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Analysis of mRNA Nuclear Export Kinetics in Mammalian Cells by Microinjection

In eukaryotes, messenger RNA (mRNA) is transcribed in the nucleus and must be exported into the cytoplasm to access the translation machinery. Although ...

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Visualization of Endoplasmic Reticulum Localized mRNAs in Mammalian Cells

In eukaryotes, most of the messenger RNAs (mRNAs) that encode secreted and membrane proteins are localized to the surface of the endoplasmic reticulum ...

University of Toronto

&#x4E24;&#x4E2A;&#x9176;&#x817A;&#x82F7;&#x6FC0;&#x9176; (AdK) &#x7684;&#x5F02;&#x6784;&#x4F53;&#xFF0C;&#x5176; N &#x7AEF;&#x4E24;&#x7AEF;&#x5404;&#x4E0D;&#x76F8;&#x540C;&#xFF0C;&#x5728;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x627E;&#x5230;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x6709;&#x5173;&#x7684;&#x72EC;&#x7279;&#x529F;&#x80FD;&#x65B9;&#x9762;&#x6216;&#x89C4;&#x7BA1;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5F02;&#x6784;&#x4F53;&#x6CA1;&#x6709;&#x4EFB;&#x4F55;&#x8D44;&#x6599;&#x3002;

&#x5206;&#x5B50;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#x56FD;&#x4ED3;&#x9F20;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x817A;&#x82F7;&#x6FC0;&#x9176;&#x548C;&#x5C55;&#x793A;&#x65B0;&#x578B;&#x9057;&#x4F20;&#x548C;&#x751F;&#x5316;&#x7279;&#x6027;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;

Two isoforms of the enzyme adenosine kinase (AdK), which differ at their N-terminal ends, are found in mammalian cells. However, there is no information available regarding the unique functional aspects or regulation of these isoforms.

Molecular characterization of Chinese hamster cells mutants affected in adenosine kinase and showing novel genetic and biochemical characteristics.

Deux isoformes de l&#39;enzyme ad&eacute;nosine kinase (AdK), qui se distinguent par leurs extr&eacute;mit&eacute;s N-terminale, sont trouvent dans les cellules de mammif&egrave;res. Toutefois, aucune information n&#39;est disponible concernant les aspects fonctionnels uniques ou le r&egrave;glement de ces isoformes.

Caract&eacute;risation mol&eacute;culaire des hamsters chinois cellules touch&eacute;es en ad&eacute;nosine kinase et montrant de nouvelles caract&eacute;ristiques g&eacute;n&eacute;tiques et biochimiques des mutants.

Zwei Isoformen des Enzyms Adenosin Kinase (AdK), die an ihren Enden N-Terminal zu unterscheiden, finden sich in den S&auml;ugetier-Zellen. Allerdings gibt es keine Informationen zur Verf&uuml;gung &uuml;ber die einzigartige funktionale Aspekte oder Regulierung der diese Isoformen.

Molekulare Charakterisierung des chinesischen Hamsters Zellen Mutanten in Adenosin-Kinase und Ergebnis neuartige genetische und Biochemische Merkmale betroffen.

Due isoforme della chinasi enzima adenosina (AdK), di che differiscono a loro estremit&agrave; N-terminale, si trovano nelle cellule dei mammiferi. Tuttavia, non c&#39;&egrave; nessuna informazione disponibile per quanto riguarda l&#39;unici aspetti funzionali o il regolamento di queste isoforme.

Caratterizzazione molecolare di criceto cinese cellule mutanti colpiti in adenosina chinasi e mostrando romanzo caratteristiche genetiche e biochimiche.

