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Modified Mouse Embryonic Stem Cell based Assay for Quantifying  Cardiogenic Induction Efficiency

Differentiation of pluripotent stem cells is tightly controlled by temporal and spatial regulation of multiple key signaling pathways.  One of the hurdles ...

Vanderbilt University School of Medicine

&#x7B2C; II &#x7C7B;&#x679C;&#x7CD6;&#x4E8C;&#x78F7;&#x9178;&#x919B;&#x7F29;&#x9176;&#x7684;&#x8010;&#x9AD8;&#x6E29;&#x53D8;&#x79CD;&#x5DF2;&#x9694;&#x79BB;&#x540E;&#x56DB;&#x8F6E;&#x5B9A;&#x5411;&#x8FDB;&#x5316;&#x4F7F;&#x7528;&#x4ECE;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x548C;&#x7231;&#x5FB7;&#x534E; ictaluri fda &#x57FA;&#x56E0;&#x7684; dna&#x3002;&#x4ECE;&#x8FDB;&#x5316;&#x7684;&#x6240;&#x6709;&#x56DB;&#x4EE3;&#x53D8;&#x79CD;&#x5DF2;&#x51C0;&#x5316;&#x548C;&#x7279;&#x70B9;&#x3002;&#x53D8;&#x4F53;&#x5728;&#x5BA4;&#x6E29;&#x663E;&#x793A;&#x589E;&#x52A0;&#x70ED;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#x4E0E;&#x50AC;&#x5316;&#x529F;&#x80FD;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x4E22;&#x5931;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9; 50%&#x7684;&#x521D;&#x59CB;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x662F;&#x4E22;&#x5931;&#x540E; 10 &#x5206;&#x949F; &#xFF08;T50&#xFF09; &#x7684;&#x6700;&#x7A33;&#x5B9A;&#x7684;&#x53D8;&#x4F53;&#xFF0C;4 43 D 6&#x3001; &#x5B75;&#x5316;&#x6E29;&#x5EA6;&#x589E;&#x52A0;&#x4E86; 11-12 &#x6444;&#x6C0F;&#x5EA6;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x7684;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x9176;&#x548C;&#x6D3B;&#x52A8;&#x5728; 53 &#x5EA6; C &#x7684;&#x534A;&#x8870;&#x671F;&#x589E;&#x52A0;&#x7EA6; 190-fold&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x5907;&#x9009;&#x6848;&#x6587; 4 43 D 6 &#x663E;&#x793A;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#x4E0E;&#x6709;&#x673A;&#x6EB6;&#x5242;&#x7684;&#x5F85;&#x9047;&#x3002;&#x8FDB;&#x5316;&#x53D8;&#x4F53; DNA &#x6D4B;&#x5E8F;&#x5DF2;&#x786E;&#x5B9A;&#xFF0C;&#x5B9E;&#x884C;&#x4E86;&#x548C;&#x8BA8;&#x8BBA;&#x589E;&#x52A0;&#x70ED;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x4E86;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x57FA;&#x56E0;&#x7A81;&#x53D8;&#x3002;

&#x8010;&#x9AD8;&#x6E29; variant &#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x679C;&#x7CD6;&#x4E8C;&#x78F7;&#x9178;&#x919B;&#x7F29;&#x9176;&#x5B9A;&#x5411;&#x8FDB;&#x5316;&#x7684;&#x5EFA;&#x9020;&#x8FD8;&#x663E;&#x793A;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x7A33;&#x5B9A;&#x5728;&#x6709;&#x673A;&#x6EB6;&#x5242;&#x4E2D;&#x3002;

Thermostable variants of the Class II fructose bisphosphate aldolase have been isolated following four rounds of directed evolution using DNA shuffling of the fda genes from Escherichia coli and Edwardsiella ictaluri. Variants from all four generations of evolution have been purified and characterized. The variants show increased thermostability with no loss of catalytic function at room temperature. The temperature at which 50% of the initial enzyme activity is lost after incubation for 10 min (T50) of the most stable variant, 4-43D6, is increased by 11-12 degrees C over the wild-type enzymes and the half-life of activity at 53 degrees C is increased approximately 190-fold. In addition, variant 4-43D6 shows increased stability to treatment with organic solvents. DNA sequencing of the evolved variants has identified the mutations which have been introduced and which lead to increased thermostability, and the role of the mutations introduced is discussed.

A thermostable variant of fructose bisphosphate aldolase constructed by directed evolution also shows increased stability in organic solvents.

Variantes thermostables de l&#39;aldolase de bisphosphate de fructose de classe II ont &eacute;t&eacute; isol&eacute;s apr&egrave;s quatre s&eacute;ries d&#39;&eacute;volution dirig&eacute;e &agrave; l&#39;aide de l&#39;ADN tra&icirc;nant des g&egrave;nes de la fda d&#39;Escherichia coli et Edwardsiella ictaluri. Variantes de tous les quatre g&eacute;n&eacute;rations d&#39;&eacute;volution ont &eacute;t&eacute; purifi&eacute;es et caract&eacute;ris&eacute;es. Les variantes Voir la thermostabilit&eacute; accrue sans perte de fonction catalytique &agrave; la temp&eacute;rature ambiante. La temp&eacute;rature &agrave; laquelle 50 % de l&#39;activit&eacute; enzymatique initiale est perdue apr&egrave;s une incubation de 10 min (T50) de la variante plus stable, 4-43 D 6, est augment&eacute;e de 11-12 degr&eacute;s C, les enzymes de type sauvage et augmente la demi-vie de l&#39;activit&eacute; &agrave; 53 degr&eacute;s C environ fractionation. En outre, variante 4-43 D 6 montre une stabilit&eacute; accrue au traitement par des solvants organiques. S&eacute;quen&ccedil;age de l&#39;ADN des variantes &eacute;volu&eacute;es a identifi&eacute; les mutations qui ont &eacute;t&eacute; introduites et qui avait d&eacute;bouch&eacute; sur la stabilit&eacute; thermique accrue et le r&ocirc;le des mutations introduites est discut&eacute;e.

Une variante thermostable de l&#39;aldolase de bisphosphate de fructose construit par &eacute;volution dirig&eacute;e montre &eacute;galement une plus grande stabilit&eacute; dans les solvants organiques.

Thermostabile Variante Fructosebisphosphat-Aldolase aus der gerichteten Evolution ausgebildet zeigt auch eine erh&#xF6;hte Stabilit&#xE4;t in organischen L&#xF6;sungsmitteln.

Termostabile varianti di Fruttosio-bifosfato aldolasi bisfosfato del fruttosio classe II sono stati isolati dopo quattro giri di evoluzione diretta utilizzando DNA rimescolamento dei geni fda da Escherichia coli ed Edwardsiella ictaluri. Varianti da tutte le quattro generazioni di evoluzione sono stati purificati e caratterizzate. Le varianti mostrano maggiore termostabilit&agrave; senza perdita di funzione catalitica a temperatura ambiente. La temperatura alla quale il 50% dell&#39;attivit&agrave; enzimatica iniziale &egrave; perso dopo incubazione per 10 min (T50) della variante pi&ugrave; stabile, 4-43 D 6, &egrave; aumentata di 11-12 gradi sopra gli enzimi wild-type e l&#39;emivita della attivit&agrave; a 53 gradi C &egrave; aumentato di circa 190-fold. Inoltre, variante 4-43 D 6 mostra maggiore stabilit&agrave; al trattamento con solventi organici. Sequenziamento del DNA delle varianti evolute ha identificato le mutazioni che sono state introdotte e che conducono a termostabilit&agrave; aumentata e il ruolo delle mutazioni introdotte &egrave; discusso.

Una variante dell&#39;aldolasi bisfosfato fruttosio costruito dall&#39;evoluzione diretta termostabile Mostra anche maggiore stabilit&agrave; in solventi organici.

&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9; II &#x679C;&#x7CD6;&#x30D3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x30A2;&#x30EB;&#x30C9;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x8010;&#x71B1;&#x6027;&#x306E;&#x4E9C;&#x7A2E;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x3068;&#x611B;&#x5A9B; ictaluri &#x304B;&#x3089; fda &#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E; DNA &#x3092;&#x30B7;&#x30E3;&#x30C3;&#x30D5;&#x30EB;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x9032;&#x5316;&#x306E; 4 &#x3064;&#x306E;&#x30E9;&#x30A6;&#x30F3;&#x30C9;&#x6B21;&#x5B64;&#x7ACB;&#x3057;&#x3066;&#x304D;&#x305F;&#x3002;&#x9032;&#x5316;&#x306E;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E; 4 &#x3064;&#x306E;&#x4E16;&#x4EE3;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x4E9C;&#x7A2E;&#x304C;&#x7CBE;&#x88FD;&#x3057;&#x3001;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E9C;&#x7A2E;&#x5897;&#x52A0;&#x8010;&#x71B1;&#x6027;&#x89E6;&#x5A92;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x306A;&#x3057;&#x3067;&#x5BA4;&#x6E29;&#x3067;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x521D;&#x671F;&#x306E;&#x9175;&#x7D20;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E; 50% &#x306E;&#x6700;&#x3082;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x30D0;&#x30EA;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C8;&#x3001;4-43 D 6&#x3001;10 &#x5206;&#x9593; (T50) &#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30E5;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x5F8C;&#x5931;&#x308F;&#x308C;&#x308B;&#x6E29;&#x5EA6; 11 12 &#x5EA6; C &#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x9175;&#x7D20;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x3001;53 &#x2103; &#x3067;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306E;&#x534A;&#x6E1B;&#x671F;&#x304C;&#x7D04; 190-fold &#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x6709;&#x6A5F;&#x6EB6;&#x5264;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x6CBB;&#x7642;&#x306B;&#x30D0;&#x30EA;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E; 4-43 D 6 &#x30B7;&#x30E7;&#x30FC;&#x9AD8;&#x3081;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x3002;&#x9032;&#x5316;&#x3057;&#x305F;&#x4E9C;&#x7A2E;&#x306E; DNA &#x306E;&#x914D;&#x5217;&#x304C;&#x5C0E;&#x5165;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x306F;&#x5897;&#x52A0;&#x306E;&#x8010;&#x71B1;&#x6027;&#x3068;&#x3082;&#x305F;&#x3089;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x8B70;&#x8AD6;&#x3057;&#x305F;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x3092;&#x7279;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x9032;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x69CB;&#x7BC9;&#x3057;&#x305F;&#x679C;&#x7CD6;&#x30D3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x30A2;&#x30EB;&#x30C9;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x8010;&#x71B1;&#x6027;&#x30D0;&#x30EA;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C8;&#x3082;&#x6709;&#x6A5F;&#x6EB6;&#x5A92;&#x4E2D;&#x3067;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x306E;&#x5411;&#x4E0A;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xD074;&#xB798;&#xC2A4; II&#xACFC; &#xB2F9; bisphosphate aldolase&#xC758; &#xB0B4; &#xBCC0;&#xC885; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0; &#xBC0F; Edwardsiella ictaluri&#xC5D0;&#xC11C; fda &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; DNA &#xB354;&#xBBF8;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC9C1;&#xC811;&#xB41C; &#xC9C4;&#xD654;&#xC758; 4 &#xB77C;&#xC6B4;&#xB4DC;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xACA9;&#xB9AC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC9C4;&#xD654;&#xC758; &#xBAA8;&#xB4E0; 4 &#xC138;&#xB300;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCC0;&#xC885; &#xC815;&#xD654; &#xB418;&#xC5B4; &#xC788;&#xACE0; &#xD2B9;&#xC9D5;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBCC0;&#xD615; &#xC0C1; &#xC628;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCD09;&#xB9E4; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC190;&#xC2E4; &#xC5C6;&#xC774; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xB0B4;&#xC5F4;&#xC131;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC628;&#xB3C4;&#xB294; &#xCD08;&#xAE30; &#xD6A8;&#xC18C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; 50%&#xB294; &#xC190;&#xC2E4; 10 &#xBD84; (T50) &#xAC00;&#xC7A5; &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xBCC0;&#xD615; 4-43 D 6, &#xBD80; &#xD654; &#xD6C4; 11-12&#xB3C4; C &#xC57C;&#xC0DD; &#xD615; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC774;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558; &#xACE0; &#xD65C;&#xB3D9; 53&#xB3C4; c&#xC758; &#xBC18;&#xAC10;&#xAE30;&#xB294; &#xC57D; 190-fold &#xC99D;&#xAC00;. &#xB610;&#xD55C;, &#xBCC0;&#xD615; 4-43 D 6 &#xC1FC; &#xC99D;&#xAC00; &#xC548;&#xC815;&#xC131; &#xC720;&#xAE30; &#xC6A9; &#xB9E4;&#xC640; &#xCE58;&#xB8CC;. DNA &#xC2DC;&#xD000;&#xC2F1; &#xC9C4;&#xD654; &#xBCC0;&#xC885;&#xC758; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xB3C4;&#xC785; &#xD558; &#xACE0; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xB0B4;&#xC5F4;&#xC131;&#xC744; &#xB3C4;&#xC785; &#xD558;&#xB294; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xB9AC;&#xB4DC; &#xB17C;&#xC758; &#xD655;&#xC778; &#xD588;&#xB2E4;.

&#xB0B4;&#xACFC; &#xB2F9; bisphosphate aldolase &#xAC10;&#xB3C5;&#xB41C; &#xC9C4;&#xD654;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC0DD;&#xC131; &#xB41C; &#xBCC0;&#xC885; &#xB610;&#xD55C; &#xC720;&#xAE30; &#xC6A9; &#xC81C;&#xC5D0; &#xC99D;&#xAC00; &#xD55C; &#xC548;&#xC815;&#xC131;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Variantes termoestables de la aldolasa de clase II fructosa bifosfato han aislado tras cuatro rondas de evoluci&oacute;n dirigida utilizando ADN arrastrando los pies de los genes de la fda de Escherichia coli y Edwardsiella ictaluri. Variantes de todas las cuatro generaciones de la evoluci&oacute;n han sido purificadas y caracterizado. Las variantes muestran mayor termoestabilidad sin p&eacute;rdida de la funci&oacute;n catal&iacute;tica a temperatura ambiente. Se incrementa la temperatura en que el 50% de la actividad enzim&aacute;tica inicial se pierde despu&eacute;s de la incubaci&oacute;n durante 10 min (T50) de la variante m&aacute;s estable, 4-43 D 6, 11-12 grados C sobre las enzimas de tipo salvaje y aumenta el per&iacute;odo de actividad a 53 grados C aproximadamente 190-fold. Adem&aacute;s, variante 4-43 D 6 muestra mayor estabilidad al tratamiento con disolventes org&aacute;nicos. Secuencia de la DNA de las variantes evolucionadas ha identificado las mutaciones que se han introducido y que conducen a la termoestabilidad creciente y el papel de las mutaciones introducido se discute.

Una variante termoestable de aldolasa de bifosfato de fructosa construido por evoluci&oacute;n dirigida tambi&eacute;n muestra mayor estabilidad en solventes org&aacute;nicos.

&#x6700;&#x5E38;&#x89C1;&#x7684;&#x553E;&#x6DB2;&#x9178;&#xFF0C;N acetylneuraminic &#x9178;&#x3001; &#x553E;&#x6DB2;&#x9178;&#x94FE;&#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7C98;&#x9644;&#x5206;&#x5B50;&#x4EE5;&#x53CA;&#x5BF9; neuroinvasive &#x7EC6;&#x83CC;&#x3001; &#x5927;&#x80A0;&#x57C3;&#x5E0C;&#x6C0F;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC; K1&#x3001; &#x8111;&#x819C;&#x708E;&#x5948;&#x745F;&#x6C0F;&#x83CC;&#x835A;&#x819C;&#x553E;&#x6DB2;&#x9178;&#x662F;&#x91CD;&#x590D;&#x5355;&#x4F4D;&#x3002;&#x7A0D;&#x6709;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x9014;&#x5F84;&#xFF0C;&#x5728;&#x52A8;&#x7269;&#x548C;&#x7EC6;&#x83CC;&#x53D1;&#x751F;&#x553E;&#x6DB2;&#x9178;&#x5408;&#x6210;&#x548C;&#x805A;&#x5408;&#x3002;N Acetylneuraminic &#x9178; (NeuNAc) &#x662F;&#x7531; NeuNAc &#x5408;&#x9176;&#x7EC6;&#x83CC;&#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x70EF;&#x548C; N acetylmannosamine &#x51B7;&#x51DD;&#x5408;&#x6210;&#x7684;&#x3002;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x540C;&#x7CFB;&#x7269; N acetylneuraminic &#x9178;-9-&#x78F7;&#x9178; (NeuNAc-9-P) &#x5408;&#x4F7F;&#x7528; N-acetylmannosamine-6-&#x78F7;&#x9178;&#x5728;&#x7F29;&#x5408;&#x53CD;&#x5E94;&#x751F;&#x6210; NeuNAc-9-&#x4F53;&#x80B2;&#x4E24;&#x5B50;&#x7684;&#x553E;&#x6DB2;&#x9178;&#x5408;&#x9176;&#x65CF;&#x62E5;&#x6709; N &#x672B;&#x7AEF;&#x78F7;&#x9178;&#x4E19;&#x7CD6;&#x5F02;&#x6784;&#x9176;&#x6876;&#x57DF;&#x548C; C &#x7EC8;&#x7AEF;&#x6297;&#x51BB;&#x86CB;&#x767D;&#x57DF;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x3001; &#x8868;&#x8FBE;&#x3001; &#x7EAF;&#x5316;&#x53CA;&#x8868;&#x5F81;&#x4EBA;&#x7C7B; NeuNAc-9-P &#x5408;&#x6210;&#x9176;&#x548C;&#x5948;&#x745F; NeuNAc &#x5408;&#x9176;&#x7684;&#x514B;&#x9686;&#x3002;&#x7EAF;&#x5316;&#x7684;&#x9176;&#x7684;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#x548C;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x5BF9; ph &#x503C;&#x548C;&#x6E29;&#x5EA6;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x8BC4;&#x4EF7;&#x3002;&#x9176;&#x53CD;&#x5E94;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x548C;&#x521D;&#x6B65;&#x8BF1;&#x53D8;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x63ED;&#x793A;&#x4E86; C &#x7EC8;&#x7AEF;&#x6297;&#x51BB;&#x86CB;&#x767D;&#x57DF;&#x548C;&#x4E00;&#x4E2A;&#x4FDD;&#x5B88;&#x7684;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#x7684;&#x9176;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x3002;

&#x514B;&#x9686;&#x3001; &#x8868;&#x8FBE;&#x53CA;&#x5176;&#x8868;&#x5F81;&#x7684;&#x553E;&#x6DB2;&#x9178;&#x5408;&#x9176;&#x3002;

The most commonly occurring sialic acid, N-acetylneuraminic acid, is the repeating unit in polysialic acid chain of human neuronal cell adhesion molecule as well as in capsular polysialic acid of neuroinvasive bacteria, Escherichia coli K1 and Neisseria meningitidis. Sialic acid synthesis and polymerization occur in slightly different pathways in animals and bacteria. N-Acetylneuraminic acid (NeuNAc) is synthesized by the condensation of phosphoenolpyruvate and N-acetylmannosamine by NeuNAc synthase in bacteria. The mammalian homologue N-acetylneuraminic acid-9-phosphate (NeuNAc-9-P) synthase uses N-acetylmannosamine-6-phosphate in the condensation reaction to produce NeuNAc-9-P. Both subfamilies of sialic acid synthases possess N-terminal triosephosphate isomerase barrel domain and C-terminal antifreeze protein domain. We report cloning of the genes, expression, purification, and characterization of human NeuNAc-9-P synthase and N. meningitidis NeuNAc synthase. Stability of the purified enzymes and effects of pH and temperature on their activities were evaluated. Enzyme kinetics and preliminary mutagenesis experiments reveal the importance of C-terminal antifreeze protein domain and a conserved cysteine residue for the enzyme activities.

Cloning, expression, and characterization of sialic acid synthases.

