonulcerative &#xD615;&#xD0DC;&#xC758; leishmaniasis &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xBC31;&#xD608;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xCE68;&#xD22C; &#xD53C;&#xBD80;&#xC640; &#xBC30;&#xCD9C; &#xB9BC;&#xD504;&#xC808; protozoan Leishmania infantum chagasi&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;.

La transmisi&#xF3;n vectorial protozoo Leishmania infantum chagasi causa inflamaci&#xF3;n m&#xED;nima despu&#xE9;s de la inoculaci&#xF3;n en la piel pero se disemina a provocar la leishmaniasis visceral fatal. Para definir la respuesta inflamatoria en el sitio de la inoculaci&#xF3;n del par&#xE1;sito, se introdujo metac&#xED;clicos de L. infantum chagasi promastigotos por v&#xED;a intrad&#xE9;rmica en los o&#xED;dos de ratones Balb / c, y estudi&#xF3; las c&#xE9;lulas inflamatorias durante 7 d&#xED;as. Ly6G (+) neutr&#xF3;filos r&#xE1;pidamente infiltrado en la dermis, con un pico despu&#xE9;s de las 6 a 24 h. Los macr&#xF3;fagos y las c&#xE9;lulas NK junto infiltrado en la dermis, y NK seguido por las c&#xE9;lulas B se ampli&#xF3; en ganglios linf&#xE1;ticos de drenaje. Par&#xE1;sito que contienen los fagocitos se les dio seguimiento por fluorescentes mCherry marcado con L. infantum chagasi. Ly6G (+) neutr&#xF3;filos tuvieron la mayor proporci&#xF3;n de par&#xE1;sitos intracelulares 6 a 24 h despu&#xE9;s de la inoculaci&#xF3;n, mientras que los macr&#xF3;fagos d&#xE9;rmicos se encontraba la mayor&#xED;a de los par&#xE1;sitos intracelulares despu&#xE9;s de 2 a 7 d&#xED;as. Estas observaciones fueron validadas con el microscopio. Las dosis bajas de anticuerpos transitoriamente agotado los ratones de los neutr&#xF3;filos, dejando a otras c&#xE9;lulas intactas. Los resultados combinados de im&#xE1;genes in vivo, citometr&#xED;a de flujo, y la PCR cuantitativa mostr&#xF3; que el agotamiento de los neutr&#xF3;filos se desaceler&#xF3; la liquidaci&#xF3;n de promastigotes extracelulares (luciferasa-positivo) durante las primeras 24 horas despu&#xE9;s de la inoculaci&#xF3;n sin embargo, disminuy&#xF3; el n&#xFA;mero de leucocitos que contienen par&#xE1;sitos intracelulares (mCherry-positivo). A partir del 3 en adelante d&#xED;a, el total de L. infantum chagasi-que contiene leucocitos d&#xE9;rmicos y el total de L. infantum chagasi par&#xE1;sitos en el drenaje de los ganglios linf&#xE1;ticos fueron similares en ambos grupos. Sin embargo, una segunda ola de L. infantum chagasi que contienen los neutr&#xF3;filos se produjo 7 d&#xED;as despu&#xE9;s de la inoculaci&#xF3;n del par&#xE1;sito en los neutr&#xF3;filos agotamiento de los ratones, lo que corresponde a la &#xE9;poca de recuperaci&#xF3;n de los neutr&#xF3;filos. Por lo tanto, los neutr&#xF3;filos fueron reclutados a la dermis hasta tarde despu&#xE9;s de la inoculaci&#xF3;n, y L. infantum chagasi trafica a trav&#xE9;s de los neutr&#xF3;filos, tanto en los neutr&#xF3;filos empobrecido y los ratones de control, aunque con diferente cin&#xE9;tica. El reclutamiento de neutr&#xF3;filos y de residencia transitoria del par&#xE1;sito en los neutr&#xF3;filos pueden jugar un papel en formas no ulcerativas de la leishmaniasis.

Laurie Love-Homan

Department of Internal Medicine

University of Iowa

In vivo Imaging of Transgenic Leishmania Parasites in a Live Host

Laurie Love-Homan

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Department of Internal Medicine

University of Iowa

In vivo Imaging of Transgenic Leishmania Parasites in a Live Host

Department of Internal Medicine