N &#x672B;&#x7AEF;&#x306B;&#x4E21;&#x7AEF;&#x3092;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x3001;2 &#x3064;&#x306E;&#x30A2;&#x30A4;&#x30BD; &#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x9175;&#x7D20;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE;&#x30B7;&#x30F3; &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; &#xFF08;AdK&#xFF09; &#x306F;&#x3001;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x898B;&#x3089;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x60C5;&#x5831;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x5229;&#x7528;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x30E6;&#x30CB;&#x30FC;&#x30AF;&#x306A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x5074;&#x9762;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30A2;&#x30A4;&#x30BD; &#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x306B;&#x95A2;&#x3057;&#x3066;&#x3002;

&#x4E2D;&#x56FD;&#x306E;&#x30CF;&#x30E0;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x5909;&#x7570;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE;&#x30B7;&#x30F3; &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3068;&#x307E;&#x3067;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x65B0;&#x898F;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B66;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x7279;&#x6027;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; N &#xB2E8;&#xC790; &#xB05D;&#xC5D0; &#xB2E4; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC544;&#xB370;&#xB178;&#xC2E0; &#xB2C8; (AdK)&#xC758; &#xB450; isoforms &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCC3E;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xAC70;&#xAE30; &#xC815;&#xBCF4;&#xB294; &#xC5C6;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; &#xAE30;&#xB2A5; &#xCE21;&#xBA74; &#xB610;&#xB294; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; isoforms&#xC758; &#xADDC;&#xC81C;&#xC5D0; &#xAD00;&#xD55C;.

&#xC911;&#xAD6D; &#xD584;&#xC2A4;&#xD130;&#xC758; &#xBD84;&#xC790; &#xD2B9;&#xC131;&#xD654; &#xC138;&#xD3EC; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC544;&#xB370;&#xB178;&#xC2E0; &#xB2C8; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xB294; &#xC18C;&#xC124; &#xC720;&#xC804; &#xBC0F; &#xC0DD;&#xD654;&#xD559; &#xC801;&#xC778; &#xD2B9;&#xC131;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744;.

Dos isoformas de la cinasa de la adenosina de enzima (AdK), que difieren en sus extremos N-terminal, se encuentran en c&eacute;lulas de mam&iacute;feros. Sin embargo, no hay informaci&oacute;n disponible sobre los aspectos funcionales &uacute;nicos o regulaci&oacute;n de estas isoformas.

Caracterizaci&oacute;n molecular de h&aacute;mster chino c&eacute;lulas a mutantes afectados en adenosina quinasa y mostrando caracter&iacute;sticas novedosas de la gen&eacute;tica y bioqu&iacute;mica.