Le plus fr&eacute;quents l&#39;acide sialique, acide N-ac&eacute;tylneuraminique, est l&#39;unit&eacute; de base dans la cha&icirc;ne d&#39;acide polysialique de la mol&eacute;cule d&#39;adh&eacute;sion cellulaire neuronale humaine ainsi que dans l&#39;acide polysialique capsulaire de neuro bact&eacute;rie, Escherichia coli K1 et Neisseria meningitidis. La polym&eacute;risation et la synth&egrave;se de l&#39;acide sialique se produisent dans des voies l&eacute;g&egrave;rement diff&eacute;rents chez les animaux et les bact&eacute;ries. Acide N-ac&eacute;tylneuraminique (NeuNAc) est synth&eacute;tis&eacute; par condensation du phospho&eacute;nolpyruvate et N-ac&eacute;tylmannosamine par la NeuNAc synthase chez les bact&eacute;ries. L&#39;homologue mammalien N-ac&eacute;tylneuraminique acide-9-phosphate (P-9-NeuNAc) synthase utilise N-ac&eacute;tylmannosamine-6-phosphate dans la r&eacute;action de condensation pour produire des NeuNAc-9-p. Les deux sous-familles d&#39;acide sialique synthases poss&egrave;dent N-terminal triosephosphate isom&eacute;rase baril domaine et le domaine C-terminal de prot&eacute;ine antigel. Les auteurs rapportent le clonage des g&egrave;nes, expression, purification et caract&eacute;risation des humain synthase NeuNAc-9-P et N. meningitidis NeuNAc synthase. Stabilit&eacute; des enzymes purifi&eacute;es et les effets du pH et de temp&eacute;rature sur leurs activit&eacute;s ont &eacute;t&eacute; &eacute;valu&eacute;s. Cin&eacute;tique enzymatique et des exp&eacute;riences de mutagen&egrave;se pr&eacute;liminaires r&eacute;v&egrave;lent l&#39;importance du domaine C-terminal de prot&eacute;ine antigel et un r&eacute;sidu cyst&eacute;ine conserv&eacute;s pour les activit&eacute;s enzymatiques.

Clonage, expression et caract&eacute;risation de l&#39;acide sialique synthases.

Die am h&auml;ufigsten vorkommende Sialins&auml;ure, N-Acetylneuraminic S&auml;ure, ist die wiederholte Einheit in SIAL saure Kette von menschlichen neuronalen Zelladh&auml;sionsmolek&uuml;l ebenso wie in Kapselspannring SIAL S&auml;ure von seit-Bakterien, Escherichia coli K1 und Neisseria Meningitidis. Sialins&auml;ure-Synthese und Polymerisation auftreten in leicht unterschiedlichen wegen Tieren und Bakterien. N-Acetylneuraminic S&auml;ure (NeuNAc) wird durch die Kondensation von Phosphoenolpyruvat und N-Acetylmannosamine indem NeuNAc-Synthase in Bakterien synthetisiert. Die S&auml;ugetier-Homolog N-Acetylneuraminic S&auml;ure-9-Phosphat (NeuNAc-9-P)-Synthase verwendet N-Acetylmannosamine-6-Phosphat in die Kondensation-Reaktion um zu produzieren NeuNAc-9-P. Beide Unterfamilien der Sialins&auml;ure-Synthasen besitzen N-terminalen Triosephosphat-Isomerase Fass und C-terminalen Frostschutzmittel Proteindom&auml;ne. Wir berichten, Klonen von der Gene, Ausdruck, Reinigung und Charakterisierung von menschlichen NeuNAc-9-P-Synthase und N. Meningitidis-NeuNAc-Synthase. Stabilit&auml;t der gereinigten Enzyme und Auswirkungen von pH-Wert und Temperatur auf ihre Aktivit&auml;ten wurden ausgewertet. Enzym-Kinetik und vorl&auml;ufige Mutagenese Experimente zeigen die Bedeutung der C-terminalen Frostschutzmittel Proteindom&auml;ne und konservierten Cystein R&uuml;ckst&auml;nde f&uuml;r die Enzymaktivit&auml;ten.

Klonen, Ausdruck und Charakterisierung von Sialins&auml;ure-Synthasen.

L&#39;acido sialico che si verificano pi&ugrave; comunemente, acido N-acetilneuraminico, &egrave; l&#39;unit&agrave; di ripetizione nella catena di acido polisialico della molecola di adesione delle cellule neuronali umane cos&igrave; come acido polisialico capsulare neuroinvasive batteri, Escherichia coli K1 e Neisseria meningitidis. Polimerizzazione e la sintesi di acido sialico si verificano in percorsi leggermente diversi animali e batteri. Acido N-acetilneuraminico (NeuNAc) &egrave; sintetizzato dalla condensazione di fosfoenolpiruvato e N-acetylmannosamine da NeuNAc synthase in batteri. L&#39;omologo mammifero N-acetilneuraminico acido-9-fosfato sintasi (P-NeuNAc-9) utilizza N-acetylmannosamine-6-fosfato nella reazione di condensazione per la produzione di NeuNAc-9-P. Due sottofamiglie di acido sialico synthases possiedono dominio di canna isomerasi di triosephosphate del N-terminale e C-terminale antigelo proteina dominio. Riportiamo la clonazione di geni, espressione, purificazione e caratterizzazione di synthase umano di NeuNAc-9-P e N. meningitidis NeuNAc sintasi. Sono stati valutati la stabilit&agrave; degli enzimi purificati e gli effetti del pH e della temperatura sulla loro attivit&agrave;. Cinetica enzimatica ed esperimenti di mutagenesi preliminari rivelano l&#39;importanza del dominio C-terminale antigelo della proteina e un residuo di cisteina conservato per l&#39;attivit&agrave; dell&#39;enzima.

Clonazione, espressione e caratterizzazione di acido sialico synthases.

&#x6700;&#x3082;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306B;&#x767A;&#x751F;&#x3059;&#x308B;&#x30B7;&#x30A2;&#x30EB;&#x9178; n-&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x30CE;&#x30A4;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;&#x7E70;&#x308A;&#x8FD4;&#x3057;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8; &#x30DD;&#x30EA;&#x30B7;&#x30A2;&#x30EB;&#x9178;&#x30C1;&#x30A7;&#x30FC;&#x30F3;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x63A5;&#x7740;&#x5206;&#x5B50;&#x306B;&#x3082;&#x306A;&#x308B;&#x795E;&#x7D4C;&#x4FB5;&#x5165;&#x578B;&#x7D30;&#x83CC;&#x3001;&#x5927;&#x8178;&#x83CC; K1&#x3001;&#x9AC4;&#x819C;&#x708E;&#x83CC;&#x306E;&#x88AB;&#x819C;&#x30DD;&#x30EA;&#x30B7;&#x30A2;&#x30EB;&#x9178;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30B7;&#x30A2;&#x30EB;&#x9178;&#x306E;&#x5408;&#x6210;&#x3068;&#x91CD;&#x5408;&#x52D5;&#x7269;&#x3068;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x308F;&#x305A;&#x304B;&#x306B;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3067;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;N-&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x30CE;&#x30A4;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178; (NeuNAc) &#x306E;&#x30DB;&#x30B9;&#x30DB;&#x30A8;&#x30CE;&#x30FC;&#x30EB;&#x30D4;&#x30EB;&#x30D3;&#x30F3;&#x9178;&#x3068; N acetylmannosamine &#x51DD;&#x7E2E;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7D30;&#x83CC;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; NeuNAc &#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5408;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306E;&#x76F8;&#x540C; n-&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x30CE;&#x30A4;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;-9-&#x30EA;&#x30F3;&#x9178; &#xFF08;NeuNAc 9 P) &#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20; N-acetylmannosamine-6-&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x7E2E;&#x5408;&#x53CD;&#x5FDC;&#x3067; NeuNAc-9-P. &#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B7;&#x30A2;&#x30EB;&#x9178;&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x4E9C;&#x79D1;&#x3067;&#x306F; N &#x672B;&#x7AEF; triosephosphate &#x30A4;&#x30BD;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC; &#x30D0;&#x30EC;&#x30EB; &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3068; C &#x672B;&#x7AEF;&#x4E0D;&#x51CD;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x6240;&#x6709;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3001;&#x767A;&#x73FE;&#x3001;&#x7CBE;&#x88FD;&#x53CA;&#x3073;&#x6027;&#x8CEA;&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20; NeuNAc 9 P &#x4EBA;&#x9593;&#x304A;&#x3088;&#x3073; N. &#x9AC4;&#x819C;&#x708E;&#x83CC; NeuNAc &#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7CBE;&#x88FD;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x3068;&#x5F7C;&#x3089;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306B;&#x53CA;&#x307C;&#x3059; pH &#x3068;&#x6E29;&#x5EA6;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x9175;&#x7D20;&#x53CD;&#x5FDC;&#x901F;&#x5EA6;&#x8AD6;&#x3068;&#x4E88;&#x5099;&#x7684;&#x5909;&#x7570;&#x5B9F;&#x9A13; C &#x30BF;&#x30FC;&#x30DF;&#x30CA;&#x30EB;&#x4E0D;&#x51CD;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3068;&#x9175;&#x7D20;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x4F5C;&#x6210;&#x3001;&#x5F0F;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30B7;&#x30A2;&#x30EB;&#x9178;&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x7279;&#x6027;&#x3002;

&#xAC00;&#xC7A5; &#xBE48;&#xB3C4;&#xAC00; sialic &#xC0B0;, N-acetylneuraminic &#xC0B0; polysialic &#xC0B0; &#xCCB4;&#xC778; neuroinvasive &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;, &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0; K1 &#xBC0F; Neisseria meningitidis capsular polysialic &#xC0B0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC; &#xC811;&#xCC29; &#xBD84;&#xC790;&#xC758; &#xBC18;&#xBCF5; &#xB2E8;&#xC704; &#xC774;&#xB2E4;. Sialic &#xC0B0; &#xD569;&#xC131; &#xBC0F; &#xC911; &#xD569; &#xB3D9;&#xBB3C;&#xACFC; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xC5D0; &#xC57D;&#xAC04; &#xB2E4;&#xB978; &#xACBD;&#xB85C;&#xC5D0; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. N Acetylneuraminic &#xC0B0; (NeuNAc) NeuNAc synthase &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; phosphoenolpyruvate N acetylmannosamine&#xC758; &#xC751;&#xCD95;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD569;&#xC131; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; homologue N acetylneuraminic &#xC0B0; 9 &#xC778;&#xC0B0; &#xC5FC; (P-NeuNAc-9) synthase &#xC751;&#xCD95; &#xBC18;&#xC751;&#xC5D0; N-acetylmannosamine-6-&#xC778;&#xC0B0; &#xC5FC;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC0DD;&#xC0B0; NeuNAc 9. Sialic &#xC0B0; synthases&#xC758; &#xB450; &#xC11C;&#xBE0C;&#xD328;&#xBC00;&#xB9AC;&#xAC00; N &#xB9E8;&#xB05D; triosephosphate isomerase &#xBC30;&#xB7F4; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xBC0F; C &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xBD80;&#xB3D9; &#xC561; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xC18C;&#xC720;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790;, &#xD45C;&#xD604;, &#xC815;&#xD654;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; NeuNAc-9-P synthase&#xC640; &#xBD81; &#xC544; &#xC77C; meningitidis NeuNAc synthase&#xC758; &#xD2B9;&#xC131;&#xD654;&#xC758; &#xBCF5;&#xC81C; &#xBCF4;&#xACE0;&#xC11C;. &#xC815;&#xC81C; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; &#xC548;&#xC815;&#xC131;&#xACFC; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xC628;&#xB3C4; Ph&#xC758; &#xC601;&#xD5A5; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD6A8;&#xC18C; &#xBC18;&#xC751; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB860; &#xBC0F; &#xC608;&#xBE44; mutagenesis &#xC2E4;&#xD5D8; &#xACF5;&#xAC1C; C &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xBD80;&#xB3D9; &#xC561; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xBC0F; &#xD6A8;&#xC18C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD14C;&#xC778; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC758; &#xC911;&#xC694;&#xC131;.

&#xBCF5;&#xC81C;, &#xD45C;&#xD604;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; sialic &#xC0B0; synthases&#xC758; &#xD2B9;&#xC131;.

El &aacute;cido si&aacute;lico frecuente, &aacute;cido N-acetilneuram&iacute;nico, es la unidad de repetici&oacute;n en la cadena de &aacute;cido de polysialic de la mol&eacute;cula de adhesi&oacute;n celular neuronal humana as&iacute; como en &aacute;cido polysialic capsular de neuroinvasiva bacterias y Escherichia coli K1, Neisseria meningitidis. Polimerizaci&oacute;n y s&iacute;ntesis de &aacute;cido si&aacute;lico ocurren en ligeramente distintas v&iacute;as en animales y bacterias. &Aacute;cido N-acetilneuram&iacute;nico (NeuNAc) es sintetizado por la condensaci&oacute;n de Fosfoenolpiruvato y N-acetilmanosamina por la NeuNAc sintasa en bacterias. El hom&oacute;logo mam&iacute;feros N-acetilneuram&iacute;nico &aacute;cido-9-fosfato (NeuNAc-9-P) sintasa utiliza N-acetilmanosamina-6-fosfato en la reacci&oacute;n de condensaci&oacute;n para producir NeuNAc-9-P. Ambas subfamilias de &aacute;cido si&aacute;lico Sintasas poseen dominio de barril N-terminal Triosa fosfato isomerasa y dominio c-terminal de la prote&iacute;na del anticongelante. Divulgamos la clonaci&oacute;n de los genes, expresi&oacute;n, purificaci&oacute;n y caracterizaci&oacute;n de humano NeuNAc-9-P sintasa y N. meningitidis NeuNAc sintasa. Se evaluaron los efectos de pH y temperatura sobre sus actividades y estabilidad de las enzimas purificadas. Cin&eacute;tica de la enzima y experimentos de mutag&eacute;nesis preliminares muestran la importancia del dominio c-terminal de la prote&iacute;na de anticongelante y un residuo de ciste&iacute;na conservado para las actividades de la enzima.

Clonaci&oacute;n, expresi&oacute;n y caracterizaci&oacute;n de &aacute;cido si&aacute;lico Sintasas.

&#x6700;&#x5E38;&#x51FA;&#x73B0;&#x553E;&#x6DB2;&#x9178; Neu5Ac (N acetylneuraminic acid) &#x548C;&#x5176; deaminated &#x7684;&#x7A97;&#x4F53;&#xFF0C;&#x51EF;&#x8FEA; (2-keto-3-deoxy-D-glycero-D-galacto-nonulosonic acid)&#xFF0C;&#x53C2;&#x4E0E;&#x8BB8;&#x591A;&#x751F;&#x7269;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x4EBA;&#x7C7B; Neu5Ac-9-P &#xFF08;Neu5Ac 9-&#x78F7;&#x9178;) &#x5408;&#x9176;&#x5177;&#x6709;&#x50AC;&#x5316;&#x5408;&#x6210;&#x7684; Neu5Ac-9-P &#x4E0D;&#x4EC5;&#x51EF;&#x8FEA;-9-P (&#x51EF;&#x8FEA; 9-&#x78F7;&#x9178;&#xFF09; &#x7684;&#x72EC;&#x7279;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x53CD;&#x5E94;&#x88AB;&#x50AC;&#x5316;&#x919B;&#x7F29;&#x5408;&#x7684; PEP (&#x78F7;&#x9178;&#x70EF;) &#x7CD6;&#x886C;&#x5E95;&#xFF0C;ManNAc-6-P (N acetylmannosamine 6-&#x78F7;&#x9178;) &#x6216;&#x4EBA;-6-P &#xFF08;&#x7518;&#x9732;&#x7CD6; 6-&#x78F7;&#x9178;) &#x673A;&#x5236;&#x3002;&#x9F20;&#x6807;&#x548C;&#x5047;&#x5B9A;&#x5927;&#x9F20; Neu5Ac-9-P &#x5408;&#xFF0C;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x663E;&#x793A;&#x51EF;&#x8FEA;-9-P &#x5408;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#xFF0C;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x5206;&#x4EAB;&#x9AD8;&#x5E8F;&#x5217;&#x6807;&#x8BC6; (&gt; 95%&#xFF09; &#x4E0E;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7684;&#x9176;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x7684;&#x5355;&#x4E2A;&#x7A81;&#x53D8;&#xFF0C;M42T&#xFF0C;&#x5728;&#x4EBA;&#x7C7B; Neu5Ac-9-P &#x5408;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5E9F;&#x9664;&#x51EF;&#x8FEA;-9-P &#x5408;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x5B8C;&#x5168;&#x65E0;&#x635F; Neu5Ac-9-P &#x5408;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;&#x9971;&#x548C;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B; Neu5Ac-9-P &#x5408;&#x9176; Met42 &#x663E;&#x793A;&#x6240;&#x6709;&#x9664;&#x4EAE;&#x6C28;&#x9178;&#x7684;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x66FF;&#x4EE3;&#x4FDD;&#x7559;&#x4EC5; Neu5Ac-9-P &#x5408;&#x9176;&#x5728;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x9176;&#x4E0E;&#x76F8;&#x5F53;&#x7684;&#x6C34;&#x5E73;&#x3002;M42L &#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x79CD;&#xFF0C;&#x50CF;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x9176;&#xFF0C;&#x663E;&#x793A;&#x989D;&#x5916;&#x7684;&#x51EF;&#x8FEA;-9-P &#x5408;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;&#x5728;&#x4EBA;&#x7C7B; Neu5Ac-9-P &#x5408;&#x6210;&#x9176;&#x7684;&#x540C;&#x6E90;&#x6027;&#x6A21;&#x578B;&#x4E2D;&#xFF0C;Met42 &#x662F;&#x4F4D;&#x4E8E;&#x7684; 22 A (1 A = 0.1 nm&#xFF09; &#x804C;&#x80FD;&#x8BA8;&#x8BBA;&#x7684;&#x57FA;&#x677F;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7AD9;&#x70B9;&#x548C;&#x8FD9;&#x9065;&#x8FDC;&#x6B8B;&#x7559;&#x5BF9;&#x9176;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;

2-Keto-3-deoxy-D-glycero-D-galacto-nonulosonic &#x9178; 9-&#x78F7;&#x9178;&#x5408;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B; N acetylneuraminic &#x9178; 9-&#x78F7;&#x9178;&#x5408;&#x6210;&#x9176;&#x7684;&#x5355;&#x4E2A;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684;&#x6D88;&#x9664;&#x3002;

The most commonly occurring sialic acid Neu5Ac (N-acetylneuraminic acid) and its deaminated form, KDN (2-keto-3-deoxy-D-glycero-D-galacto-nonulosonic acid), participate in many biological functions. The human Neu5Ac-9-P (Neu5Ac 9-phosphate) synthase has the unique ability to catalyse the synthesis of not only Neu5Ac-9-P but also KDN-9-P (KDN 9-phosphate). Both reactions are catalysed by the mechanism of aldol condensation of PEP (phosphoenolpyruvate) with sugar substrates, ManNAc-6-P (N-acetylmannosamine 6-phosphate) or Man-6-P (mannose 6-phosphate). Mouse and putative rat Neu5Ac-9-P synthases, however, do not show KDN-9-P synthase activity, despite sharing high sequence identity (>95%) with the human enzyme. Here, we demonstrate that a single mutation, M42T, in human Neu5Ac-9-P synthase can abolish the KDN-9-P synthase activity completely without compromising the Neu5Ac-9-P synthase activity. Saturation mutagenesis of Met42 of the human Neu5Ac-9-P synthase showed that the substitution with all amino acids except leucine retains only the Neu5Ac-9-P synthase activity at levels comparable with the wild-type enzyme. The M42L mutant, like the wild-type enzyme, showed the additional KDN-9-P synthase activity. In the homology model of human Neu5Ac-9-P synthase, Met42 is located 22 A (1 A=0.1 nm) away from the substrate-binding site and the impact of this distant residue on the enzyme functions is discussed.

Elimination of 2-keto-3-deoxy-D-glycero-D-galacto-nonulosonic acid 9-phosphate synthase activity from human N-acetylneuraminic acid 9-phosphate synthase by a single mutation.