&#x5728; metazoans&#xFF0C;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x57FA;&#x56E0;&#x7F16;&#x7801;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x5206;&#x6CCC;&#x548C;&#x819C;&#x7ED1;&#x5B9A;&#xFF0C;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x5185;&#x8D28;&#x7F51; &#xFF08;ER&#xFF09; &#x7684;&#x8868;&#x9762;&#x4E0A;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x9488;&#x5BF9;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6210;&#x7EE9;&#x5355;&#x5230;&#x6025;&#x8BCA;&#x5BA4;&#x7684;&#x8868;&#x9762;&#x53EF;&#x4EE5;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5E8F;&#x5217;&#x7FFB;&#x8BD1;&#xFF0C;&#x5176;&#x7EF4;&#x4FEE;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x4E0E; translocon &#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x53D8;&#x5F97;&#x8D8A;&#x6765;&#x8D8A;&#x6E05;&#x695A;&#x7684;&#x662F;&#x5B58;&#x5728;&#x5185;&#x8D28;&#x7F51;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x7684;&#x66F4;&#x591A;&#x9014;&#x5F84;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C55;&#x793A;&#x4E86;&#x8BB8;&#x591A;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5206;&#x6CCC;&#x53EF;&#x4EE5;&#x9488;&#x5BF9;&#x5E76;&#x4E14;&#x4FDD;&#x6301;&#x5173;&#x8054;&#x4E0E;&#x72EC;&#x7ACB;&#x4E8E;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x548C;&#x7FFB;&#x8BD1; ER&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528; ER &#x7ED1;&#x5B9A;&#x8F6C;&#x5934;&#x4E0E;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x8D28;&#x8C31;&#x5206;&#x6790;&#xFF0C;&#x786E;&#x5B9A;&#x53EF;&#x8C03;&#x89E3;&#x8FD9;&#x4E00;&#x66FF;&#x4EE3;&#x673A;&#x5236;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC; p180&#xFF0C;&#x4E30;&#x5BCC;&#xFF0C;&#x6B63;&#x7535;&#x8377;&#x819C;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x5047;&#x5B9A; mRNA &#x53D7;&#x4F53;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BC1;&#x660E;&#xFF0C;p180 &#x8FC7;&#x91CF;&#x8868;&#x8FBE;&#x53EF;&#x4EE5;&#x589E;&#x5F3A;&#x4E0E; ER &#x7684;&#x6CDB;&#x578B; mRNAs &#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x7136;&#x540E;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#xFF0C;p180 &#x5305;&#x542B;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5BCC;&#x542B;&#x8D56;&#x6C28;&#x9178;&#x7684;&#x533A;&#x57DF;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x76F4;&#x63A5;&#x4E0E; RNA &#x4F53;&#x5916;&#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BC1;&#x660E;&#xFF0C;p180 &#x662F;&#x6240;&#x5FC5;&#x9700;&#x7684;&#x9AD8;&#x6548; ER-&#x951A;&#x7684;&#x5927;&#x5BB9;&#x91CF; poly(A) &#x548C;&#x67D0;&#x4E9B;&#x8A8A;&#x672C;&#xFF0C;&#x5982;&#x80CE;&#x76D8;&#x78B1;&#x6027;&#x78F7;&#x9178;&#x9176;&#x548C;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#xFF0C;&#x5230; ER&#x3002;&#x603B;&#x4E4B;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x63D0;&#x4F9B;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x6240;&#x77E5;&#xFF0C;&#x66FF;&#x4EE3;&#x9014;&#x5F84;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x5E76;&#x4FDD;&#x6301;&#x5728;&#x6025;&#x8BCA;&#x5BA4; mRNA &#x7684;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B21;&#x673A;&#x68B0;&#x8BE6;&#x7EC6;&#x4FE1;&#x606F;&#x3002;&#x5F88;&#x53EF;&#x80FD;&#x6B64;&#x66FF;&#x4EE3;&#x9014;&#x5F84;&#x4E0D;&#x4EC5;&#x63D0;&#x9AD8;&#x4FDD;&#x771F;&#x5EA6;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8FDB;&#x884C;&#x6392;&#x5E8F;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E5F;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x5230;&#x5404;&#x4E2A;&#x5B50;&#x57DF;&#x7684;&#x96CC;&#x6FC0;&#x7D20;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x5206;&#x6CCC;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x3002;

p180 &#x4FC3;&#x8FDB;&#x72EC;&#x7ACB;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x7684;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x7684;&#x5185;&#x8D28;&#x7F51; mRNA &#x7684;&#x5B50;&#x96C6;&#x3002;

In metazoans, the majority of mRNAs coding for secreted and membrane-bound proteins are translated on the surface of the endoplasmic reticulum (ER). Although the targeting of these transcripts to the surface of the ER can be mediated by the translation of a signal sequence and their maintenance is mediated by interactions between the ribosome and the translocon, it is becoming increasingly clear that additional ER-localization pathways exist. Here we demonstrate that many of these mRNAs can be targeted to, and remain associated with, the ER independently of ribosomes and translation. Using a mass spectrometry analysis of proteins that associate with ER-bound polysomes, we identified putative mRNA receptors that may mediate this alternative mechanism, including p180, an abundant, positively charged membrane-bound protein. We demonstrate that p180 over-expression can enhance the association of generic mRNAs with the ER. We then show that p180 contains a lysine-rich region that can directly interact with RNA in vitro. Finally, we demonstrate that p180 is required for the efficient ER-anchoring of bulk poly(A) and of certain transcripts, such as placental alkaline phosphatase and calreticulin, to the ER. In summary, we provide, to our knowledge, the first mechanistic details for an alternative pathway to target and maintain mRNA at the ER. It is likely that this alternative pathway not only enhances the fidelity of protein sorting, but also localizes mRNAs to various subdomains of the ER and thus contributes to cellular organization.

p180 promotes the ribosome-independent localization of a subset of mRNA to the endoplasmic reticulum.