Survenant le plus souvent Neu5Ac l&#39;acide sialique (acide N-ac&eacute;tylneuraminique) et sa forme d&eacute;samin&eacute;, KDN (acide 2-keto-3-deoxy-D-glycero-D-galacto-nonulosonic), participer &agrave; nombreuses fonctions biologiques. La synthase de Neu5Ac-9-P (Neu5Ac 9-phosphate) humaine a la capacit&eacute; unique de catalyser la synth&egrave;se non seulement 9-Neu5Ac-P, mais &eacute;galement KDN-9-P (KDN 9-phosphate). Les deux r&eacute;actions sont catalys&eacute;es par le m&eacute;canisme de la condensation aldolique de PEP (phospho&eacute;nolpyruvate) dont le substrat de sucre, ManNAc-6-P (N-ac&eacute;tylmannosamine-6-phosphate) ou Man-6-P (mannose-6-phosphate). Souris et rat putatif Neu5Ac-9-P synthases, cependant, ne montrent pas l&#39;activit&eacute; synthase KDN-9-P, bien qu&#39;ils partagent une identit&eacute; de s&eacute;quence &eacute;lev&eacute;e (&amp;gt; 95 %) avec l&#39;enzyme humaine. Ici, nous d&eacute;montrons qu&#39;une seule mutation, M42T, dans l&#39;humain Neu5Ac-9P synthase peut abolir l&#39;activit&eacute; synthase de KDN-9-P compl&egrave;tement sans compromettre l&#39;activit&eacute; de synthase de Neu5Ac-9-P. La mutagen&egrave;se saturation de Met42 humaine Neu5Ac-9P synthase d&#39;a montr&eacute; que la substitution avec tous les acides amin&eacute;s leucine conserve uniquement l&#39;activit&eacute; synthase Neu5Ac-9-P &agrave; des niveaux comparables avec l&#39;enzyme de type sauvage. Le mutant M42L, comme l&#39;enzyme de type sauvage, ont montr&eacute; l&#39;activit&eacute; suppl&eacute;mentaire de synthase KDN-9-P. Dans le mod&egrave;le d&#39;homologie de humain-9P-Neu5Ac synthase, Met42 est situ&eacute; 22 A (1 A = 0,1 nm) loin du site de liaison du substrat et l&#39;impact de ce r&eacute;sidu &eacute;loign&eacute; sur l&#39;enzyme fonctions est discut&eacute;e.

&Eacute;limination de l&#39;activit&eacute; de 2-keto-3-deoxy-D-glycero-D-galacto-nonulosonic acide 9-phosphate synthase de N-ac&eacute;tylneuraminique humaine acide 9-phosphate synthase par une seule mutation.

Die am h&auml;ufigsten vorkommenden Sialins&auml;ure Neu5Ac (N-Acetylneuraminic S&auml;ure) und seiner deaminated Form KDN (2-keto-3-deoxy-D-glycero-D-galacto-nonulosonic S&auml;ure), Teilnahme an vielen biologischen Funktionen. Die menschlichen Neu5Ac-9-P (Neu5Ac 9-Phosphat)-Synthase hat die einzigartige F&auml;higkeit, die Synthese von nicht nur Neu5Ac-9-P, sondern auch KDN-9-P (KDN 9-Phosphat) zu katalysieren. Beide Reaktionen sind durch den Mechanismus der Aldole Kondensation von PEP (Phosphoenolpyruvat) mit Zucker Substraten, ManNAc-6-P (N-Acetylmannosamine-6-Phosphat) oder Mann-6-P (Mannose-6-Phosphat) katalysiert. Maus und der Ratte Neu5Ac-9-P-Synthasen, jedoch zeigen nicht KDN-9-P-Synthase-Aktivit&auml;t, trotz hoher Sequenz Identit&auml;t Teilen (&gt; 95 %) mit dem menschlichen Enzym. Hier zeigen wir, dass eine einzelne Mutation, M42T, in menschlichen Neu5Ac-9-P-Synthase die KDN-9-P-Synthase-Aktivit&auml;t vollst&auml;ndig abschaffen kann, ohne Kompromisse bei die Neu5Ac-9-P-Synthase-Aktivit&auml;t. S&auml;ttigung Mutagenese von Met42 der menschlichen Neu5Ac-9-P-Synthase zeigte, dass die Substitution mit alle Aminos&auml;uren mit Ausnahme von Leucin nur die Neu5Ac-9-P-Synthase-Aktivit&auml;t auf Ebenen vergleichbar mit dem Wildtyp-Enzym beh&auml;lt. Die M42L-Mutant, wie die Wildtyp-Enzym, zeigte die zus&auml;tzliche KDN-9-P-Synthase-Aktivit&auml;t. Im Homologie-Modell der menschlichen Neu5Ac-9-P-Synthase ist Met42 befindet sich 22 A (1 A = 0,1 nm) Weg von der Substrat-Bindungsstelle und die Auswirkungen dieser fernen R&uuml;ckstand auf das Enzym wird Funktionen erl&auml;utert.

Beseitigung von 2-keto-3-deoxy-D-glycero-D-galacto-nonulosonic S&auml;ure 9-Phosphat-Synthase-Aktivit&auml;t von menschlichen N-Acetylneuraminic S&auml;ure 9-Phosphat-Synthase eine einzelne Mutation.

Che si verificano pi&ugrave; comunemente acido sialico Neu5Ac (acido N-acetilneuraminico) e la sua forma deaminato, KDN (acido 2-keto-3-deoxy-D-glycero-D-galacto-nonulosonic), partecipare a molte funzioni biologiche. La sintasi di P-Neu5Ac-9 (9 Neu5Ac-fosfato) umano ha la capacit&agrave; unica di catalizzare la sintesi di Neu5Ac-9-P, ma anche KDN-9-P (KDN 9-fosfato). Entrambe le reazioni sono catalizzate dal meccanismo di condensazione dell&#39;aldolo di PEP (fosfoenolpiruvato) con substrati di zucchero, ManNAc-6-P (N-acetylmannosamine-6-fosfato) o Man-6-P (mannosio 6-fosfato). Topo e ratto putativo synthases P-Neu5Ac-9, tuttavia, non mostrano attivit&agrave; sintasi KDN-9-P, nonostante la condivisione di identit&agrave; della sequenza elevata (&amp;gt; 95%) con l&#39;enzima umano. Qui, ci dimostrano che una singola mutazione, M42T, umana Neu5Ac-9-P sintasi pu&ograve; abolire l&#39;attivit&agrave; sintasi KDN-9-P completamente senza compromettere l&#39;attivit&agrave; di Neu5Ac-9-P sintasi. Mutagenesi di saturazione della Met42 umana Neu5Ac-9-P sintasi ha dimostrato che la sostituzione con tutti gli amminoacidi tranne leucina mantiene solo l&#39;attivit&agrave; di Neu5Ac-9-P synthase a livelli comparabili con l&#39;enzima wild-type. Il mutante M42L, come l&#39;enzima wild-type, ha mostrato l&#39;ulteriore attivit&agrave; sintasi KDN-9-P. Nel modello di omologia di synthase umano di Neu5Ac-9-P, Met42 &egrave; situato 22 A (1 A = 0,1 nm) lontano dal sito di legame substrato e l&#39;impatto di questo residuo distante sull&#39;enzima funzioni &egrave; discusso.

Eliminazione di 2-keto-3-deoxy-D-glycero-D-galacto-nonulosonic acido 9-fosfato sintasi attivit&agrave; da umano N-acetilneuraminico acido 9-fosfato sintasi da una singola mutazione.

&#x6700;&#x3082;&#x3088;&#x304F;&#x8D77;&#x3053;&#x308B;&#x30B7;&#x30A2;&#x30EB;&#x9178; Neu5Ac (n-&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x30CE;&#x30A4;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;&#xFF09; &#x3068;&#x305D;&#x306E; deaminated &#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x3001;KDN &#xFF08;2-keto-3-deoxy-D-glycero-D-galacto-nonulosonic &#x9178;&#xFF09;&#x3001;&#x53C2;&#x52A0;&#x3067;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3002;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E; Neu5Ac 9 P &#xFF08;Neu5Ac 9-&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#xFF09; &#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20; Neu5Ac 9 P &#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F; KDN 9 P &#xFF08;KDN 9-&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#xFF09; &#x306E;&#x5408;&#x6210;&#x3092;&#x89E6;&#x5A92;&#x3059;&#x308B;&#x72EC;&#x81EA;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x53CC;&#x65B9;&#x306E;&#x53CD;&#x5FDC;&#x306F;&#x7802;&#x7CD6;&#x57FA;&#x677F;&#x3001;ManNAc 6 P &#xFF08;N acetylmannosamine 6-&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#xFF09; &#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x7537; 6 P &#xFF08;&#x30DE;&#x30F3;&#x30CE;&#x30FC;&#x30B9; 6-&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#xFF09; &#x3068; PEP (&#x30DB;&#x30B9;&#x30DB;&#x30A8;&#x30CE;&#x30FC;&#x30EB;&#x30D4;&#x30EB;&#x30D3;&#x30F3;&#x9178;) &#x306E;&#x30A2;&#x30EB;&#x30C9;&#x30FC;&#x30EB;&#x7E2E;&#x5408;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x89E6;&#x5A92;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3068;&#x63A8;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8; Neu5Ac 9 P &#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;, &#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;KDN 9 P &#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x9AD8;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9; id &#x5171;&#x6709;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x306A;&#x3044; (&#x76EE; 95%) &#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x9175;&#x7D20;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20; Neu5Ac 9 P &#x4EBA;&#x9593;&#x3067;&#x3001;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x5909;&#x7570; M42T&#x3001;KDN 9 P &#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B; Neu5Ac 9 P &#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x640D;&#x306A;&#x3046;&#x3053;&#x3068;&#x306A;&#x304F;&#x304C;&#x5EC3;&#x6B62;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Met42 &#x4EBA;&#x9593;&#x306E; Neu5Ac 9 P &#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x98FD;&#x548C;&#x5909;&#x7570;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30ED;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x3092;&#x9664;&#x3044;&#x3066;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x7F6E;&#x63DB; Neu5Ac 9 P &#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x9175;&#x7D20;&#x3068;&#x540C;&#x7B49;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x306E;&#x307F;&#x3092;&#x4FDD;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;M42L &#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x8FFD;&#x52A0;&#x306E; KDN 9 P &#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4EBA;&#x9593; Neu5Ac 9 P &#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x30DB;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B8;&#x30FC; &#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3067;&#x306F;&#x3001;Met42 &#x306B;&#x3042;&#x308B; 22 A &#x3067;&#x3059; (1 A = 0.1 nm) &#x57FA;&#x8CEA;&#x7D50;&#x5408;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3068;&#x3053;&#x306E;&#x9060;&#x3044;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306F;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x304B;&#x3089;&#x96E2;&#x308C;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3067;&#x3059;&#x8AAC;&#x660E;&#x3002;

2-Keto-3-deoxy-D-glycero-D-galacto-nonulosonic &#x9178; 9-&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#x6D3B;&#x6027;&#x304B;&#x3089;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E; n-&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x30CE;&#x30A4;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178; 9-&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;&#x5358;&#x4E00;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x306E;&#x9664;&#x53BB;&#x3002;

&#xAC00;&#xC7A5; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xC0B0; &#xC131; sialic Neu5Ac (N acetylneuraminic &#xC0B0;) deaminated &#xD615;&#xD0DC;&#xC758; KDN (2-keto-3-deoxy-D-glycero-D-galacto-nonulosonic &#xC0B0;), &#xB9CE;&#xC740; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;&#xC801; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xCC38;&#xC5EC; &#xD558; &#xACE0;. &#xC778;&#xAC04;&#xC758; 9 Neu5Ac P (Neu5Ac 9-&#xC778;&#xC0B0; &#xC5FC;) synthase catalyse Neu5Ac-9-P &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xCF00;&#xC774;-9-P (KDN 9-&#xC778;&#xC0B0; &#xC5FC;)&#xC758; &#xD569;&#xC131;&#xC744; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; &#xB2A5;&#xB825;&#xC774; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB450; &#xBC18;&#xC751; &#xC124;&#xD0D5; &#xAE30;&#xD310;, ManNAc-6-P (N-acetylmannosamine 6-&#xC778;&#xC0B0; &#xC5FC;) &#xB610;&#xB294; &#xB0A8;&#xC790; 6 P (&#xC2A4; 6 &#xC778;&#xC0B0; &#xC5FC;)&#xACFC; &#xD760; (phosphoenolpyruvate)&#xC758; aldol &#xC751;&#xCD95;&#xC758; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; catalysed &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4;&#xC640; &#xC0C1; &#xC950; Neu5Ac-9-P synthases, &#xB192;&#xC740; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xC815;&#xCCB4;&#xC131;&#xC744; &#xACF5;&#xC720;&#xC5D0; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0; &#xCF00;&#xC774;-9-P synthase &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; (&amp;gt; 95%) &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC640; &#xD568;&#xAED8;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; Neu5Ac-9-P synthase&#xC5D0;&#xB294; &#xB2E8;&#xC77C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;, M42T, &#xC218; &#xD3D0;&#xC9C0; KDN 9 P synthase &#xD65C;&#xB3D9; &#xC644;&#xC804;&#xD788; Neu5Ac-9-P synthase &#xD65C;&#xB3D9; &#xC800;&#xD558; &#xC5C6;&#xC774; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC778;&#xAC04;&#xC758; Neu5Ac-9-P synthase&#xC758; met42&#xC758; &#xCC44;&#xB3C4; mutagenesis &#xC2E0;&#xC744; &#xC81C;&#xC678;&#xD55C; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; &#xB300;&#xCCB4; &#xC720;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC57C;&#xC0DD; &#xD615; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC640; &#xC720;&#xC0AC;&#xD55C; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; Neu5Ac-9-P synthase &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xC5C8;&#xB2E4;. M42L &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC57C;&#xC0DD; &#xD615; &#xD6A8;&#xC18C; &#xAC19;&#xC740; &#xCD94;&#xAC00; KDN 9 P synthase &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC778;&#xAC04;&#xC758; Neu5Ac-9-P synthase homology &#xBAA8;&#xB378; met42&#xB294; &#xC704;&#xCE58; 22 A (1 A = 0.1 nm) &#xAE30;&#xD310; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xBC0F; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC5D0; &#xBA3C; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC774; &#xC601;&#xD5A5; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD558;&#xB294;.

2-Keto-3-deoxy-D-glycero-D-galacto-nonulosonic &#xC0B0; 9-&#xC778;&#xC0B0; &#xC5FC; synthase &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E8;&#xC77C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC758;&#xD574; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; N acetylneuraminic &#xC0B0; 9-&#xC778;&#xC0B0; &#xC5FC; synthase&#xC758; &#xC81C;&#xAC70;.

Ocurre m&aacute;s com&uacute;nmente &aacute;cido si&aacute;lico Neu5Ac (&aacute;cido N-acetilneuram&iacute;nico) y su forma deaminated, KDN (&aacute;cido 2-keto-3-deoxy-D-glycero-D-galacto-nonulosonic), participan en muchas funciones biol&oacute;gicas. La sintasa de Neu5Ac-9-P (Neu5Ac 9-fosfato) humana tiene la capacidad &uacute;nica para catalizar la s&iacute;ntesis de no s&oacute;lo Neu5Ac-9-P pero tambi&eacute;n KDN-9-P (KDN 9-fosfato). Ambas reacciones son catalizadas por el mecanismo de condensaci&oacute;n ald&oacute;lica de PEP (fosfoenolpiruvato) con sustratos de az&uacute;car, ManNAc-6-P (N-acetilmanosamina-6-fosfato) o Man-6-P (manosa 6-fosfato). Rat&oacute;n y rata putativo Sintasas Neu5Ac-9-P, sin embargo, no muestran una actividad de la sintasa de KDN-9-P, a pesar de compartir la identidad de secuencia alta (&gt; 95%) con la enzima humana. Aqu&iacute;, demostramos que una sola mutaci&oacute;n, M42T, en humano Neu5Ac-9-P sintasa puede suprimir la actividad de la sintasa de KDN-9-P completamente sin comprometer la actividad de la sintasa de Neu5Ac-9-P. Mutag&eacute;nesis de saturaci&oacute;n de Met42 de la sintasa de Neu5Ac-9-P humana demostr&oacute; que la sustituci&oacute;n con todos los amino&aacute;cidos excepto la leucina conserva s&oacute;lo la actividad sintasa Neu5Ac-9-P a niveles comparables con la enzima de tipo salvaje. El mutante M42L, como la enzima de tipo salvaje, demostr&oacute; la actividad adicional de synthase KDN-9-P. En el modelo de la homolog&iacute;a de humano Neu5Ac-9-P sintasa, Met42 es 22 situado A (1 A = 0.1 nm) lejos del sitio de uni&oacute;n a sustrato y el impacto de este residuo distante en la enzima funciones se discute.

Eliminaci&oacute;n de la actividad 2-keto-3-deoxy-D-glycero-D-galacto-nonulosonic &aacute;cido 9-Fosfato Sintasa de humano 9-fosfato &aacute;cido N-acetilneuram&iacute;nico sintasa por una sola mutaci&oacute;n.

&#x80CC;&#x666F;&#xFF1A; &#x591A; (ES) &#x80DA;&#x80CE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x6709;&#x80FD;&#x529B;&#x5F15;&#x8D77;&#x5728;&#x6B63;&#x6587;&#x4E2D;&#x7684;&#x6240;&#x6709;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x7C7B;&#x578B;&#xFF0C;&#x663E;&#x793A;&#x5F88;&#x6709;&#x5E0C;&#x671B;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x591A;&#x529F;&#x80FD;&#x6765;&#x6E90;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x518D;&#x751F;&#x6CBB;&#x7597;&#x3002;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x6CBF;&#x88AD;&#x89C4;&#x8303;&#x7684;&#x591A;&#x80FD;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x57FA;&#x672C;&#x673A;&#x5236;&#x5F88;&#x5927;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x4E0A;&#x662F;&#x672A;&#x77E5;&#x7684;&#x5E76;&#x751F;&#x6210;&#x8DB3;&#x591F;&#x6570;&#x91CF;&#x7684;&#x6240;&#x9700;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7C7B;&#x578B;&#x4ECD;&#x7136;&#x662F;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5DE8;&#x5927;&#x7684;&#x6311;&#x6218;&#x3002;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#xFF0C;&#x7279;&#x522B;&#x662F;&#x90A3;&#x4E9B;&#x8C03;&#x5236;&#x4FE1;&#x53F7;&#x7EA7;&#x8054;&#xFF0C;&#x50CF;&#x9AA8;&#x5F62;&#x6001;&#x53D1;&#x751F;&#x86CB;&#x767D; (BMP) &#x5173;&#x952E;&#x53D1;&#x5C55;&#x8DEF;&#x5F84;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x5DE5;&#x5177;&#x7814;&#x7A76;&#x4F53;&#x5916;&#x6CBF;&#x88AD;&#x89C4;&#x8303;&#x5E76;&#x76F4;&#x63A5;&#x5411;&#x7279;&#x5B9A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x5E26;&#x6765;&#x5E0C;&#x671B;&#x3002;&#x65B9;&#x6CD5; / &#x4E3B;&#x8981;&#x8C03;&#x67E5;&#x7ED3;&#x679C;&#xFF1A; &#x6211;&#x4EEC;&#x63CF;&#x8FF0;&#x4F7F;&#x7528; dorsomorphin&#xFF0C;&#x4E00;&#x79CD;&#x6709;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x7684;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x6291;&#x5236;&#x5242; BMP &#x4FE1;&#x53F7;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x5C0F;&#x9F20;&#x80DA;&#x80CE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5FC3;&#x808C;&#x5206;&#x5316;&#x3002;&#x5FC3;&#x7684;&#x611F;&#x5E94;&#x662F;&#x975E;&#x5E38;&#x7A33;&#x5065;&#xFF0C;&#x589E;&#x52A0;&#x4EA7;&#x91CF;&#x7684;&#x81EA;&#x53D1;&#x5730;&#x6253;&#x4E86;&#x81F3;&#x5C11; 20 &#x500D;&#x7684;&#x5FC3;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;Dorsomorphin&#xFF0C;&#x4E0E;&#x5185;&#x6E90;&#x6027; BMP &#x62EE;&#x6297;&#x5242;&#x8111;&#x888B;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x540C;&#x5F3A;&#x52B2;&#x8BF1;&#x5BFC; cardiomyogenesis &#x65F6;&#x6CBB;&#x7597;&#x4EC5;&#x9650;&#x4E8E; ES &#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#xFF0C;&#x521D;&#x59CB; 24 &#x5C0F;&#x65F6;&#x3002;&#x80DA;&#x80CE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x7684;&#x5B9A;&#x91CF; PCR &#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E; BMP &#x4FE1;&#x53F7;&#x65E9;&#x671F;&#x5173;&#x952E;&#x9636;&#x6BB5;&#x7684;&#x836F;&#x7406;&#x4F5C;&#x7528;&#x6291;&#x5236;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x53D1;&#x5C55;&#x7684;&#x5FC3;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8C31;&#x7CFB;&#xFF0C;&#x4F46;&#x964D;&#x4F4E;&#x4E86;&#x8840;&#x7BA1;&#x5185;&#x76AE;&#x3001; &#x5E73;&#x6ED1;&#x808C;&#x8089;&#x548C;&#x9020;&#x8840;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5206;&#x5316;&#x3002;&#x7ED3;&#x8BBA; / &#x610F;&#x4E49;&#xFF1A; &#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x9AA8;&#x5F62;&#x6001;&#x53D1;&#x751F;&#x86CB;&#x767D;&#x6291;&#x5236;&#x5242; ES &#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x7684;&#x521D;&#x59CB;&#x9636;&#x6BB5;&#x7684;&#x7BA1;&#x7406;&#x5927;&#x5927;&#x63A8;&#x52A8;&#x5206;&#x5316;&#x7684;&#x539F;&#x59CB;&#x591A;&#x80FD;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5411;&#x5FC3;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6CBF;&#x88AD;&#xFF0C;&#x663E;&#x7136;&#x635F;&#x5BB3;&#x5176;&#x4ED6;&#x4E2D;&#x80DA;&#x53F6;&#x7684;&#x8C31;&#x7CFB;&#x3002;&#x50CF; dorsomorphin &#x53EF;&#x80FD;&#x6210;&#x4E3A;&#x591A;&#x624D;&#x591A;&#x827A;&#x7684;&#x836F;&#x7406;&#x5DE5;&#x5177;&#x4E3A;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7814;&#x7A76;&#x4E0E;&#x518D;&#x751F;&#x533B;&#x5B66;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x9014;&#x5F84;&#x7684;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x8C03;&#x8282;&#x5242;&#x3002;

Dorsomorphin&#xFF0C;&#x4E00;&#x79CD;&#x6709;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x7684;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x6291;&#x5236;&#x5242; BMP &#x4FE1;&#x53F7;&#x3001; &#x4FC3;&#x8FDB;&#x80DA;&#x80CE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684; cardiomyogenesis&#x3002;

BACKGROUND: Pluripotent embryonic stem (ES) cells, which have the capacity to give rise to all tissue types in the body, show great promise as a versatile source of cells for regenerative therapy. However, the basic mechanisms of lineage specification of pluripotent stem cells are largely unknown, and generating sufficient quantities of desired cell types remains a formidable challenge. Small molecules, particularly those that modulate key developmental pathways like the bone morphogenetic protein (BMP) signaling cascade, hold promise as tools to study in vitro lineage specification and to direct differentiation of stem cells toward particular cell types. METHODOLOGY/ PRINCIPAL FINDINGS: We describe the use of dorsomorphin, a selective small molecule inhibitor of BMP signaling, to induce myocardial differentiation in mouse ES cells. Cardiac induction is very robust, increasing the yield of spontaneously beating cardiomyocytes by at least 20 fold. Dorsomorphin, unlike the endogenous BMP antagonist Noggin, robustly induces cardiomyogenesis when treatment is limited to the initial 24-hours of ES cell differentiation. Quantitative-PCR analyses of differentiating ES cells indicate that pharmacological inhibition of BMP signaling during the early critical stage promotes the development of the cardiomyocyte lineage, but reduces the differentiation of endothelial, smooth muscle, and hematopoietic cells. CONCLUSIONS/ SIGNIFICANCE: Administration of a selective small molecule BMP inhibitor during the initial stages of ES cell differentiation substantially promotes the differentiation of primitive pluripotent cells toward the cardiomyocytic lineage, apparently at the expense of other mesodermal lineages. Small molecule modulators of developmental pathways like dorsomorphin could become versatile pharmacological tools for stem cell research and regenerative medicine.

Dorsomorphin, a selective small molecule inhibitor of BMP signaling, promotes cardiomyogenesis in embryonic stem cells.

CONTEXTE: pluripotentes embryonnaires souches (ES) des cellules, qui ont la capacit&#xE9; de donner naissance &#xE0; tous les types de tissus dans le corps, sont tr&#xE8;s prometteurs en tant que source polyvalente de cellules pour la th&#xE9;rapie r&#xE9;g&#xE9;n&#xE9;rative. Cependant, les m&#xE9;canismes de base de la sp&#xE9;cification lign&#xE9;e de cellules souches pluripotentes sont en grande partie inconnue, et de g&#xE9;n&#xE9;rer des quantit&#xE9;s suffisantes de types de cellules d&#xE9;sir&#xE9;es reste un formidable d&#xE9;fi. Les petites mol&#xE9;cules, en particulier celles qui modulent les voies de d&#xE9;veloppement cl&#xE9;s, comme la prot&#xE9;ine morphog&#xE9;n&#xE9;tique osseuse (BMP) cascade de signalisation, et prometteurs comme outils pour &#xE9;tudier dans la sp&#xE9;cification lign&#xE9;e in vitro et d&#x26;#39;orienter la diff&#xE9;renciation des cellules souches vers des types cellulaires particuliers. M&#xC9;THODOLOGIE / PRINCIPAUX R&#xC9;SULTATS: Nous d&#xE9;crivons l&#x26;#39;utilisation de dorsomorphin, un inhibiteur de mol&#xE9;cule s&#xE9;lective petite signalisation BMP, pour induire la diff&#xE9;renciation du myocarde dans les cellules ES de souris. Induction cardiaque est tr&#xE8;s robuste, ce qui augmente le rendement de battant spontan&#xE9;ment cardiomyocytes par au moins 20 fois. Dorsomorphin, contrairement &#xE0; la caboche BMP antagoniste endog&#xE8;ne, induit robuste cardiomyogenesis lorsque le traitement est limit&#xE9; aux premi&#xE8;res 24 heures de la diff&#xE9;renciation des cellules ES. Quantitative-PCR analyses de diff&#xE9;renciation des cellules ES indiquent que l&#x26;#39;inhibition pharmacologique de la signalisation BMP au cours de la phase initiale critique favorise le d&#xE9;veloppement de la lign&#xE9;e des cardiomyocytes, mais r&#xE9;duit la diff&#xE9;renciation des cellules endoth&#xE9;liales, musculaires lisses, et les cellules h&#xE9;matopo&#xEF;&#xE9;tiques. CONCLUSIONS / PORT&#xC9;E: L&#x26;#39;administration d&#x26;#39;un inhibiteur de mol&#xE9;cule de BMP s&#xE9;lective petite pendant les &#xE9;tapes initiales de la diff&#xE9;renciation des cellules ES favorise sensiblement la diff&#xE9;renciation des cellules pluripotentes primitives vers la lign&#xE9;e cardiomyocytic, apparemment au d&#xE9;triment des autres lignages m&#xE9;sodermiques. Modulateurs &#xE0; petites mol&#xE9;cules de voies de d&#xE9;veloppement comme dorsomorphin pourrait devenir polyvalents outils pharmacologiques pour la recherche sur les cellules souches et la m&#xE9;decine r&#xE9;g&#xE9;n&#xE9;rative.

Dorsomorphin, un inhibiteur de mol&#xE9;cule s&#xE9;lective Petit BMP Signaling, Favorise Cardiomyogenesis dans les cellules souches embryonnaires

Hintergrund: Pluripotenten embryonalen Stammzellen (ES) Zellen, die alle Gewebearten im K&ouml;rper hervorrufen k&ouml;nnen, zeigen gro&szlig;e Versprechen als eine vielseitige Quelle von Zellen f&uuml;r regenerative Therapie. Jedoch die grundlegenden Mechanismen der Herkunfts-Spezifikation von pluripotenten Stammzellen sind weitgehend unbekannt, und Generieren von ausreichende Mengen der gew&uuml;nschten Zelltypen bleibt eine gewaltige Herausforderung. Kleine Molek&uuml;le, insbesondere f&uuml;r die wichtigste entwicklungsbedingte Bahnen wie Knochen morphogenetic Proteins (BMP) Signalisierung Kaskade, modulieren halten versprechen als Instrumente zur in-vitro-Linie-Spezifikation zu studieren und Differenzierung von Stammzellen in bestimmten Zelltypen Richtung zu lenken. Methodik / wichtigsten Erkenntnisse: Wir beschreiben die Verwendung von Dorsomorphin, ein selektiver niedermolekularer Inhibitor BMP zu signalisieren, um myokardiale Differenzierung in Maus ES-Zellen induzieren. Kardiale Induktion ist sehr robust, Steigerung des Ertrags der Cardiomyocytes spontan von mindestens 20 Falten zu schlagen. Robust induziert Dorsomorphin, im Gegensatz zu den endogenen BMP-Antagonisten Noggin, Cardiomyogenesis wenn Behandlung auf dem anf&auml;nglichen 24 Stunden ES Zelldifferenzierung begrenzt wird. Quantitative-PCR Analysen der Differenzierung von ES-Zellen zeigen, dass die pharmakologische Hemmung BMP zu signalisieren, w&auml;hrend der kritischen Fr&uuml;hphase f&ouml;rdert die Entwicklung der Cardiomyocyte Linie, sondern reduziert die Differenzierung von Endothelzellen, glatte Muskeln und blutbildender Zellen. Schlussfolgerungen / Bedeutung: Verwaltung von einer selektiven niedermolekularer BMP-Inhibitor in der Anfangsphase der Zelldifferenzierung ES wesentlich f&ouml;rdert die Differenzierung der primitiven pluripotenten Zellen in Richtung der Cardiomyocytic-Linie offenbar auf Kosten der anderen mesodermale Linien. Kleines Molek&uuml;l Modulatoren der entwicklungsbedingte Bahnen wie Dorsomorphin vielseitige pharmakologische Werkzeuge f&uuml;r Stammzellenforschung und der regenerativen Medizin werden k&ouml;nnte.

Dorsomorphin, ein selektiver niedermolekularer Inhibitor BMP zu signalisieren, f&ouml;rdert Cardiomyogenesis in embryonalen Stammzellen.

SFONDO: Cellule pluripotenti staminali embrionali (ES), che hanno la capacit&agrave; di dare origine a tutti i tipi di tessuto nel corpo, mostrano la grande promessa come una versatile fonte di cellule per la terapia rigenerativa. Tuttavia, i meccanismi di base della specifica derivazione di cellule staminali pluripotenti sono in gran parte sconosciuti, e generando una quantit&agrave; sufficiente di tipi di cella desiderata rimane una sfida formidabile. Piccole molecole, specialmente quelli che modulano la chiave dello sviluppo percorsi come proteina morfogenetica dell&#39;osso (BMP) segnalazione cascade, promettono come strumenti per studiare specifiche in vitro lignaggio e di indirizzare la differenziazione delle cellule staminali verso tipi di cellule particolari. METODOLOGIA / conclusioni principali: descriviamo l&#39;uso di dorsomorphin, un inibitore selettivo piccola molecola di segnalazione BMP, per indurre la differenziazione del miocardio in cellule di topo ES. Induzione cardiaco &egrave; molto robusto, aumentando il rendimento di battere spontaneamente cardiomyocytes da almeno 20 volte. Dorsomorphin, a differenza dell&#39;antagonista endogeno BMP Noggin, robustamente induce cardiomyogenesis quando il trattamento &egrave; limitato per le prime 24-ore di differenziazione delle cellule di ES. Analisi di PCR quantitativa della differenziazione di cellule ES indicano che inibizione farmacologica della segnalazione BMP durante la prima fase critica promuove lo sviluppo del lignaggio del cardiomyocyte, ma riduce la differenziazione del muscolo liscio, endotelio e cellule emopoietiche. CONCLUSIONI / significato: somministrazione di un inibitore BMP selettiva piccola molecola durante le fasi iniziali di differenziazione delle cellule ES sostanzialmente promuove la differenziazione delle cellule pluripotenti primitivo verso la discendenza di cardiomyocytic, a quanto pare a scapito di altri lignaggi mesodermica. Modulatori di piccola molecola di percorsi di sviluppo come dorsomorphin potrebbero diventare versatili strumenti farmacologici per la ricerca sulle cellule staminali e medicina rigenerativa.

Dorsomorphin, un inibitore selettivo piccola molecola di segnalazione BMP, promuove la cardiomyogenesis nelle cellule staminali embrionali.

&#x80CC;&#x666F;&#xFF1A;&#x672C;&#x4F53;&#x5185;&#x306E;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x7D44;&#x7E54;&#x306E;&#x7A2E;&#x985E;&#x3092;&#x751F;&#x3058;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x80DA;&#x6027;&#x5E79;&#xFF08;ES&#xFF09;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x518D;&#x751F;&#x533B;&#x7642;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x4E07;&#x80FD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30B9;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x671F;&#x5F85;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7CFB;&#x7D71;&#x306E;&#x4ED5;&#x69D8;&#x306E;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x306A;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306F;&#x4E0D;&#x660E;&#x306A;&#x70B9;&#x304C;&#x591A;&#x3044;&#x3068;&#x3001;&#x6240;&#x671B;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x306E;&#x5341;&#x5206;&#x306A;&#x91CF;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x624B;&#x3054;&#x308F;&#x3044;&#x8AB2;&#x984C;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;in vitro&#x3067;&#x306E;&#x7CFB;&#x7D71;&#x306E;&#x4ED5;&#x69D8;&#x3067;&#x52C9;&#x5F37;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x578B;&#x306B;&#x5411;&#x304B;&#x3063;&#x3066;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x7279;&#x306B;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x3001;&#x30AB;&#x30B9;&#x30B1;&#x30FC;&#x30C9;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x9AA8;&#x5F62;&#x6210;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF08;BMP&#xFF09;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x767A;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3082;&#x306E;&#x306F;&#x3001;&#x7D04;&#x675F;&#x3092;&#x4FDD;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x65B9;&#x6CD5;&#x8AD6;/&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x6240;&#x898B;&#xFF1A;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;ES&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x5206;&#x5316;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;dorsomorphin&#x3001;BMP&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x306A;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5FC3;&#x81D3;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x306F;&#x3001;&#x81EA;&#x767A;&#x7684;&#x306B;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082;20&#x500D;&#x3067;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x7834;&#x3063;&#x3066;&#x306E;&#x53CE;&#x7387;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3001;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x5805;&#x7262;&#x3067;&#x3059;&#x3002; Dorsomorphin&#x306F;&#x3001;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;BMP&#x30A2;&#x30F3;&#x30BF;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;&#x30CE;&#x30AE;&#x30F3;&#x3068;&#x306F;&#x7570;&#x306A;&#x308A;&#x3001;&#x78BA;&#x5B9F;&#x306B;&#x6CBB;&#x7642;&#x304C;ES&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x306E;&#x521D;&#x671F;&#x306E;24&#x6642;&#x9593;&#x306B;&#x5236;&#x9650;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;cardiomyogenesis&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x5DEE;&#x5225;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;ES&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;PCR&#x89E3;&#x6790;&#x3067;&#x306F;&#x521D;&#x671F;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x6BB5;&#x968E;&#x3067;BMP&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x85AC;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x963B;&#x5BB3;&#x306F;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x7CFB;&#x7D71;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x5185;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x3001;&#x5E73;&#x6ED1;&#x7B4B;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x3092;&#x4F4E;&#x6E1B;&#x3057;&#x3001;&#x9020;&#x8840;&#x7D30;&#x80DE;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D50;&#x8AD6;/&#x610F;&#x7FA9;&#xFF1A;ES&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x306E;&#x521D;&#x671F;&#x6BB5;&#x968E;&#x3067;&#x9078;&#x629E;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;BMP&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306E;&#x6295;&#x4E0E;&#x306F;&#x3001;&#x5B9F;&#x8CEA;&#x7684;&#x306B;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x4ED6;&#x306E;&#x4E2D;&#x80DA;&#x8449;&#x7CFB;&#x8B5C;&#x3092;&#x72A0;&#x7272;&#x306B;&#x3057;&#x3066;&#x3001;cardiomyocytic&#x7CFB;&#x7D71;&#x306B;&#x5411;&#x304B;&#x3063;&#x3066;&#x539F;&#x59CB;&#x7684;&#x306A;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; dorsomorphin&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x767A;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x30E2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x7814;&#x7A76;&#x3068;&#x518D;&#x751F;&#x533B;&#x7642;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6C4E;&#x7528;&#x85AC;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x306B;&#x306A;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Dorsomorphin&#x3001;BMP&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306F;&#x3001;&#x80DA;&#x6027;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;Cardiomyogenesis&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;

&#xBC30;&#xACBD;: &#xC6A9;&#xB7C9;&#xC774; &#xC77C;&#xC73C;&#xD0A4; &#xB2E4; &#xC2E0;&#xCCB4;&#xC758; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC870;&#xC9C1; &#xC720;&#xD615;, &#xB9CC;&#xB2A5; &#xBC30;&#xC544; &#xC904;&#xAE30; (ES&#xC758;) &#xC138;&#xD3EC; &#xC7AC;&#xC0DD; &#xCE58;&#xB8CC;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC18C;&#xC2A4;&#xB85C; &#xD070; &#xC57D;&#xC18D;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, pluripotent &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xACC4;&#xBCF4; &#xC9C0;&#xC815;&#xC758; &#xAE30;&#xBCF8; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC740; &#xD06C;&#xAC8C; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4; &#xBC0F; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xB3C4;&#xC804;&#xC744; &#xB0A8;&#xC544; &#xC6D0;&#xD558;&#xB294; &#xC140; &#xD615;&#xC2DD;&#xC758; &#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; &#xC591;&#xC758; &#xC0DD;&#xC131; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD2B9;&#xD788; &#xC2E0;&#xD638; &#xCE90;&#xC2A4;&#xCF00;&#xC774;&#xB4DC;, &#xBF08; &#xC804;&#xCCB4;&#xC801; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (BMP) &#xAC19;&#xC740; &#xD0A4; &#xBC1C;&#xB2EC; &#xACBD;&#xB85C; &#xC870;&#xC808; &#xD558;&#xB294; &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790; &#xB3C4;&#xAD6C; &#xCCB4; &#xC678; &#xD608;&#xD1B5; &#xBA85;&#xC138;&#xB97C; &#xACF5;&#xBD80; &#xD558; &#xACE0; &#xC9C1;&#xC811; &#xD2B9;&#xC815; &#xC140; &#xD615;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xBD84;&#xD654;&#xB85C; &#xC57D;&#xC18D;&#xC744; &#xC7A1;&#xC73C;&#xC2ED;&#xC2DC;&#xC624;. &#xBC29;&#xBC95;&#xB860; / &#xC8FC; &#xC870;&#xC0AC; &#xACB0;&#xACFC;: &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; ES &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC2EC;&#xADFC; &#xBD84;&#xD654;&#xB97C; &#xC720;&#xB3C4; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; dorsomorphin, BMP &#xC2DC;&#xADF8;&#xB110;&#xB9C1;&#xC758; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790; &#xC5B5;&#xC81C; &#xBB3C; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC2EC;&#xC7A5; &#xC720;&#xB3C4; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xAC15;&#xB825; &#xD558; &#xACE0;, &#xC790;&#xBC1C;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC801;&#xC5B4;&#xB3C4; 20 &#xBC30;&#xB97C; &#xAEBE;&#xACE0; cardiomyocytes&#xC758; &#xC218;&#xC728;&#xC744; &#xC99D;&#xAC00;. Dorsomorphin, &#xC0DD; BMP&#xC758; &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C; &#xBA38;&#xB9AC;&#xC640; &#xB2EC;&#xB9AC; &#xACAC;&#xACE0; &#xD558; &#xAC8C; &#xC720;&#xB3C4; cardiomyogenesis &#xCE58;&#xB8CC;&#xB294; ES &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xD654;&#xC758; &#xCD08;&#xAE30; 24 &#xC2DC;&#xAC04;&#xC73C;&#xB85C; &#xC81C;&#xD55C; &#xD558;&#xB294; &#xACBD;&#xC6B0;. ES &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xD654;&#xC758; &#xC815;&#xB7C9; PCR &#xBD84;&#xC11D; &#xD45C;&#xC2DC; BMP &#xC2E0;&#xD638; &#xCD08;&#xAE30; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xB2E8;&#xACC4; &#xC911;&#xC758; &#xC57D;&#xB9AC; &#xC800;&#xD574; cardiomyocyte &#xD608;&#xD1B5;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC744; &#xCD09;&#xC9C4; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB0B4; &#xD53C;, &#xBD80;&#xB4DC;&#xB7EC;&#xC6B4; &#xADFC;&#xC721;&#xACFC; &#xC870; &#xD608; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xBD84;&#xD654;&#xB97C; &#xAC10;&#xC18C; &#xC2DC;&#xD0A8;&#xB2E4;. &#xACB0;&#xB860; / &#xC911;&#xC694;&#xC131;: ES &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xD654;&#xC758; &#xCD08;&#xAE30; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790; BMP &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xC758; &#xAD00;&#xB9AC; &#xC2E4;&#xC9C8;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; cardiomyocytic &#xD608;&#xD1B5; &#xBD84;&#xBA85;&#xD788; mesodermal &#xB2E4;&#xB978; &#xACC4;&#xBCF4;&#xC758; &#xBE44;&#xC6A9;&#xC73C;&#xB85C; &#xAE30;&#xBCF8; &#xB9CC;&#xB2A5; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xBD84;&#xD654;&#xB97C; &#xCD09;&#xC9C4;. &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790; &#xBCC0;&#xC870;&#xAE30; dorsomorphin &#xAC19;&#xC740; &#xBC1C;&#xB2EC; &#xACBD;&#xB85C;&#xC758; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC640; &#xC7AC;&#xC0DD; &#xC758;&#xD559;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC57D;&#xB9AC; &#xB3C4;&#xAD6C; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;.