Dans les m&eacute;tazoaires, la majorit&eacute; des ARNm codant pour des prot&eacute;ines s&eacute;cr&eacute;t&eacute;es et membranaires est traduite sur la surface du r&eacute;ticulum endoplasmique (ER). Bien que le ciblage de ces transcriptions &agrave; la surface de l&#39;ER peut &ecirc;tre m&eacute;di&eacute; par la traduction d&#39;une s&eacute;quence signal et leur entretien est m&eacute;di&eacute;e par des interactions entre les ribosomes et le translocon, il devient de plus en plus &eacute;vident qu&#39;il existe des voies suppl&eacute;mentaires de ER-localisation. Nous d&eacute;montrons que bon nombre de ces ARNm peuvent &ecirc;tre cibl&eacute;s pour et restent associ&eacute;es, l&#39;ER ind&eacute;pendamment des ribosomes et traduction. &Agrave; l&#39;aide d&#39;une analyse de spectrom&eacute;trie de masse des prot&eacute;ines qui associent aux polysomes li&eacute;s &agrave; ER, nous avons identifi&eacute; putatif r&eacute;cepteurs d&#39;ARNm qui pourraient v&eacute;hiculer ce m&eacute;canisme de rechange, y compris p180, un abondant, charg&eacute; positivement des prot&eacute;ines membranaires. Nous d&eacute;montrons que la surexpression p180 peut am&eacute;liorer l&#39;association des ARNm g&eacute;n&eacute;riques avec l&#39;ER. Nous montrons ensuite que p180 contient une r&eacute;gion riche en lysine qui peut interagir directement avec de l&#39;ARN in vitro. Finalement, nous d&eacute;montrons que p180 est requise pour l&#39;efficace ER-ancrage de poly en vrac et de certaines transcriptions, comme la phosphatase alcaline placentaire et la calr&eacute;ticuline, au re. En r&eacute;sum&eacute;, nous offrons, &agrave; notre connaissance, les premiers d&eacute;tails m&eacute;canistiques pour une voie alternative cibler et maintenir les ARNm &agrave; l&#39;ER. Il est probable que cette voie alternative non seulement am&eacute;liore la fid&eacute;lit&eacute; du tri des prot&eacute;ines, mais aussi localise ARNm &agrave; diff&eacute;rents sous-domaines de l&#39;ER et contribue ainsi &agrave; l&#39;organisation cellulaire.

P180 favorise la localisation ind&eacute;pendante du ribosome d&#39;un sous-ensemble de l&#39;ARNm dans le r&eacute;ticulum endoplasmique.

Im Metazoen werden die meisten mRNAs Codieren f&uuml;r sezernierte und membrangebundener Proteine auf der Oberfl&auml;che von dem Endoplasmatischen Retikulum (ER) &uuml;bersetzt. Obwohl die Angriffe auf diese Abschriften an die Oberfl&auml;che, von der ER durch die &Uuml;bersetzung einer Signal-Sequenz vermittelt werden kann und deren Instandhaltung von Interaktionen zwischen dem Ribosom und die Translokon vermittelt ist, wird es immer deutlicher, dass zus&auml;tzliche ER-Lokalisierung-Wege vorhanden sind. Hier zeigen wir, dass viele diese mRNAs zu ausgerichtet werden k&ouml;nnen, und verbunden, das ER unabh&auml;ngig von Ribosomen und &Uuml;bersetzung bleiben. Verwenden einer Massenspektrometrie-Analyse von Proteinen, die ER gebundene Polysomes zuordnen, wurden vermeintliche mRNA-Rezeptoren, die diese alternative Verfahren-einschlie&szlig;lich p180, ein reichhaltiges, positiv aufgeladen membrangebundener Proteine vermitteln k&ouml;nnen. Wir zeigen, dass p180-&Uuml;berexpression der Verband der generischen mRNAs mit dem ER verbessern kann. Dann zeigen wir, dass das p180 eine Lysin-reichen Region enth&auml;lt, die direkt mit in-vitro RNA interagieren k&ouml;nnen. Schlie&szlig;lich zeigen wir, dass p180 f&uuml;r die effiziente ER-Verankerung lose poly(A) und bestimmte Abschriften, wie Plazenta alkalische Phosphatase und Calreticulin, auf die ER ben&ouml;tigt. Zusammenfassend bieten wir unseres Wissens die ersten mechanistischen Details f&uuml;r einen alternativen Weg zu Ziel und pflegen mRNA an das ER. Es ist wahrscheinlich, dass diese alternative Weg nicht nur die Treue verbessert des Proteins zu sortieren, aber auch mRNAs zu verschiedenen Subdomains von ER lokalisiert und somit zur zellul&auml;re Organisation tr&auml;gt.