Dorsomorphin, BMP &#xC2DC;&#xADF8;&#xB110;&#xB9C1;&#xC758; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790; &#xC5B5;&#xC81C; &#xBB3C; &#xBBF8; &#xBC1C;&#xB2EC; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; cardiomyogenesis&#xB97C; &#xCD09;&#xC9C4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

ANTECEDENTES: pluripotentes embrionarias (ES) las c&#xE9;lulas, que tienen la capacidad de dar lugar a todo tipo de tejidos en el cuerpo, muestran una gran promesa como una fuente vers&#xE1;til de las c&#xE9;lulas para la terapia regenerativa. Sin embargo, los mecanismos b&#xE1;sicos de la especificaci&#xF3;n de linaje de c&#xE9;lulas madre pluripotentes son en gran parte desconocido, y la generaci&#xF3;n de cantidades suficientes de los tipos celulares deseados sigue siendo un reto formidable. Las mol&#xE9;culas peque&#xF1;as, especialmente aquellas que modulan las v&#xED;as de desarrollo clave como la prote&#xED;na morfogen&#xE9;tica &#xF3;sea (BMP) de se&#xF1;alizaci&#xF3;n en cascada, surgen como herramientas para estudiar en la especificaci&#xF3;n de linaje in vitro y dirigir la diferenciaci&#xF3;n de las c&#xE9;lulas madre hacia tipos celulares espec&#xED;ficos. Metodolog&#xED;a / Principales conclusiones: Se describe la utilizaci&#xF3;n de dorsomorphin, un inhibidor selectivo de la peque&#xF1;a mol&#xE9;cula de se&#xF1;alizaci&#xF3;n de BMP, para inducir la diferenciaci&#xF3;n de miocardio en las c&#xE9;lulas madre embrionarias de rat&#xF3;n. Inducci&#xF3;n card&#xED;aco es muy robusto, aumentando el rendimiento del latido espont&#xE1;neo cardiomiocitos por lo menos 20 veces. Dorsomorphin, a diferencia del Noggin antagonista end&#xF3;geno BMP, robustamente induce cardiomyogenesis cuando el tratamiento se limita a las primeras 24 horas de la diferenciaci&#xF3;n de c&#xE9;lulas ES. -PCR cuantitativa an&#xE1;lisis de diferenciaci&#xF3;n de c&#xE9;lulas madre embrionarias indican que la inhibici&#xF3;n farmacol&#xF3;gica de la se&#xF1;alizaci&#xF3;n de BMP durante la etapa cr&#xED;tica temprana favorece el desarrollo del linaje de los cardiomiocitos, pero reduce la diferenciaci&#xF3;n del m&#xFA;sculo endotelial, liso y c&#xE9;lulas hematopoy&#xE9;ticas. CONCLUSIONES / SIGNIFICADO: La administraci&#xF3;n de un inhibidor selectivo de peque&#xF1;a mol&#xE9;cula BMP durante las etapas iniciales de la diferenciaci&#xF3;n de c&#xE9;lulas ES sustancialmente promueve la diferenciaci&#xF3;n de c&#xE9;lulas pluripotentes primitivas hacia el linaje de cardiomyocytic, al parecer, a expensas de otros linajes mesod&#xE9;rmicos. Moduladores de mol&#xE9;culas peque&#xF1;as de las v&#xED;as de desarrollo como dorsomorphin podr&#xED;a llegar a ser vers&#xE1;tiles herramientas farmacol&#xF3;gicas para la investigaci&#xF3;n con c&#xE9;lulas madre y medicina regenerativa.

Dorsomorphin, un inhibidor selectivo de peque&#xF1;as mol&#xE9;culas de se&#xF1;alizaci&#xF3;n de BMP, promueve Cardiomyogenesis en c&#xE9;lulas madre embrionarias

&#x5173;&#x95ED;&#x76EE;&#x6807;&#x5F71;&#x54CD;&#x5F80;&#x5F80;&#x9650;&#x5236;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x7684;&#x6CBB;&#x7597;&#x6F5C;&#x529B;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#xFF0C;&#x5728;&#x5C4F;&#x5E55;&#x5E72;&#x6270;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x80DA;&#x80CE;&#x4EB2;&#x8F74;&#x7684;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x4E86; dorsomorphin&#xFF0C;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B21;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x7684;&#x9AA8;&#x5F62;&#x6001;&#x53D1;&#x751F;&#x86CB;&#x767D; (BMP) &#x4FE1;&#x53F7;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x8BE5; dorsomorphin &#x6709;&#x91CD;&#x5927;&#x7684;&quot;&#x9776;&#x5FC3;&quot;&#x5F71;&#x54CD;&#x5BF9; VEGF (&#x8840;&#x7BA1;&#x5185;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;) &#x7C7B;&#x578B; 2 &#x53D7;&#x4F53; (Flk1/KDR) &#x548C;&#x6270;&#x4E71;&#x4E86;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x8840;&#x7BA1;&#x751F;&#x6210;&#x3002;&#x7531;&#x4E8E;&#x9AA8;&#x5F62;&#x6001;&#x53D1;&#x751F;&#x86CB;&#x767D;&#x548C; VEGF &#x4FE1;&#x53F7;&#x5DF2;&#x77E5;&#x53C2;&#x4E0E;&#x8840;&#x7BA1;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BBE;&#x6CD5;&#x786E;&#x5B9A; dorsomorphin &#x7684;&#x6297;&#x8840;&#x7BA1;&#x589E;&#x751F;&#x5F71;&#x54CD;&#x662F;&#x5426;&#x7531;&#x4E8E;&#x5176;&#x5BF9; BMP &#x6216; VEGF &#x4FE1;&#x53F7;&#x901A;&#x8FC7;&#x53D1;&#x5C55;&#x76EE;&#x6807; BMP &#x4F46;&#x4E0D;&#x662F; VEGF &#x4FE1;&#x53F7;&#xFF0C;&#x53CD;&#x4E4B;&#x4EA6;&#x7136;&#x7684;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7269;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x5728; dorsomorphin &#x7C7B;&#x4F3C;&#x7269;&#x4E3B;&#x8981;&#x662F;&#x57FA;&#x4E8E;&#x5176;&#x5BF9;&#x6D3B;&#x7684;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x80DA;&#x80CE;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x6784;&#x6548;&#x5173;&#x7CFB; &#xFF08;&#x7279;&#x533A;&#xFF09; &#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x786E;&#x5B9A;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x548C;&#x70C8;&#x6027;&#x9AA8;&#x5F62;&#x6001;&#x53D1;&#x751F;&#x86CB;&#x767D;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x4EE5;&#x53CA;&#x9009;&#x62E9;&#x6027; VEGF &#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x3002;&#x9AA8;&#x5F62;&#x6001;&#x53D1;&#x751F;&#x86CB;&#x767D;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#xFF0C;DMH1&#xFF0C;&#x4E13;&#x95E8;&#x9488;&#x5BF9; BMP &#x7684;&#x4F46;&#x6CA1;&#x6709;&#x8840;&#x7BA1;&#x901A;&#x8DEF;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x4E4B;&#x4E00; dorsalized &#x7684;&#x80DA;&#x8F74;&#x800C;&#x65E0;&#x9700;&#x4E2D;&#x65AD;&#x8840;&#x7BA1;&#x751F;&#x6210;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x8868;&#x660E; BMP &#x4FE1;&#x53F7;&#x4E0D;&#x53C2;&#x4E0E;&#x8840;&#x7BA1;&#x751F;&#x6210;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x3002;&#x8FD9;&#x662F;&#x5728;&#x810A;&#x690E;&#x52A8;&#x7269;&#x4E2D;&#x6267;&#x884C;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B21;&#x5168;&#x9762;&#x7279;&#x533A;&#x7814;&#x7A76;&#x4E4B;&#x4E00;&#xFF0C;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x5305;&#x542B;&#x5728;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x6D3B;&#x6027;&#x548C;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x4E00;&#x4E2A;&#x751F;&#x547D;&#x6709;&#x673A;&#x4F53;&#x7684;&#x4E0A;&#x4E0B;&#x6587;&#x4E2D;&#x8BC4;&#x4F30;&#x7684;&#x836F;&#x7269;&#x5F00;&#x53D1;&#x6709;&#x5438;&#x5F15;&#x529B;&#x4E92;&#x8865;&#x5E73;&#x53F0;&#x6F14;&#x793A;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x7684;&#x6F5C;&#x529B;&#x3002;

&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x6784;&#x6548;&#x5173;&#x7CFB;&#x7814;&#x7A76; dorsomorphin &#x7C7B;&#x4F3C;&#x7269;&#x6807;&#x8BC6;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x548C;&#x9AA8;&#x5F62;&#x6001;&#x53D1;&#x751F;&#x86CB;&#x767D;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x3002;

The therapeutic potential of small molecule signaling inhibitors is often limited by off-target effects. Recently, in a screen for compounds that perturb the zebrafish embryonic dorsoventral axis, we identified dorsomorphin, the first selective inhibitor of bone morphogenetic protein (BMP) signaling. Here we show that dorsomorphin has significant "off-target" effects against the VEGF (vascular endothelial growth factor) type-2 receptor (Flk1/KDR) and disrupts zebrafish angiogenesis. Since both BMP and VEGF signals are known to be involved in vascular development, we sought to determine whether dorsomorphin's antiangiogenic effects are due to its impact on the BMP or VEGF signals through the development of analogues that target BMP but not VEGF signaling and vice versa. In a structure-activity relationship (SAR) study of dorsomorphin analogues based primarily on their effects on live zebrafish embryos, we identified highly selective and potent BMP inhibitors as well as selective VEGF inhibitors. One of the BMP inhibitors, DMH1, which exclusively targets the BMP but not the VEGF pathway, dorsalized the embryonic axis without disrupting the angiogenic process, demonstrating that BMP signaling was not involved in the angiogenic process. This is one of the first full-scale SAR studies performed in vertebrates and demonstrates the potential of zebrafish as an attractive complementary platform for drug development that incorporates an assessment of in vivo bioactivity and selectivity in the context of a living organism.

In vivo structure-activity relationship study of dorsomorphin analogues identifies selective VEGF and BMP inhibitors.

Le potentiel th&#xE9;rapeutique des inhibiteurs de petites mol&#xE9;cules de signalisation est souvent limit&#xE9;e par les effets hors-cible. R&#xE9;cemment, dans un criblage de compos&#xE9;s qui perturbent le poisson-z&#xE8;bre axe embryonnaire dorso-ventral, nous avons identifi&#xE9; dorsomorphin, le premier inhibiteur s&#xE9;lectif de la prot&#xE9;ine morphog&#xE9;n&#xE9;tique osseuse (BMP) de signalisation. Ici, nous montrons que dorsomorphin dispose d&#x26;#39;importantes &#xAB;hors-cible&#x26;quot; effets contre le VEGF (vascular endothelial growth factor) de type 2 du r&#xE9;cepteur (Flk1/KDR) et perturbe l&#x26;#39;angiogen&#xE8;se poisson-z&#xE8;bre. Depuis deux BMP et les signaux de VEGF sont connus pour &#xEA;tre impliqu&#xE9;s dans le d&#xE9;veloppement vasculaire, nous avons cherch&#xE9; &#xE0; d&#xE9;terminer si les effets anti-angiog&#xE9;niques dorsomorphin sont dus &#xE0; son impact sur le BMP ou signaux VEGF &#xE0; travers le d&#xE9;veloppement d&#x26;#39;analogues de cet objectif BMP, mais pas de signalisation du VEGF et vice-versa. Dans une relation structure-activit&#xE9; (SAR) &#xE9;tude d&#x26;#39;analogues dorsomorphin bas&#xE9;es principalement sur leurs effets sur embryons de poisson z&#xE8;bre en direct, nous avons identifi&#xE9; hautement s&#xE9;lectif et puissant des inhibiteurs de BMP ainsi que des inhibiteurs du VEGF s&#xE9;lectifs. L&#x26;#39;un des inhibiteurs de BMP, DMH1, qui cible exclusivement le BMP, mais pas la voie du VEGF, dorsalized l&#x26;#39;axe embryonnaire, sans perturber le processus angiog&#xE9;nique, d&#xE9;montrant que BMP signalisation n&#x26;#39;a pas &#xE9;t&#xE9; impliqu&#xE9; dans le processus angiog&#xE9;nique. C&#x26;#39;est l&#x26;#39;un des premiers &#xE0; grande &#xE9;chelle des &#xE9;tudes effectu&#xE9;es SAR chez les vert&#xE9;br&#xE9;s et d&#xE9;montre le potentiel de poisson z&#xE8;bre comme une plateforme attractive compl&#xE9;mentaire pour le d&#xE9;veloppement de m&#xE9;dicaments qui comprend une &#xE9;valuation de la bioactivit&#xE9; in vivo et la s&#xE9;lectivit&#xE9; dans le cadre d&#x26;#39;un organisme vivant.

Dans l&#x26;#39;&#xE9;tude des relations structure-activit&#xE9; in vivo des analogues Dorsomorphin Identifie s&#xE9;lective du VEGF et BMP inhibiteurs

Das therapeutische Potenzial von niedermolekularer Hemmer Signalisierung wird oft durch aus den Zielgruppen Auswirkungen begrenzt. Vor kurzem wurden in einem Bildschirm f&uuml;r Verbindungen, die die Zebrafish embryonale dorsoventral Achse verl&auml;ngern, Dorsomorphin, der erste selektive Inhibitor Bone morphogenetic Proteins (BMP) signalisieren. Hier zeigen wir, dass Dorsomorphin hat erhebliche Auswirkungen der &quot;off-Target&quot; gegen den VEGF (vascular endothelial Growth Factor) Typ-2-Rezeptor (Flk1/KDR) und st&ouml;rt Zebrafisch Angiogenesis. Da BMP und VEGF-Signale bekannt sind, vaskul&auml;re Entwicklung beteiligt sein, wollten wir bestimmen, ob Dorsomorphin die Antiangiogenetische Effekte aufgrund ihrer Auswirkungen auf die BMP oder VEGF-Signale durch die Entwicklung von Analoga, die Ziel von BMP aber nicht VEGF sind-Signalisierung und umgekehrt. In einer Struktur-Wirkungs-Beziehung (SAR)-Studie von Dorsomorphin-Analoga, die in erster Linie anhand ihrer Auswirkungen auf Leben Zebrafisch-Embryonen haben wir festgestellt, h&ouml;chst selektiv und potente BMP-Inhibitoren sowie selektive VEGF-Inhibitoren. Eines der BMP Hemmnisse, DMH1, das ausschlie&szlig;lich der BMP aber nicht der VEGF-Weg zum Ziel, dorsalized die embryonale Achse ohne Unterbrechung des Angiogenese-Prozess, demonstrieren, dass BMP Signalisierung an der Angiogenese-Vorgang nicht beteiligt war. Dies ist eine der ersten Full-Scale SAR Studien bei Wirbeltieren durchgef&uuml;hrt und zeigt das Potenzial der Zebrafisch als attraktive erg&auml;nzende Plattform f&uuml;r die Entwicklung, die eine Bewertung der in-vivo Bioaktivit&auml;t und Selektivit&auml;t im Rahmen eines Lebewesens enth&auml;lt.

In-vivo-Struktur-Wirkungs-Beziehung-Studie von Dorsomorphin-Analoga bezeichnet selektive Inhibitoren der VEGF und BMP.

Il potenziale terapeutico di piccole molecole inibitori di segnalazione &egrave; spesso limitato da effetti fuori bersaglio. Recentemente, in uno schermo per i composti che perturbare l&#39;asse dorsoventral embrionale di Danio rerio, abbiamo identificato dorsomorphin, il primo inibitore selettivo della segnalazione di bone morphogenetic protein (BMP). Qui vi mostriamo che dorsomorphin ha effetti significativi &quot;fuori bersaglio&quot; contro il recettore di tipo-2 di VEGF (vascular endothelial growth factor) (Flk1/KDR) e sconvolge l&#39;angiogenesi zebrafish. Dal momento che segnali BMP sia VEGF sono noti per essere coinvolti nello sviluppo vascolare, abbiamo cercato di determinare se gli effetti antiangiogenetici di dorsomorphin sono a causa del suo impatto sui segnali BMP o VEGF attraverso lo sviluppo di analoghi che target BMP ma non VEGF segnalazione e viceversa. In uno studio di rapporto (SAR) struttura-attivit&agrave; degli analoghi del dorsomorphin basato principalmente sui loro effetti su live zebrafish embrioni, abbiamo individuato altamente selettivi e potenti inibitori BMP cos&igrave; come inibitori selettivi di VEGF. Uno degli inibitori BMP, DMH1, che si rivolge esclusivamente il BMP, ma non il pathway VEGF, dorsalized l&#39;asse embrionale senza interrompere il processo angiogenico, dimostrando che segnalazione BMP non era coinvolto nel processo di angiogenesi. Questo &egrave; uno dei primi studi su larga scala SAR eseguiti nei vertebrati e dimostra il potenziale di zebrafish come un&#39;attraente piattaforma complementare per lo sviluppo di farmaci che incorpora una valutazione di bioattivit&agrave; in vivo e selettivit&agrave; nell&#39;ambito di un organismo vivente.

Studio relazione struttura-attivit&agrave; in vivo di dorsomorphin analoghi identifica gli inibitori selettivi di VEGF e BMP.

&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x5834;&#x5408;&#x3001;&#x30AA;&#x30D5;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x52B9;&#x679C;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5236;&#x9650;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x6DF7;&#x4E71;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x80DA;&#x306E;&#x80CC;&#x8179;&#x8EF8;&#x3092;&#x3001;&#x753B;&#x9762;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;dorsomorphin&#x3001;&#x9AA8;&#x5F62;&#x6210;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF08;BMP&#xFF09;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;dorsomorphin&#x306F;&#x3001;VEGF&#xFF08;&#x8840;&#x7BA1;&#x5185;&#x76AE;&#x5897;&#x6B96;&#x56E0;&#x5B50;&#xFF09;2&#x578B;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#xFF08;Flk1/KDR&#xFF09;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066;&#x91CD;&#x8981;&#x306A; &#x26;quot;&#x30AA;&#x30D5;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x26;quot;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x8840;&#x7BA1;&#x65B0;&#x751F;&#x3092;&#x6DF7;&#x4E71;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002; BMP&#x304A;&#x3088;&#x3073;VEGF&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x4FE1;&#x53F7;&#x304C;&#x8840;&#x7BA1;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x306E;&#x3067;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;dorsomorphin&#x306E;&#x6297;&#x8840;&#x7BA1;&#x65B0;&#x751F;&#x52B9;&#x679C;&#x306F;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;BMP&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;VEGF&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x9006;&#x306B;&#x305D;&#x306E;&#x985E;&#x7E01;&#x4F53;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x3001;BMP&#x307E;&#x305F;&#x306F;VEGF&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x3082;&#x306E;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x3092;&#x5224;&#x65AD;&#x3057;&#x3088;&#x3046;&#x3068;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4E3B;&#x306B;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x306E;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x80DA;&#x306B;&#x53CA;&#x307C;&#x3059;&#x5F71;&#x97FF;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;dorsomorphin&#x985E;&#x7E01;&#x4F53;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x6D3B;&#x6027;&#x76F8;&#x95A2;&#xFF08;SAR&#xFF09;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x304B;&#x3064;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;BMP&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x9078;&#x629E;&#x7684;VEGF&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6392;&#x4ED6;&#x7684;&#x306B;BMP&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;VEGF&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x6A19;&#x7684;&#x3068;BMP&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306E;&#x4E00;&#x3064;&#x3001;DMH1&#x306F;&#x3001;BMP&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x304C;&#x8840;&#x7BA1;&#x65B0;&#x751F;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3057;&#x3001;&#x8840;&#x7BA1;&#x65B0;&#x751F;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3092;&#x4E2D;&#x65AD;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x80DA;&#x8EF8;&#x3092;dorsalized&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;&#x810A;&#x690E;&#x52D5;&#x7269;&#x3067;&#x5B9F;&#x884C;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x672C;&#x683C;&#x7684;&#x306A;SAR&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x4E00;&#x3064;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x751F;&#x4F53;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C6;&#x30AD;&#x30B9;&#x30C8;&#x5185;&#x3067;in vivo&#x3067;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x6D3B;&#x6027;&#x3068;&#x9078;&#x629E;&#x6027;&#x306E;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3092;&#x7D44;&#x307F;&#x8FBC;&#x3093;&#x3060;&#x85AC;&#x5264;&#x958B;&#x767A;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x9B45;&#x529B;&#x7684;&#x306A;&#x88DC;&#x5B8C;&#x7684;&#x306A;&#x30D7;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

in vivo&#x3067;Dorsomorphin&#x985E;&#x7E01;&#x4F53;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x6D3B;&#x6027;&#x76F8;&#x95A2;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x9078;&#x629E;&#x7684;VEGF&#x304A;&#x3088;&#x3073;BMP&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;

&#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790; &#xC2E0;&#xD638; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xC758; &#xCE58;&#xB8CC; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825;&#xC740; &#xC885;&#xC885; &#xC624;&#xD504; &#xB300;&#xC0C1; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC758;&#xD574; &#xC81C;&#xD55C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCD5C;&#xADFC;, zebrafish &#xBC30;&#xC544; dorsoventral &#xCD95; &#xAD50;&#xB780; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD654;&#xBA74;&#xC5D0;&#xC11C; dorsomorphin, &#xBF08; &#xC804;&#xCCB4;&#xC801; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (BMP) &#xC2DC;&#xADF8;&#xB110;&#xB9C1;&#xC758; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; &#xD30C;&#xC545;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xADF8; dorsomorphin&#xB294; VEGF (&#xD608;&#xAD00; &#xB0B4; &#xD53C; &#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790;) 2 &#xD615; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (Flk1/KDR)&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &quot;&#xB5A8;&#xC5B4;&#xC838; &#xD45C;&#xC801;&quot; &#xD6A8;&#xACFC; &#xBC0F; zebrafish &#xC2E0;&#xC0DD;&#xC744; &#xBC29;&#xD574; &#xBCF4;&#xAE30;. BMP &#xBC0F; VEGF &#xC2E0;&#xD638; &#xD608;&#xAD00; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;, &#xC774;&#xD6C4; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; dorsomorphin&#xC758; &#xD56D; &#xD608;&#xAD00; &#xC2E0;&#xC0DD; &#xD6A8;&#xACFC; BMP &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD558;&#xC9C0; VEGF &#xC2E0;&#xD638;&#xC640; &#xBC18;&#xB300;&#xB85C; &#xB300;&#xC0C1; analogues&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; BMP &#xB610;&#xB294; VEGF &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294; &#xC601;&#xD5A5; &#xB54C;&#xBB38; &#xC778;&#xC9C0; &#xD655;&#xC778; &#xD558;&#xACE0;&#xC790; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC8FC;&#xB85C; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; zebrafish &#xD0DC;&#xC544;&#xC5D0; &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294; &#xC601;&#xD5A5;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; dorsomorphin analogues&#xC758; &#xAD6C;&#xC870; &#xD65C;&#xB3D9; &#xAD00;&#xACC4; (SAR) &#xC5F0;&#xAD6C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801; VEGF &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xB85C; &#xC11C; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801;&#xC774; &#xACE0; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; BMP &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; &#xBC1C;&#xACAC;. BMP &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;, &#xB3C5;&#xC810;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; BMP&#xB9CC; &#xD558;&#xC9C0; VEGF &#xACBD;&#xB85C; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C;, DMH1 &#xC911; &#xD558;&#xB098;&#xB294; BMP &#xC2E0;&#xD638; angiogenic &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xAD00;&#xC5EC; &#xD558;&#xC9C0;&#xB294; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xB294; angiogenic &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xB97C; &#xBC29;&#xD574; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xACE0; &#xBC30;&#xC544; &#xCD95; dorsalized. &#xC774; &#xCC99;&#xCD94; &#xB3D9;&#xBB3C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC218;&#xD589; &#xD558;&#xB294; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xD480; &#xC2A4;&#xCF00;&#xC77C; SAR &#xC5F0;&#xAD6C; &#xC911; &#xD558;&#xB098; &#xC774;&#xBA70; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; bioactivity &#xBC0F; &#xC120;&#xD0DD;&#xB3C4; &#xC0B4;&#xC544;&#xC788;&#xB294; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xC758; &#xB9E5;&#xB77D;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD1B5;&#xD569; &#xD558;&#xB294; &#xC2E0;&#xC57D; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xB9E4;&#xB825;&#xC801;&#xC778; &#xBCF4;&#xC644; &#xD50C;&#xB7AB;&#xD3FC;&#xC73C;&#xB85C; zebrafish&#xC758; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900;&#xB2E4;.

Vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD6C;&#xC870; &#xD65C;&#xB3D9; &#xAD00;&#xACC4; &#xC5F0;&#xAD6C; dorsomorphin analogues&#xC758; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801; BMP &#xBC0F; VEGF &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

El potencial terap&#xE9;utico de los inhibidores de mol&#xE9;culas peque&#xF1;as de se&#xF1;alizaci&#xF3;n est&#xE1; a menudo limitada por efectos fuera de objetivo. Recientemente, en una pantalla para los compuestos que perturban el pez cebra eje dorsoventral embrionaria, hemos identificado dorsomorphin, el primer inhibidor selectivo de la prote&#xED;na morfogen&#xE9;tica &#xF3;sea (BMP) de se&#xF1;alizaci&#xF3;n. Aqu&#xED; nos muestran que dorsomorphin tiene importantes &#x26;quot;fuera de objetivo&#x26;quot; efectos contra el VEGF (factor de crecimiento endotelial vascular) receptor de tipo 2 (Flk1/KDR) e interrumpe la angiog&#xE9;nesis pez cebra. Dado que tanto el BMP y las se&#xF1;ales del VEGF son conocidos por estar involucrados en el desarrollo vascular, hemos tratado de determinar si los efectos antiangiog&#xE9;nicos dorsomorphin se deben a su impacto en el BMP o se&#xF1;ales del VEGF a trav&#xE9;s del desarrollo de los an&#xE1;logos que se dirigen a BMP, pero no la se&#xF1;alizaci&#xF3;n VEGF y viceversa. En una relaci&#xF3;n estructura-actividad (SAR) estudio de los an&#xE1;logos de dorsomorphin basadas principalmente en sus efectos sobre embriones de pez cebra en vivo, hemos identificado los inhibidores de BMP potente y altamente selectivo, as&#xED; como inhibidores selectivos de VEGF. Uno de los inhibidores de BMP, DMH1, que est&#xE9; dirigida exclusivamente a los formatos BMP, pero no la v&#xED;a del VEGF, dorsalized el eje embrionario sin interrumpir el proceso angiog&#xE9;nico, lo que demuestra que la se&#xF1;alizaci&#xF3;n de BMP no estuvo involucrado en el proceso angiog&#xE9;nico. Este es uno de los primeros estudios a gran escala SAR realizadas en los vertebrados y demuestra el potencial del pez cebra como una plataforma atractiva complementaria para el desarrollo de f&#xE1;rmacos que incorpora una evaluaci&#xF3;n de la bioactividad in vivo y la selectividad en el contexto de un organismo vivo.

En el estudio in vivo la relaci&#xF3;n estructura-actividad de los an&#xE1;logos Dorsomorphin Identifica selectivos inhibidores de VEGF y BMP

&#x80DA;&#x80CE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4F53;&#x5916;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x5206;&#x5316;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x901A;&#x8DEF;&#x63A7;&#x5236;&#x6A21;&#x5F0F;&#x5F62;&#x6210;&#x80DA;&#x80CE;&#x53D1;&#x751F;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x7684;&#xFF0C;&#x76F8;&#x540C;&#x7684;&#x5BC6;&#x94A5;&#x5B9E;&#x884C;&#x4E25;&#x683C;&#x7BA1;&#x5236;&#x3002;&#x6709;&#x9009;&#x62E9;&#x5730;&#x9488;&#x5BF9;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x53D1;&#x5C55;&#x7684;&#x9014;&#x5F84;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC; Wnt &#x548C; BMP &#x4FE1;&#x53F7; 5 &#x6708;&#x662F;&#x5B9D;&#x8D35;&#x7684;&#x5B9A;&#x5411;&#x5206;&#x5316;&#x7684;&#x80DA;&#x80CE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5411;&#x591A;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x7C7B;&#x578B;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5230;&#x76EE;&#x524D;&#x4E3A;&#x6B62;&#x53EA;&#x6709;&#x5C11;&#x6570;&#x8FD9;&#x7C7B;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x5DF2;&#x8868;&#x660E;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x5FC3;&#x810F;&#x5206;&#x5316;&#x7684;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A; XAV939&#xFF0C;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B0;&#x8FD1;&#x53D1;&#x73B0;&#x7684;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x6291;&#x5236;&#x5242; Wnt/&beta;-&#x8FDE;&#x73AF;&#x7D20;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3001; &#x5F3A;&#x52B2;&#x53EF;&#x4EE5;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x5C0F;&#x9F20;&#x80DA;&#x80CE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684; cardiomyogenesis&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; XAV939 &#x7684;&#x4E2D;&#x80DA;&#x5C42;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5F62;&#x6210;&#x540E;&#x7ACB;&#x5373;&#x53CA;&#x65F6;&#x7BA1;&#x7406;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x5411;&#x5FC3;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#xFF0C;&#x727A;&#x7272;&#x5176;&#x4ED6;&#x6D3E;&#x751F;&#x7684;&#x4E2D;&#x80DA;&#x5C42;&#x8C31;&#x7CFB;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x8840;&#x7BA1;&#x5185;&#x76AE;&#x3001; &#x5E73;&#x6ED1;&#x808C;&#xFF0C;&#x800C;&#x9020;&#x8840;&#x7684;&#x8C31;&#x7CFB;&#x3002;&#x9274;&#x4E8E;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;Wnt/&beta;-&#x8FDE;&#x73AF;&#x7D20;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5728;&#x80DA;&#x80CE;&#x53D1;&#x751F;&#x7684;&#x5F88;&#x591A;&#x65B9;&#x9762;&#x53D1;&#x6325;&#x548C;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x518D;&#x751F;&#xFF0C;XAV939 &#x662F;&#x5B9D;&#x8D35;&#x7684;&#x5316;&#x5B66;&#x63A2;&#x6D4B;&#x5668;&#x5256;&#x6790;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4F53;&#x5916;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x5206;&#x5316;&#xFF0C;&#x5E76;&#x63A2;&#x8BA8;&#x5728;&#x5404;&#x79CD;&#x4E0A;&#x4E0B;&#x6587;&#x4E2D;&#x7684;&#x518D;&#x751F;&#x6F5C;&#x80FD;&#x3002;

&#x80DA;&#x80CE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x4E00;&#x79CD;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x6291;&#x5236;&#x5242; Wnt/&beta;-&#x8FDE;&#x73AF;&#x7D20;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x7684;&#x5FC3;&#x810F;&#x611F;&#x5E94;&#x3002;

In vitro differentiation of embryonic stem cells is tightly regulated by the same key signaling pathways that control pattern formation during embryogenesis. Small molecules that selectively target these developmental pathways, including Wnt, and BMP signaling may be valuable for directing differentiation of pluripotent stem cells toward many desired tissue types, but to date only few such compounds have been shown to promote cardiac differentiation. Here, we show that XAV939, a recently discovered small molecule inhibitor of Wnt/Î²-catenin signaling, can robustly induce cardiomyogenesis in mouse ES cells. Our results suggest that a timely administration of XAV939 immediately following the formation of mesoderm progenitor cells promotes cardiomyogenic development at the expense of other mesoderm derived lineages, including the endothelial, smooth muscle, and hematopoietic lineages. Given the critical role that Wnt/Î²-catenin signaling plays in many aspects of embryogenesis and tissue regeneration, XAV939 is a valuable chemical probe to dissect in vitro differentiation of stem cells and to explore their regenerative potential in a variety of contexts.

Cardiac induction of embryonic stem cells by a small molecule inhibitor of Wnt/Î²-catenin signaling.

In vitro la diff&#xE9;renciation des cellules souches embryonnaires est &#xE9;troitement r&#xE9;gul&#xE9;e par les m&#xEA;mes voies de signalisation cl&#xE9;s que la formation de mod&#xE8;le de contr&#xF4;le au cours de l&#x26;#39;embryogen&#xE8;se. Les petites mol&#xE9;cules qui ciblent s&#xE9;lectivement ces voies de d&#xE9;veloppement, y compris la signalisation Wnt et BMP de signalisation peuvent &#xEA;tre utiles pour diriger la diff&#xE9;renciation des cellules souches pluripotentes vers de nombreux types de tissus d&#xE9;sir&#xE9;s, mais &#xE0; ce jour, seuls quelques compos&#xE9;s de ce type ont &#xE9;t&#xE9; montr&#xE9;s pour favoriser la diff&#xE9;renciation cardiaque. Ici, nous montrons que XAV939, un inhibiteur de mol&#xE9;cule r&#xE9;cemment d&#xE9;couverte petits de la signalisation Wnt / &#x3B2;-cat&#xE9;nine, peut induire une robuste cardiomyogenesis dans les cellules ES de souris. Nos r&#xE9;sultats sugg&#xE8;rent que l&#x26;#39;administration en temps opportun des XAV939 imm&#xE9;diatement apr&#xE8;s la formation de cellules prog&#xE9;nitrices m&#xE9;soderme favorise le d&#xE9;veloppement cardiomyog&#xE9;nique au d&#xE9;triment des lign&#xE9;es d&#xE9;riv&#xE9;es du m&#xE9;soderme autres, y compris l&#x26;#39;endoth&#xE9;lium, muscle lisse, et les lign&#xE9;es h&#xE9;matopo&#xEF;&#xE9;tiques. Compte tenu du r&#xF4;le essentiel que Wnt / &#x3B2;-cat&#xE9;nine joue dans de nombreux aspects de l&#x26;#39;embryogen&#xE8;se et la r&#xE9;g&#xE9;n&#xE9;ration des tissus, XAV939 est une sonde chimique pr&#xE9;cieux pour diss&#xE9;quer la diff&#xE9;renciation in vitro des cellules souches et &#xE0; explorer leur potentiel de r&#xE9;g&#xE9;n&#xE9;ration dans une vari&#xE9;t&#xE9; de contextes.

Induction cardiaque des cellules souches embryonnaires par un inhibiteur de petite mol&#xE9;cule de signalisation Wnt / &#x3B2;-cat&#xE9;nine

In-vitro-Differenzierung von embryonalen Stammzellen ist eng mit dem gleichen Schl&uuml;ssel Signalisierung Bahnen, die Strukturbildung w&auml;hrend der Embryogenese Steuern geregelt. Kleine Molek&uuml;le, die gezielt diese entwicklungsbedingte Bahnen, einschlie&szlig;lich Wnt und BMP Signalisierung Mai f&uuml;r die Leitung der Differenzierung der pluripotenten Stammzellen in Richtung viele gew&uuml;nschte Gewebearten wertvoll sein, aber bisher nur wenige solcher Verbindungen sind gezeigt worden, zur F&ouml;rderung der kardialen Differenzierung abzielen. Hier zeigen wir, dass XAV939, ein vor kurzem entdeckten niedermolekularer Inhibitor Wnt/&beta;-Catenin signalisieren, robust Cardiomyogenesis in Maus ES Zellen hervorrufen k&ouml;nnen. Unsere Ergebnisse legen nahe, dass eine rechtzeitige Gabe von XAV939 unmittelbar nach der Gr&uuml;ndung von Mesoderm Progenitorzellen kardiomyogenen Entwicklung auf Kosten der anderen Mesoderm abgeleiteten &Uuml;bertragungslinien, einschlie&szlig;lich der endothelial, glatte Muskulatur und h&auml;matopoetischen Linien f&ouml;rdert. Angesichts der wichtigen Rolle dieser Wnt/&beta;-Catenin signalisieren spielt in vielen Aspekten der Embryogenese und Geweberegeneration, XAV939 ist eine wertvolle chemische Sonde, in-vitro-Differenzierung von Stammzellen zu zergliedern und gemeinsam ihre regenerativen in einer Vielzahl von Kontexten untersuchen.

Kardiale Induktion von embryonalen Stammzellen durch ein niedermolekularer Inhibitor Wnt/&beta;-Catenin signalisieren.

Differenziazione in vitro di cellule staminali embrionali &egrave; strettamente regolato con la stessa chiave signaling pathways che controllano la formazione di pattern durante l&#39;embriogenesi. Piccole molecole che colpiscono selettivamente questi percorsi di sviluppo, tra cui Wnt e BMP segnalazione maggio essere preziosi per la regia di differenziazione delle cellule staminali pluripotenti verso molti tipi di tessuto desiderato, ma finora soltanto pochi tali composti hanno dimostrati di promuovere la differenziazione cardiache. Mostriamo qui, che XAV939, un inibitore di recente scoperta piccola molecola di segnalazione Wnt/&beta;-catenina, robustamente pu&ograve; indurre cardiomyogenesis in cellule di topo ES. I nostri risultati suggeriscono che una tempestiva somministrazione di XAV939 subito dopo la formazione di cellule progenitrici mesoderma promuove lo sviluppo di cardiomiogenici a scapito di altri lignaggi mesoderma derivato, tra cui l&#39;endotelio, tessuto muscolare liscio e lignaggi ematopoietici. Dato il ruolo critico che segnalazione Wnt/&beta;-catenina gioca in molti aspetti dell&#39;embriogenesi e rigenerazione dei tessuti, XAV939 &egrave; una preziosa sonda chimica per sezionare la differenziazione in vitro di cellule staminali e di esplorare il loro potenziale rigenerativo in una variet&agrave; di contesti.