P180 f&ouml;rdert die Ribosom-unabh&auml;ngige-Sprachunterst&uuml;tzung f&uuml;r eine Teilmenge der mRNA zu dem Endoplasmatischen Retikulum.

Nei metazoi, la maggior parte di mRNA che codifica per le proteine secrete e di membrana-limiti &egrave; tradotti sulla superficie del reticolo endoplasmatico (ER). Anche se la destinazione di queste trascrizioni alla superficie di ER pu&ograve; essere mediata dalla traduzione di una sequenza di segnale e la loro manutenzione &egrave; mediata da interazioni tra il ribosoma e il translocon, sta diventando sempre pi&ugrave; evidente che esistono altre vie di ER-localizzazione. Qui dimostriamo che molti di questi mRNAs possono essere mirati a e rimangono associati, ER indipendentemente dai ribosomi e traduzione. Utilizzando un&#39;analisi di spettrometria di massa delle proteine che associano a polysomes ER-bound, abbiamo identificato putativi recettori di mRNA che possono mediare questo meccanismo alternativo, tra cui p180, un abbondante, caricato positivamente la proteina di membrana-limiti. Dimostriamo che p180 sovraespressione pu&ograve; migliorare l&#39;associazione dei mRNAs generico con l&#39;ER. Mostriamo quindi che quello p180 contiene una regione ricca di lisina che pu&ograve; interagire direttamente con RNA in vitro. Infine, ci dimostrano che p180 &egrave; necessaria per l&#39;efficiente ER-ancoraggio di massa poli (a) e di alcune trascrizioni, come la fosfatasi alcalina placenta e calreticulin, al pronto soccorso. In sintesi, forniamo, a nostra conoscenza, i primi dettagli meccanicistici per un percorso alternativo a bersaglio e mantenere mRNA al pronto soccorso. &Egrave; probabile che questo percorso alternativo non solo migliora la fedelt&agrave; dell&#39;ordinamento della proteina, ma anche si localizza mRNAs per vari sottodomini di ER e cos&igrave; contribuisce all&#39;organizzazione cellulare.

P180 promuove la localizzazione del ribosoma-indipendente di un sottoinsieme di mRNA del reticolo endoplasmatico.

&#x5F8C;&#x751F;&#x52D5;&#x7269;&#x306E; mRNAs &#x304B;&#x3089;&#x5206;&#x6CCC;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x819C;&#x7D50;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x5927;&#x534A;&#x306F;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53; &#xFF08;ER&#xFF09; &#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x306B;&#x5909;&#x63DB;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x306B;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30B3;&#x30D4;&#x30FC;&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x4FE1;&#x53F7;&#x7CFB;&#x5217;&#x306E;&#x7FFB;&#x8A33;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C6;&#x30CA;&#x30F3;&#x30B9;&#x3001;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3068;&#x3001;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30ED;&#x30B3;&#x30F3;&#x9593;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x8FFD;&#x52A0;&#x306E; ER &#x5C40;&#x5728;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x304C;&#x5B58;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x307E;&#x3059;&#x307E;&#x3059;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x306A;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E; Mrna &#x306E;&#x591A;&#x304F;&#x306F;&#x5BFE;&#x8C61;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3001;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BE;&#x30FC;&#x30E0;&#x3068;&#x7FFB;&#x8A33;&#x3068;&#x306F;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3059;&#x308B; ER &#x3068;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x307E;&#x307E;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;ER &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9; &#x30DD;&#x30EA;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3068;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x308B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;p180&#x3001;&#x8C4A;&#x5BCC;&#x306A;&#x6B63;&#x306B;&#x8377;&#x96FB;&#x819C;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3053;&#x306E;&#x4EE3;&#x66FF;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x304C;&#x4ECB;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x63A8;&#x5B9A;&#x306E; mRNA &#x306E;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x305D;&#x306E; p180 &#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CD;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF; mRNAs &#x306E;&#x5354;&#x4F1A;&#x3001;ER &#x3092;&#x9AD8;&#x3081;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x3057;&#x3066;&#x305D;&#x306E; p180 in vitro RNA &#x3068;&#x76F4;&#x63A5;&#x5BFE;&#x8A71;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x30EA;&#x30B8;&#x30F3;&#x306E;&#x8C4A;&#x5BCC;&#x306A;&#x5730;&#x57DF;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F; p180 &#x306F;&#x3001;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A; ER-&#x30A2;&#x30F3;&#x30AB;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x4E00;&#x62EC;&#x30DD;&#x30EA; (a) &#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x80CE;&#x76E4;&#x30A2;&#x30EB;&#x30AB;&#x30EA;&#x30DB;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30AB;&#x30EB;&#x30EC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30AD;&#x30E5;&#x30EA;&#x30F3; ER &#x306B;&#x306A;&#x3069;&#x3001;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x7523;&#x7269;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8981;&#x7D04;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x77E5;&#x8B58;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x6A5F;&#x68B0;&#x7684;&#x306A;&#x8A73;&#x7D30;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8; mRNA &#x306F; ER &#x3067;&#x7DAD;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x4EE3;&#x66FF;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x4EE3;&#x66FF;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3060;&#x3051;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x4E26;&#x3079;&#x66FF;&#x3048;&#x3001;&#x5FE0;&#x5B9F;&#x5EA6;&#x306E;&#x5411;&#x4E0A;&#x304C;&#x307E;&#x305F; Mrna &#x306F; ER &#x306E;&#x69D8;&#x3005; &#x306A;&#x30B5;&#x30D6;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306B;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BA;&#x3001;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x7D30;&#x80DE;&#x7D44;&#x7E54;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3059;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