Cardiaca ad induzione di cellule staminali embrionali da un inibitore di piccola molecola di segnalazione Wnt/&beta;-catenina.

in vitro&#x3067;&#x306E;&#x80DA;&#x6027;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x306F;&#x53B3;&#x5BC6;&#x306B;&#x80DA;&#x767A;&#x751F;&#x6642;&#x306B;&#x305D;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x5F62;&#x6210;&#x3068;&#x540C;&#x3058;&#x30AD;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3002; Wnt&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;BMP&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3001;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x306B;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x767A;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x6A19;&#x7684;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x306F;&#x3001;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x671B;&#x307E;&#x3057;&#x3044;&#x7D44;&#x7E54;&#x306E;&#x7A2E;&#x985E;&#x306B;&#x5411;&#x304B;&#x3063;&#x3066;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x3092;&#x6307;&#x793A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x4FA1;&#x5024;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x304C;&#x3001;&#x308F;&#x305A;&#x304B;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x304C;&#x5FC3;&#x81D3;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x6700;&#x65B0;&#x306E;&#x72B6;&#x614B;&#x306B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;XAV939&#x306F;&#x3001;&#x3B2;-&#x30AB;&#x30C6;&#x30CB;&#x30F3;/ Wnt&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x6700;&#x8FD1;&#x767A;&#x898B;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3001;&#x78BA;&#x5B9F;&#x306B;&#x3001;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;ES&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;cardiomyogenesis&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x4E2D;&#x80DA;&#x8449;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x76F4;&#x5F8C;XAV939&#x306E;&#x30BF;&#x30A4;&#x200B;&#x200B;&#x30E0;&#x30EA;&#x30FC;&#x306A;&#x6295;&#x4E0E;&#x304C;&#x8840;&#x7BA1;&#x5185;&#x76AE;&#x3001;&#x5E73;&#x6ED1;&#x7B4B;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x4ED6;&#x306E;&#x4E2D;&#x80DA;&#x8449;&#x7531;&#x6765;&#x306E;&#x7CFB;&#x7D71;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x9020;&#x8840;&#x7CFB;&#x7D71;&#x3092;&#x72A0;&#x7272;&#x306B;&#x3057;&#x3066;cardiomyogenic&#x958B;&#x767A;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3002;&#x793A;&#x5506;&#x3059;&#x308B;&#x80DA;&#x767A;&#x751F;&#x3084;&#x7D44;&#x7E54;&#x518D;&#x751F;&#x306E;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x5074;&#x9762;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x3B2;-&#x30AB;&#x30C6;&#x30CB;&#x30F3;/ Wnt&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x3001;XAV939&#x306F;&#x3001;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;in vitro&#x3067;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x306B;&#x89E3;&#x5256;&#x3057;&#x3001;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x72B6;&#x6CC1;&#x3067;&#x5F7C;&#x3089;&#x306E;&#x518D;&#x751F;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3092;&#x63A2;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x8CB4;&#x91CD;&#x306A;&#x5316;&#x5B66;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#x3B2;-&#x30AB;&#x30C6;&#x30CB;&#x30F3;/ Wnt&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x80DA;&#x6027;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5FC3;&#x7B4B;&#x8A98;&#x5C0E;

&#xBC30;&#xC544; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xCCB4; &#xC678; &#xBD84;&#xD654;&#xB294; &#xBC00;&#xC811; &#xD558; &#xAC8C; &#xAC19;&#xC740; &#xD0A4; &#xACBD;&#xB85C; embryogenesis &#xB3D9;&#xC548; &#xD328;&#xD134; &#xD615;&#xC131;&#xC744; &#xC81C;&#xC5B4; &#xD558;&#xB294; &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xADDC;&#xC81C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC120;&#xD0DD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; Wnt, BMP &#xC5F0;&#xCD9C;&#xC744; &#xD5A5;&#xD574; &#xB9CE;&#xC740; &#xC6D0;&#xD558;&#xB294; &#xC870;&#xC9C1; &#xC720;&#xD615;&#xC774; pluripotent &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xBD84;&#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xADC0;&#xC911; &#xD55C; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xACA8;&#xC6B0; &#xBA87; &#xC9C0;&#xAE08;&#xAE4C;&#xC9C0; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; &#xD64D;&#xBCF4; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; 5 &#xC6D4; &#xC2DC;&#xADF8;&#xB110;&#xB9C1; &#xB4F1;&#xC774; &#xBC1C;&#xB2EC; &#xACBD;&#xB85C; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xD558;&#xB294; &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; XAV939, Wnt/&beta;-catenin &#xC2E0;&#xD638;, &#xCD5C;&#xADFC;&#xC5D0; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB41C; &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790; &#xC5B5;&#xC81C; &#xBB3C; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; ES &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; cardiomyogenesis &#xC720;&#xB3C4; &#xACAC;&#xACE0; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xC989;&#xC2DC; mesoderm &#xC870;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xD615;&#xC131;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; xav939&#xC758; &#xC2DC;&#xC758; &#xC801;&#xC808; &#xD55C; &#xAD00;&#xB9AC; &#xB2E4;&#xB978; &#xD30C;&#xC0DD; mesoderm &#xACC4;&#xBCF4;, &#xB0B4; &#xD53C;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC;, &#xBD80;&#xB4DC;&#xB7EC;&#xC6B4; &#xADFC;&#xC721; &#xBE44;&#xC6A9;&#xACFC; hematopoietic lineages cardiomyogenic &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC744; &#xCD09;&#xC9C4; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xAC10;&#xC548;&#xD560; &#xB54C; embryogenesis&#xC758; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xCE21;&#xBA74;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD65C;&#xC57D; &#xD558;&#xB294; Wnt/&beta;-catenin &#xC2E0;&#xD638; &#xBC0F; &#xC870;&#xC9C1; &#xC7AC;&#xC0DD;, xav939&#xC740; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xCCB4; &#xC678; &#xBD84;&#xD654;&#xB97C; &#xD574; &#xBD80;&#xD558; &#xACE0; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC0C1;&#xD669;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC7AC;&#xC0DD; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825;&#xC744; &#xD0D0;&#xAD6C; &#xD558;&#xB294; &#xADC0;&#xC911; &#xD55C; &#xD654;&#xD559; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C;&#xB97C;.

Wnt/&beta;-catenin &#xC2E0;&#xD638;&#xC758; &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790; &#xC5B5;&#xC81C; &#xBB3C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBBF8; &#xBC1C;&#xB2EC; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xC720;&#xB3C4;.

En la diferenciaci&#xF3;n in vitro de c&#xE9;lulas madre embrionarias est&#xE1; estrechamente regulada por las mismas v&#xED;as de se&#xF1;alizaci&#xF3;n claves que la formaci&#xF3;n de patr&#xF3;n de control durante la embriog&#xE9;nesis. Las peque&#xF1;as mol&#xE9;culas que selectivamente se dirigen a estas v&#xED;as de desarrollo, incluyendo Wnt y de se&#xF1;alizaci&#xF3;n BMP puede ser valiosa para dirigir la diferenciaci&#xF3;n de c&#xE9;lulas madre pluripotentes a muchos tipos de tejidos deseados, pero hasta la fecha s&#xF3;lo pocos de tales compuestos se ha demostrado que promover la diferenciaci&#xF3;n card&#xED;aca. Aqu&#xED;, mostramos que XAV939, un inhibidor de mol&#xE9;cula peque&#xF1;a descubierto recientemente de la se&#xF1;alizaci&#xF3;n de Wnt / &#x3B2;-catenina, robusta puede inducir cardiomyogenesis en c&#xE9;lulas madre embrionarias de rat&#xF3;n. Nuestros resultados sugieren que la administraci&#xF3;n oportuna de XAV939 inmediatamente despu&#xE9;s de la formaci&#xF3;n de c&#xE9;lulas progenitoras mesodermo promueve el desarrollo cardiomyogenic a expensas de los linajes mesod&#xE9;rmicos otros derivados, incluyendo el m&#xFA;sculo endotelial, lisas, y linajes hematopoy&#xE9;ticos. Dado el papel cr&#xED;tico que Wnt / &#x3B2;-catenina de se&#xF1;alizaci&#xF3;n de obras en muchos aspectos de la embriog&#xE9;nesis y la regeneraci&#xF3;n de tejidos, XAV939 es una sonda qu&#xED;mica valiosa para diseccionar la diferenciaci&#xF3;n in vitro de las c&#xE9;lulas madre y explorar su potencial regenerador en una variedad de contextos.

Inducci&#xF3;n card&#xED;aca de c&#xE9;lulas madre embrionarias por un inhibidor de mol&#xE9;cula peque&#xF1;a de Wnt / &#x3B2;-catenina de se&#xF1;alizaci&#xF3;n

&#x56F4;&#x7ED5;&#x4E34;&#x5E8A;&#x80DA;&#x80CE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE; (&#x80DA;&#x80CE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF09; &#x548C;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x591A;&#x80FD;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE; &#xFF08;&#x9B54;&#x9B3C;&#xFF09; &#x7684;&#x6F5C;&#x529B;&#x7684;&#x70ED;&#x60C5;&#x88AB;&#x94A2;&#x5316;&#x73BB;&#x7483;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x95EE;&#x9898;&#xFF0C;&#x5176;&#x5B89;&#x5168;&#x6027;&#x3001; &#x6709;&#x6548;&#x6027;&#x548C;&#x957F;&#x671F;&#x5229;&#x76CA;&#x8FC4;&#x4ECA;&#x4E3A;&#x6B62;&#x6B21;&#x4F18;&#x7684;&#x4E8B;&#x5B9E;&#x3002;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x53EF;&#x80FD;&#x53EF;&#x4EE5;&#x51CF;&#x8F7B;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x95EE;&#x9898;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x548C;&#x518D;&#x751F;&#x7597;&#x6CD5;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x8DEF;&#x53E3;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x6B21;&#x5BA1;&#x67E5;&#x4E2D;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C06;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x91CD;&#x8981;&#x9886;&#x57DF;&#x4E0E;&#x7B2C;&#x4E00;&#x4EE3;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x5728;&#x518D;&#x751F;&#x7684;&#x4E0A;&#x4E0B;&#x6587;&#x4E2D;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x6700;&#x65B0;&#x8FDB;&#x5C55;&#x3002;&#x76EE;&#x524D;&#x7684;&#x5316;&#x5B66;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76;&#x5C06;&#x4E3A;&#x4ECA;&#x540E;&#x591A;&#x5B66;&#x79D1;&#x534F;&#x4F5C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x539F;&#x578B;&#x548C;&#x6539;&#x5584;&#x57FA;&#x4E8E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7597;&#x6CD5;&#x7684;&#x4E34;&#x5E8A;&#x7597;&#x6548;&#x3002;

&#x84C4;&#x70ED;&#x5F0F;&#x5316;&#x5B66;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#xFF1A; &#x5F53;&#x524D;&#x9762;&#x4E34;&#x7684;&#x6311;&#x6218;&#x548C;&#x672A;&#x6765;&#x7684;&#x6F5C;&#x529B;&#x3002;

The enthusiasm surrounding the clinical potential of embryonic stem cells (ESCs) and induced pluripotent stem cells (iPSCs) is tempered by the fact that key issues regarding their safety, efficacy, and long-term benefits have thus far been suboptimal. Small molecules can potentially relieve these problems at major junctions of stem cell biology and regenerative therapy. In this review we will introduce recent advances in these important areas and the first generation of small molecules used in the regenerative context. Current chemical biology studies will provide the archetype for future interdisciplinary collaborations and improve clinical benefits of cell-based therapies.

Regenerative chemical biology: current challenges and future potential.

L&#x26;#39;enthousiasme entourant le potentiel clinique des cellules souches embryonnaires (CSE) et cellules souches pluripotentes induites (CISP) est temp&#xE9;r&#xE9; par le fait que les questions cl&#xE9;s concernant leur innocuit&#xE9;, l&#x26;#39;efficacit&#xE9; et avantages &#xE0; long terme ont &#xE9;t&#xE9; jusqu&#x26;#39;ici sous-optimale. Les petites mol&#xE9;cules peuvent potentiellement soulager ces probl&#xE8;mes au niveau des jonctions principales de biologie des cellules souches et la th&#xE9;rapie r&#xE9;g&#xE9;n&#xE9;rative. Dans cette revue, nous pr&#xE9;sentera les derniers progr&#xE8;s dans ces domaines importants et la premi&#xE8;re g&#xE9;n&#xE9;ration de petites mol&#xE9;cules utilis&#xE9;es dans le contexte de r&#xE9;g&#xE9;n&#xE9;ration. Actuelles des &#xE9;tudes de biologie chimique fournira l&#x26;#39;arch&#xE9;type de futures collaborations interdisciplinaires et am&#xE9;liorer les prestations cliniques de th&#xE9;rapies cellulaires.

Chemical Biology r&#xE9;g&#xE9;n&#xE9;ratrice: les d&#xE9;fis actuels et le potentiel futur

Die Begeisterung rund um das klinische Potenzial von embryonalen Stammzellen (WSR) und induzierten pluripotenten Stammzellen (iPSCs) wird durch die Tatsache gemildert, dass Schl&uuml;sselfragen hinsichtlich ihrer Sicherheit, Wirksamkeit und langfristige Vorteile bisher suboptimale gewesen. Kleine Molek&uuml;le k&ouml;nnen m&ouml;glicherweise diese Probleme an gro&szlig;en Kreuzungen der Stammzellbiologie und regenerative Therapie lindern. In diesem Bericht werden wir die j&uuml;ngsten Fortschritte in diesen wichtigen Bereichen und die erste Generation von kleinen Molek&uuml;len verwendet im Zusammenhang mit regenerativen vorstellen. Aktuelle chemische Biologie Studien bieten den Archetyp f&uuml;r zuk&uuml;nftige interdisziplin&auml;re Kooperationen und klinische Nutzen der zellbasierte Therapien verbessern.

Regenerative chemische Biologie: aktuelle Herausforderungen und Zukunftspotenzial.

L&#39;entusiasmo che circonda il potenziale clinico di cellule staminali embrionali (CES) e cellule staminali pluripotenti indotte (iPSCs) &egrave; mitigata dal fatto che le questioni chiave per quanto riguarda la loro sicurezza, efficacia e benefici a lungo termine sono stati finora non ottimali. Piccole molecole potenzialmente possono alleviare questi problemi agli incroci principali della biologia delle cellule staminali e terapia rigenerativa. In questa recensione vi presenteremo i recenti progressi in queste aree importanti e la prima generazione di piccole molecole utilizzate in ambito rigenerativo. Gli studi di biologia chimica corso fornir&agrave; l&#39;archetipo per future collaborazioni interdisciplinari e migliorare i benefici clinici di terapie cell-based.

Rigenerativa biologia chimica: sfide attuali e future potenzialit&agrave;.

&#x80DA;&#x6027;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#xFF08;ESC&#x306F;&#xFF09;&#x3084;&#x4EBA;&#x5DE5;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#xFF08;&#x6027;IPSC&#xFF09;&#x306E;&#x81E8;&#x5E8A;&#x7684;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3092;&#x3081;&#x3050;&#x308B;&#x71B1;&#x72C2;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x5B89;&#x5168;&#x6027;&#x3001;&#x6709;&#x52B9;&#x6027;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x9577;&#x671F;&#x7684;&#x306A;&#x5229;&#x76CA;&#x306B;&#x95A2;&#x3059;&#x308B;&#x91CD;&#x8981;&#x554F;&#x984C;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x307E;&#x3067;&#x306E;&#x6B21;&#x5584;&#x306E;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x4E8B;&#x5B9F;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x935B;&#x3048;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x306F;&#x3001;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x3068;&#x518D;&#x751F;&#x6CBB;&#x7642;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x63A5;&#x5408;&#x90E8;&#x3067;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x554F;&#x984C;&#x3092;&#x7DE9;&#x548C;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30EC;&#x30D3;&#x30E5;&#x30FC;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x9818;&#x57DF;&#x3068;&#x56DE;&#x751F;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C6;&#x30AD;&#x30B9;&#x30C8;&#x3067;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x7B2C;&#x4E00;&#x4E16;&#x4EE3;&#x306E;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x9032;&#x6B69;&#x3092;&#x7D39;&#x4ECB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x30B1;&#x30DF;&#x30AB;&#x30EB;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30ED;&#x30B8;&#x30FC;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x3001;&#x4ECA;&#x5F8C;&#x306E;&#x5B66;&#x969B;&#x7684;&#x306A;&#x30B3;&#x30E9;&#x30DC;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x539F;&#x578B;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x6CD5;&#x306E;&#x81E8;&#x5E8A;&#x7684;&#x30D9;&#x30CD;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x5411;&#x4E0A;&#x3055;&#x305B;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x518D;&#x751F;&#x30B1;&#x30DF;&#x30AB;&#x30EB;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30ED;&#x30B8;&#x30FC;&#xFF1A;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x8AB2;&#x984C;&#x3068;&#x5C06;&#x6765;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;

&#xC5F4;&#xC815; (ESCs) &#xBC30;&#xC544; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xC720;&#xB3C4; &#xB9CC;&#xB2A5; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; (iPSCs)&#xC758; &#xC784;&#xC0C1; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825;&#xC744; &#xB458;&#xB7EC;&#xC2FC; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC548;&#xC804;, &#xD6A8;&#xB2A5;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC7A5;&#xAE30;&#xC801;&#xC778; &#xD61C;&#xD0DD;&#xC5D0; &#xAD00;&#xD55C; &#xC8FC;&#xC694; &#xC774;&#xC288; &#xCC28;&#xC120;&#xAE4C;&#xC9C0; &#xC654;&#xB2E4;&#xB294; &#xC0AC;&#xC2E4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB2E8;&#xB828; &#xB41C;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;&#xACFC; &#xC7AC;&#xC0DD; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; &#xAD50;&#xCC28;&#xC810;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBB38;&#xC81C;&#xB97C; &#xD574;&#xC18C; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xB9AC;&#xBDF0;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC774; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC601;&#xC5ED; &#xBC0F; &#xC7AC;&#xC0DD; &#xCEE8;&#xD14D;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xB294; &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC790;&#xC758; 1 &#xC138;&#xB300;&#xC758; &#xCD5C;&#xADFC; &#xBC1C;&#xC804; &#xC18C;&#xAC1C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD604;&#xC7AC; &#xD654;&#xD559; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xBBF8;&#xB798; &#xD559; &#xC81C; &#xC801;&#xC778; &#xD611;&#xC5C5;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xC0C1;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558; &#xACE0; &#xC138;&#xD3EC; &#xAE30;&#xBC18; &#xCE58;&#xB8CC;&#xBC95;&#xC758; &#xC784;&#xC0C1; &#xD61C;&#xD0DD;&#xC744; &#xAC1C;&#xC120; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC7AC;&#xC0DD; &#xD654;&#xD559; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;: &#xD604;&#xC7AC;&#xC758; &#xB3C4;&#xC804;&#xACFC; &#xBBF8;&#xB798;&#xC758; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825;.

El entusiasmo que rodea el potencial cl&#xED;nico de c&#xE9;lulas madre embrionarias (CME) y c&#xE9;lulas madre pluripotentes inducidas (iPSCs) se ve atenuado por el hecho de que las cuestiones clave en relaci&#xF3;n con su seguridad, eficacia y beneficios a largo plazo han sido hasta el momento &#xF3;ptimo. Las peque&#xF1;as mol&#xE9;culas potencialmente puede aliviar estos problemas en los cruces m&#xE1;s importantes de la biolog&#xED;a de c&#xE9;lulas madre y terapia regenerativa. En esta revisi&#xF3;n vamos a presentar los &#xFA;ltimos avances en estas importantes &#xE1;reas y la primera generaci&#xF3;n de mol&#xE9;culas peque&#xF1;as que se utilizan en el contexto de regeneraci&#xF3;n. Los estudios actuales de la biolog&#xED;a qu&#xED;mica proporcionar&#xE1; el arquetipo para las futuras colaboraciones interdisciplinarias y mejorar los beneficios cl&#xED;nicos de terapias basadas en c&#xE9;lulas.