p180 &#x306F;&#x3001;mRNA &#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x5C0F;&#x80DE;&#x4F53;&#x306E;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Metazoans, mRNAs &#xBE44;&#xC640; &#xB9C9; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCF54;&#xB529;&#xC758; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84; endoplasmic &#xADF8;&#xBB3C; (ER)&#xC758; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xBCC0;&#xD658; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC751;&#xAE09;&#xC2E4;&#xC758; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC131;&#xC801;&#xC744; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xC2E0;&#xD638; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC758; &#xBC88;&#xC5ED;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC911;&#xC7AC; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC720;&#xC9C0; &#xBCF4;&#xC218;&#xB294; &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C;&#xC5D0;&#xC11C; translocon &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC911;&#xC7AC; &#xCD94;&#xAC00; &#xC751;&#xAE09;&#xC2E4; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xACBD;&#xB85C; &#xC874;&#xC7AC; &#xD558;&#xB294; &#xC810;&#xC810; &#xB354; &#xBD84;&#xBA85; &#xD574;&#xC9C0;&#xACE0; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; Mrnas&#xC758; &#xB9CE;&#xC740; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C;, &#xD558; &#xACE0; &#xC5F0;&#xAD00;, &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C;&#xACFC; &#xBC88;&#xC5ED; &#xBCC4;&#xB3C4;&#xB85C; &#xC751;&#xAE09;&#xC2E4; &#xB0A8;&#xC544; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. P180, &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C;, &#xAE0D;&#xC815;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB9C9; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xCDA9;&#xC804; &#xB4F1;&#xC774; &#xB300;&#xCCB4; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC911;&#xC7AC;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC0C1; mRNA &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xC751;&#xAE09;&#xC2E4; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; polysomes&#xC640; &#xC5F0;&#xACB0; &#xD558;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;. &#xADF8; p180 over-expression &#xC751;&#xAE09;&#xC2E4;&#xACFC; &#xC77C;&#xBC18; Mrnas&#xC758; &#xD611;&#xD68C;&#xB97C; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xC2DC;&#xD0AC; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB2E4;&#xC74C; &#xADF8; p180 &#xD3EC;&#xD568; &#xCCB4; &#xC678; RNA&#xC640; &#xC9C1;&#xC811; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; lysine &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; &#xC9C0;&#xC5ED; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xADF8; p180&#xB294; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xC751;&#xAE09;&#xC2E4;-&#xC815;&#xBC15;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xB300;&#xB7C9; &#xB9CE;&#xC740; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; placental &#xC54C;&#xCE7C;&#xB9AC; &#xC131; &#xC778;&#xC0B0; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xD6A8;&#xC18C; &#xBC0F; &#xC751;&#xAE09;&#xC2E4;&#xC5D0; calreticulin &#xAC19;&#xC740; &#xD2B9;&#xC815; &#xC131;&#xC801; &#xC99D;&#xBA85;&#xC11C;&#xC758; &#xC694;&#xAD6C;&#xB294; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC694;&#xC57D; &#xD558;&#xC790;&#xBA74;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC81C;&#xACF5;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC9C0;&#xC2DD;, &#xBAA9;&#xD45C; &#xD558; &#xACE0; &#xC751;&#xAE09;&#xC2E4;&#xC5D0;&#xC11C; Mrna&#xB97C; &#xC720;&#xC9C0;&#xD560; &#xB300;&#xCCB4; &#xACBD;&#xB85C; &#xB300; &#xD55C; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xAE30;&#xACC4; &#xC138;&#xBD80; &#xC815;&#xBCF4;. &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC774; &#xB192;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;&#xC774; &#xB300;&#xCCB4; &#xD1B5;&#xB85C; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC815;&#xB82C;&#xC758; &#xCDA9;&#xC2E4;&#xB3C4; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB610;&#xD55C; localizes mRNAs &#xC751;&#xAE09;&#xC2E4;&#xC758; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xD558;&#xC704; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC744; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xC138;&#xD3EC; &#xC870;&#xC9C1;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC; &#xD55C;&#xB2E4;.