Regenerativa Biolog&#xED;a Qu&#xED;mica: Desaf&#xED;os actuales y posibilidades futuras

&#x8840;&#x7BA1;&#x65B0;&#x751F;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x9884;&#x5148;&#x5B58;&#x5728;&#x7684;&#x8239;&#x53EA;&#xFF0C;&#x65B0;&#x8840;&#x7BA1;&#x7684;&#x5F62;&#x6210;&#x662F;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x751F;&#x7406;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x548C;&#x8BB8;&#x591A;&#x75C5;&#x7406;&#x6761;&#x4EF6;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x3002;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x53D1;&#x5C55;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x8840;&#x7BA1;&#x751F;&#x6210;&#x5C06;&#x6269;&#x5C55;&#x5230;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x8840;&#x7BA1;&#x7F51;&#x7EDC;&#x6240;&#x5FC5;&#x9700;&#x7684;&#x9AD8;&#x6548;&#x6C27;&#x4F20;&#x9012;&#x7684;&#x8F74;&#x5411;&#x8239;&#x53EA;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x7A7A;&#x95F4;&#x5E76;&#x5217;&#x80CC;&#x4E3B;&#x52A8;&#x8109;&#x548C;&#x8F74;&#x5411;&#x7684;&#x9759;&#x8109;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x8239;&#x53EA;&#x4ECE;&#x521D;&#x59CB;&#x8840;&#x7BA1;&#x751F;&#x6210;&#x8C46;&#x82BD;&#x6269;&#x5C55;&#x5728;&#x76F8;&#x53CD;&#x7684;&#x65B9;&#x5411;&#xFF0C;&#x6307;&#x793A;&#x4E0D;&#x540C;&#x7EBF;&#x7D22;&#x53EF;&#x89C4;&#x7BA1;&#x7684;&#x8F74;&#x5411;&#x8239;&#x53EA;&#x7684;&#x8840;&#x7BA1;&#x751F;&#x6210;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x4ECE;&#x80CC;&#x4E3B;&#x52A8;&#x8109;&#x8840;&#x7BA1;&#x751F;&#x6210;&#x8C46;&#x82BD;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x8840;&#x7BA1;&#x5185;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50; (Vegf-A) &#x4FE1;&#x53F7;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x8981;&#x54CD;&#x5E94;&#x9AA8;&#x5F62;&#x6001;&#x53D1;&#x751F;&#x86CB;&#x767D; (Bmp) &#x4FE1;&#x53F7;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x65B0;&#x82BD;&#x7684;&#x8F74;&#x5411;&#x7684;&#x9759;&#x8109;&#x53D7; Bmp &#x4FE1;&#x53F7;&#x72EC;&#x7ACB; Vegf-A &#x4FE1;&#x53F7;&#xFF0C;&#x8868;&#x660E; Bmp &#x65E9;&#x671F;&#x8840;&#x7BA1;&#x53D1;&#x80B2;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E00;&#x79CD;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684;&#x9759;&#x8109;&#x8840;&#x7BA1;&#x751F;&#x6210;&#x63D0;&#x793A;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x652F;&#x6301;&#x8303;&#x5F0F;&#xFF0C;&#x5373;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8C03;&#x8282;&#x53D1;&#x82BD;&#x4ECE;&#x8F74;&#x5411;&#x9759;&#x8109;&#x548C;&#x80CC;&#x4E3B;&#x52A8;&#x8109;&#x8840;&#x7BA1;&#x751F;&#x6210;&#x7684;&#x4E0D;&#x540C;&#x65B9;&#x6848;&#xFF0C;&#x5E76;&#x6307;&#x793A;&#x8868;&#x660E;&#x975E;&#x5747;&#x8D28;&#x6027;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x8840;&#x7BA1;&#x7F51;&#x7EDC;&#x7684;&#x590D;&#x6742;&#x6027;&#x3002;

&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x8C03;&#x8282;&#x53D1;&#x82BD;&#x4ECE;&#x80CC;&#x4E3B;&#x52A8;&#x8109;&#x548C;&#x8F74;&#x5411;&#x7684;&#x9759;&#x8109;&#x8840;&#x7BA1;&#x3002;

Angiogenesis, the formation of new blood vessels from pre-existing vessels, is critical to most physiological processes and many pathological conditions. During zebrafish development, angiogenesis expands the axial vessels into a complex vascular network that is necessary for efficient oxygen delivery. Although the dorsal aorta and the axial vein are spatially juxtaposed, the initial angiogenic sprouts from these vessels extend in opposite directions, indicating that distinct cues may regulate angiogenesis of the axial vessels. We found that angiogenic sprouts from the dorsal aorta are dependent on vascular endothelial growth factor A (Vegf-A) signalling, and do not respond to bone morphogenetic protein (Bmp) signals. In contrast, sprouts from the axial vein are regulated by Bmp signalling independently of Vegf-A signals, indicating that Bmp is a vein-specific angiogenic cue during early vascular development. Our results support a paradigm whereby different signals regulate distinct programmes of sprouting angiogenesis from the axial vein and dorsal aorta, and indicate that signalling heterogeneity contributes to the complexity of vascular networks.

Distinct signalling pathways regulate sprouting angiogenesis from the dorsal aorta and the axial vein.

L&#x26;#39;angiogen&#xE8;se, la formation de nouveaux vaisseaux sanguins &#xE0; partir de vaisseaux pr&#xE9;-existants, est essentielle &#xE0; la plupart des processus physiologiques et pathologiques de nombreuses conditions. Au cours du d&#xE9;veloppement du poisson z&#xE8;bre, l&#x26;#39;angiogen&#xE8;se dilate les vaisseaux axiaux dans un r&#xE9;seau vasculaire complexe qui est n&#xE9;cessaire pour la livraison d&#x26;#39;oxyg&#xE8;ne efficace. Bien que l&#x26;#39;aorte dorsale et la veine axiale sont spatialement juxtapos&#xE9;s, les germes initiales angiog&#xE9;niques de ces r&#xE9;cipients s&#x26;#39;&#xE9;tendent dans des directions oppos&#xE9;es, ce qui indique que des signaux distincts peut r&#xE9;guler l&#x26;#39;angiogen&#xE8;se des navires axiales. Nous avons constat&#xE9; que les choux de angiog&#xE9;niques de l&#x26;#39;aorte dorsale sont d&#xE9;pend du facteur de croissance endoth&#xE9;lial vasculaire A de signalisation (VEGF-A), et ne r&#xE9;pondent pas aux prot&#xE9;ines morphog&#xE9;n&#xE9;tiques osseuses (BMP) signaux. En revanche, les choux de la veine axiale sont r&#xE9;gis par Bmp de signalisation ind&#xE9;pendamment du VEGF-A signaux, indiquant que Bmp est une veine sp&#xE9;cifique cue angiog&#xE9;nique pendant le d&#xE9;veloppement vasculaire pr&#xE9;coce. Nos r&#xE9;sultats appuient un paradigme dans lequel des signaux diff&#xE9;rents r&#xE9;glementer les programmes distincts de l&#x26;#39;angiogen&#xE8;se dans la veine axiale et de l&#x26;#39;aorte dorsale, et indiquer que l&#x26;#39;h&#xE9;t&#xE9;rog&#xE9;n&#xE9;it&#xE9; de signalisation contribue &#xE0; la complexit&#xE9; des r&#xE9;seaux vasculaires.

Distinct VOIES DE SIGNALISATION R&#xE9;glementer l&#x26;#39;angiogen&#xE8;se germination de l&#x26;#39;aorte et la veine dorsale axiale

Angiogenese, die Bildung neuer Blutgef&auml;&szlig;e aus bereits vorhandenen Schiffe, ist entscheidend f&uuml;r die meisten physiologischen Prozesse und viele pathologische Zust&auml;nde. W&auml;hrend der Zebrafisch Entwicklung expandiert Angiogenese axial Schiffe in einem komplexen vaskul&auml;re Netzwerk, das f&uuml;r effiziente Sauerstoffzufuhr notwendig. Obwohl der dorsalen Aorta und der axialen Ader r&auml;umlich nebeneinander sind, erweitern die ersten Angiogenese-Sprossen aus dieser Schiffe in entgegengesetzte Richtungen, die darauf hinweist, dass unterschiedliche Signale Angiogenese der axialen Schiffe Regeln k&ouml;nnen. Wir fanden, dass angiogenen Sprossen aus der dorsalen Aorta sind abh&auml;ngig von vaskul&auml;ren endothelialen Wachstumsfaktor ein (Vegf-A) signalisieren, und nicht um bone morphogenetic Proteins (Bmp) Signale reagieren. Im Gegensatz dazu sind Sprossen aus der axialen Ader von Bmp Signalisierung unabh&auml;ngig von Vegf-A-Signale, die darauf hinweist, dass Bmp eine Vene-spezifische angiogenen Cue w&auml;hrend der fr&uuml;hen vaskul&auml;ren Entwicklung reguliert. Unsere Ergebnisse unterst&uuml;tzen ein Paradigma, wobei unterschiedliche Signale unterschiedliche Programme der Angiogenese aus der axialen Vene und dorsalen Aorta sprie&szlig;en regulieren, und darauf hinweisen, dass die Signalisierung Heterogenit&auml;t der Komplexit&auml;t von vaskul&auml;ren Netzwerken beitr&auml;gt.

Unterschiedliche Signalwege regulieren Sprie&szlig;ende Angiogenese aus der dorsalen Aorta und der axialen Ader.

L&#39;angiogenesi, la formazione di nuovi vasi sanguigni dai vasi preesistenti, &egrave; fondamentale per la maggior parte dei processi fisiologici e molte condizioni patologiche. Durante lo sviluppo dello zebrafish, angiogenesi si espande i vasi assiali in una complessa rete vascolare che &egrave; necessaria per la consegna dell&#39;ossigeno efficiente. Anche se l&#39;aorta dorsale e la vena assiale sono spazialmente giustapposti, i germogli di angiogenic iniziale da questi vasi estendono in direzioni opposte, che indica che spunti distinti possono regolare l&#39;angiogenesi dei vasi assiali. Abbiamo trovato che angiogenic germogli dall&#39;aorta dorsale dipendono dal fattore di crescita endoteliale vascolare una segnalazione (Vegf-A) e non rispondono per bone morphogenetic protein (Bmp) segnali. Al contrario, germogli dalla vena assiale sono regolati da Bmp segnalazione indipendentemente dai segnali Vegf-A, che indica che Bmp &egrave; un cue angiogenic vena specifici durante lo sviluppo iniziale di vascolare. I nostri risultati supportano un paradigma per cui diversi segnali regolano distinti programmi di germogliatura angiogenesi dalla vena assiale e aorta dorsale e indicano che segnalazione eterogeneit&agrave; contribuisce alla complessit&agrave; delle reti vascolari.

Distinti percorsi di segnalazione regolano l&#39;angiogenesi germogliatura dall&#39;aorta dorsale e la vena assiale.

&#x8840;&#x7BA1;&#x65B0;&#x751F;&#x3001;&#x65E2;&#x5B58;&#x306E;&#x8840;&#x7BA1;&#x304B;&#x200B;&#x200B;&#x3089;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x8840;&#x7BA1;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x306F;&#x3001;&#x6700;&#x3082;&#x751F;&#x7406;&#x7684;&#x306A;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3068;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x75C5;&#x7684;&#x72B6;&#x614B;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x4E2D;&#x306B;&#x3001;&#x8840;&#x7BA1;&#x65B0;&#x751F;&#x306F;&#x3001;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x9178;&#x7D20;&#x4F9B;&#x7D66;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x8840;&#x7BA1;&#x7DB2;&#x306B;&#x8EF8;&#x65B9;&#x5411;&#x306E;&#x8840;&#x7BA1;&#x3092;&#x62E1;&#x5F35;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x80CC;&#x5074;&#x5927;&#x52D5;&#x8108;&#x3068;&#x8EF8;&#x65B9;&#x5411;&#x306E;&#x9759;&#x8108;&#x304C;&#x7A7A;&#x9593;&#x7684;&#x306B;&#x4E26;&#x7F6E;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x8840;&#x7BA1;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x8840;&#x7BA1;&#x65B0;&#x751F;&#x3082;&#x3084;&#x3057;&#x306F;&#x3001;&#x500B;&#x5225;&#x306E;&#x624B;&#x304C;&#x304B;&#x308A;&#x306F;&#x3001;&#x8EF8;&#x65B9;&#x5411;&#x306E;&#x8840;&#x7BA1;&#x306E;&#x65B0;&#x751F;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3001;&#x53CD;&#x5BFE;&#x65B9;&#x5411;&#x306B;&#x5EF6;&#x3073;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x80CC;&#x5074;&#x5927;&#x52D5;&#x8108;&#x304B;&#x3089;&#x8840;&#x7BA1;&#x65B0;&#x751F;&#x3082;&#x3084;&#x3057;&#x306F;&#x3001;&#x8840;&#x7BA1;&#x5185;&#x76AE;&#x5897;&#x6B96;&#x56E0;&#x5B50;&#xFF08;VEGF-A&#xFF09;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5224;&#x660E;&#x3057;&#x3001;&#x9AA8;&#x5F62;&#x6210;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF08;BMP&#xFF09;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x306B;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3057;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x8EF8;&#x65B9;&#x5411;&#x306E;&#x9759;&#x8108;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x3082;&#x3084;&#x3057;&#x306F;&#x3001;BMP&#x306F;BMP&#x3001;&#x65E9;&#x671F;&#x8840;&#x7BA1;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x4E2D;&#x306B;&#x9759;&#x8108;&#x7279;&#x6709;&#x306E;&#x8840;&#x7BA1;&#x65B0;&#x751F;&#x30AD;&#x30E5;&#x30FC;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3001;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x3066;VEGF-A&#x4FE1;&#x53F7;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x4FE1;&#x53F7;&#x304C;&#x8EF8;&#x9759;&#x8108;&#x80CC;&#x5074;&#x5927;&#x52D5;&#x8108;&#x304B;&#x3089;&#x8840;&#x7BA1;&#x65B0;&#x751F;&#x3092;&#x840C;&#x82BD;&#x306E;&#x500B;&#x5225;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x30D1;&#x30E9;&#x30C0;&#x30A4;&#x30E0;&#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x3066;&#x304A;&#x308A;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x7570;&#x8CEA;&#x6027;&#x8840;&#x7BA1;&#x7DB2;&#x306E;&#x8907;&#x96D1;&#x3055;&#x306B;&#x5BC4;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306F;&#x80CC;&#x5074;&#x5927;&#x52D5;&#x8108;&#x3068;&#x8EF8;&#x9759;&#x8108;&#x304B;&#x3089;&#x767A;&#x82BD;&#x8840;&#x7BA1;&#x65B0;&#x751F;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;

&#xC2E0;&#xC0DD;, &#xAE30;&#xC874; &#xD608;&#xAD00;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xD608;&#xAD00;&#xC758; &#xD615;&#xC131;&#xC740; &#xBCD1; &#xC801;&#xC778; &#xC870;&#xAC74;&#xACFC; &#xB9CE;&#xC740; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC758; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Zebrafish &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC2E0;&#xC0DD; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xC0B0;&#xC18C; &#xACF5;&#xAE09;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xD608;&#xAD00; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C;&#xB85C; &#xCD95; &#xD608;&#xAD00;&#xC744; &#xD655;&#xC7A5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB4F1; &#xCABD; &#xB300;&#xB3D9;&#xB9E5; &#xBC0F; &#xCD95; &#xC815; &#xB9E5;&#xC740; &#xACF5;&#xAC04;&#xC801; juxtaposed, &#xBE44;&#xB85D; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xD608;&#xAD00;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCD08;&#xAE30; angiogenic &#xCF69;&#xB098;&#xBB3C; &#xB69C;&#xB837;&#xD55C; &#xB2E8;&#xC11C; &#xCD95; &#xD608;&#xAD00;&#xC758; &#xC2E0;&#xC0DD;&#xC744; &#xC870;&#xC808; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xBC18;&#xB300; &#xBC29;&#xD5A5;&#xC73C;&#xB85C; &#xD655;&#xC7A5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBC1C;&#xACAC; angiogenic &#xCF69;&#xB098;&#xBB3C; &#xB4F1; &#xCABD; &#xB300;&#xB3D9;&#xB9E5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD608;&#xAD00; &#xB0B4; &#xD53C; &#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790; (Vegf A) &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xC758;&#xC874; &#xD558;&#xB294; &#xBF08;&#xAC00; &#xC804;&#xCCB4;&#xC801; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (Bmp) &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xC751;&#xB2F5; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBC18;&#xBA74;, &#xCD95; &#xC815; &#xB9E5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCF69;&#xB098;&#xBB3C; Vegf A &#xC2E0;&#xD638; &#xBCC4;&#xB3C4;&#xB85C; &#xC2E0;&#xD638;, Bmp&#xB294; &#xCD08;&#xAE30; &#xD608;&#xAD00; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xC911; &#xC815; &#xB9E5; &#xAD00;&#xB828; angiogenic &#xD050; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; Bmp&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xADDC;&#xC81C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xD328;&#xB7EC;&#xB2E4;&#xC784; &#xADF8;&#xAC83;&#xC5D0; &#xC758;&#xD558;&#xC5EC; &#xB2E4;&#xB978; &#xC2E0;&#xD638; &#xC870;&#xC808; &#xCD95; &#xC815; &#xB9E5;&#xACFC; &#xB4F1; &#xCABD; &#xB300;&#xB3D9;&#xB9E5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD608;&#xAD00; &#xC2E0;&#xC0DD;&#xC744; &#xB3CB; &#xC544;&#xC758; &#xACE0;&#xC720; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC744; &#xC9C0;&#xC6D0; &#xD558; &#xACE0;&#xB294; &#xD608;&#xAD00; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C;&#xC758; &#xBCF5;&#xC7A1;&#xC131;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC; &#xD558; &#xACE0;&#xC774; &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB69C;&#xB837;&#xD55C; &#xC2E0;&#xD638; &#xACBD;&#xB85C; &#xB4F1; &#xCABD; &#xB300;&#xB3D9;&#xB9E5; &#xCD95; &#xC815; &#xB9E5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB3CB; &#xC544; &#xC2E0;&#xC0DD;&#xC744; &#xC870;&#xC808;.

La angiog&#xE9;nesis, la formaci&#xF3;n de nuevos vasos sangu&#xED;neos de vasos preexistentes, es cr&#xED;tico para procesos m&#xE1;s fisiol&#xF3;gicos y muchos estados patol&#xF3;gicos. Durante el desarrollo de pez cebra, la angiog&#xE9;nesis expande los vasos axiales en una compleja red vascular que es necesario para el suministro de ox&#xED;geno eficiente. Aunque la aorta y la vena dorsal axial est&#xE1;n espacialmente yuxtapuestos, los brotes iniciales angiog&#xE9;nicos de estos vasos se extienden en direcciones opuestas, lo que indica que las se&#xF1;ales distintas pueden regular la angiog&#xE9;nesis de los vasos axiales. Hemos encontrado que los brotes angiog&#xE9;nicos de la aorta dorsal dependen del factor de crecimiento endotelial vascular A se&#xF1;alizaci&#xF3;n (VEGF-A), y no responden a la prote&#xED;na morfogen&#xE9;tica &#xF3;sea (BMP) se&#xF1;ales. Por el contrario, brota de la vena axial est&#xE1;n regulados por la se&#xF1;alizaci&#xF3;n de BMP independientemente de VEGF-A las se&#xF1;ales, lo que indica que la BMP es una vena espec&#xED;fica se&#xF1;al angiog&#xE9;nica en el desarrollo vascular temprano. Nuestros resultados apoyan un paradigma por el cual las se&#xF1;ales de diferentes regular distintos programas de germinaci&#xF3;n angiog&#xE9;nesis de la vena axial y la aorta dorsal, e indican que la heterogeneidad de se&#xF1;alizaci&#xF3;n contribuye a la complejidad de las redes vasculares.

Jijun Hao

Division of Cardiovascular Medicine,
Department of Medicine,
Division of Cardiovascular Medicine, Department of Medicine

Vanderbilt University School of Medicine

Large Scale Zebrafish-Based In vivo Small Molecule Screen

Modified Mouse Embryonic Stem Cell based Assay for Quantifying Cardiogenic Induction Efficiency

Jijun Hao

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Division of Cardiovascular Medicine,Department of Medicine,Division of Cardiovascular Medicine, Department of Medicine

Vanderbilt University School of Medicine

Large Scale Zebrafish-Based In vivo Small Molecule Screen

Modified Mouse Embryonic Stem Cell based Assay for Quantifying Cardiogenic Induction Efficiency

Division of Cardiovascular Medicine,
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