p180&#xC740; endoplasmic &#xADF8;&#xBB3C;&#xC744; Mrna&#xC758; &#xBD80;&#xBD84; &#xC9D1;&#xD569;&#xC758; &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xCD09;&#xC9C4;.

En metazoos, la mayor&iacute;a de los mRNAs que codifica prote&iacute;nas secretadas y membrana-limitan se traduce en la superficie del ret&iacute;culo endopl&aacute;smico (ER). Aunque la selecci&oacute;n de estas transcripciones a la superficie de la sala de emergencia puede estar mediada por la traducci&oacute;n de una secuencia de la se&ntilde;al y su mantenimiento es mediado por las interacciones entre el ribosoma y el translocon, resulta cada vez m&aacute;s claro que existen v&iacute;as de ER-localizaci&oacute;n adicionales. Aqu&iacute; demostramos que muchos de estos mRNAs pueden orientarse a y permanecen asociadas, el ER independientemente de los ribosomas y traducci&oacute;n. Usando un an&aacute;lisis de espectrometr&iacute;a de masas de prote&iacute;nas que se asocian con ER-limite polisomas, identificamos supuestos receptores de mRNA que pueden mediar este mecanismo alternativo, incluyendo p180, una abundante, cargado positivamente la prote&iacute;na de membrana-limitan. Demostramos que P180 sobreexpresi&oacute;n puede mejorar la Asociaci&oacute;n de mRNAs gen&eacute;rico con el ER. A continuaci&oacute;n mostramos que eso p180 contiene una regi&oacute;n rica en lisina que puede interactuar directamente con el ARN in vitro. Finalmente, demostramos que P180 es necesaria para el eficiente ER-anclaje de poly(A) a granel y de ciertas transcripciones, como la fosfatasa alcalina placentaria y calreticulina, a la sala de emergencia. En Resumen, ofrecemos, a nuestro conocimiento, los primeros detalles mecanicistas para un camino alternativo localizar y mantener mRNA en la sala de emergencia. Es probable que esta v&iacute;a alternativa no s&oacute;lo mejora la fidelidad de la clasificaci&oacute;n de la prote&iacute;na, pero tambi&eacute;n localiza mRNAs a varios subdominios de la ER y contribuye as&iacute; a la organizaci&oacute;n celular.

Xianying A. Cui

Department of Biochemistry

University of Toronto

Analysis of mRNA Nuclear Export Kinetics in Mammalian Cells by Microinjection

Visualization of Endoplasmic Reticulum Localized mRNAs in Mammalian Cells

Xianying A. Cui

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University of Toronto

Analysis of mRNA Nuclear Export Kinetics in Mammalian Cells by Microinjection

Visualization of Endoplasmic Reticulum Localized mRNAs in Mammalian Cells

Department of Biochemistry