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Preparation of Gene Gun Bullets and Biolistic Transfection of Neurons in Slice Culture

Biolistic transfection is a physical means of transfecting cells by bombarding tissue with high velocity DNA coated particles. We provide a detailed ...

University of California, Davis

&#x5728;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#xFF0C;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x795E;&#x7ECF;&#x8282;&#x7EC6;&#x80DE; &#xFF08;&#x7814;&#x8D44;&#x5C40;) &#x9884;&#x6D4B;&#x6700;&#x521D;&#x6DF7;&#x5408;&#xFF0C;&#x7136;&#x540E;&#x9694;&#x79BB;&#x5230;&#x773C;&#x7279;&#x5B9A;&#x5C42;&#x4E2D;&#x80CC;&#x5916;&#x4FA7;&#x819D;&#x72B6;&#x6838; &#xFF08;&#x7279;&#x5B9A;&#xFF09; &#x5B9A;&#x578B;&#x6A21;&#x5F0F;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x5C0F;&#x9F20;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x4E3A; ephrin A2&#x3001; ephrin A3 &#x548C; ephrin A5&#xFF0C;&#x773C;&#x5177;&#x4F53;&#x6295;&#x5165;&#x9694;&#x79BB;&#x4F46;&#x7684;&#x5F62;&#x72B6;&#x548C;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x7684;&#x773C;&#x775B;&#x7279;&#x5B9A;&#x56FE;&#x5C42;&#x6DF1;&#x523B;&#x5730;&#x6253;&#x4E71;&#x4E86;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#x4E0D;&#x9694;&#x79BB;&#x773C;&#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x610F;&#x89C1;&#x3002;&#x91CD;&#x53E0;&#x8BBE;&#x5728;&#x4E0D;&#x6070;&#x5F53;&#x7684;&#x7279;&#x5B9A;&#x533A;&#x57DF;&#x7684;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x9884;&#x6D4B;&#x5BFC;&#x81F4;&#x76F8;&#x5173;&#x795E;&#x7ECF;&#x6D3B;&#x6027; ephrin &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;ephrin-&#x4F5C;&#x4E3A;&#x548C;&#x795E;&#x7ECF;&#x6D3B;&#x52A8;&#x6CD5; &#x300B; &#x4E00;&#x8D77;&#x5230;&#x63A7;&#x5236;&#x9635;&#x5217;&#x7684;&#x773C;&#x775B;&#x7279;&#x5B9A; retinogeniculate &#x56FE;&#x5C42;&#x3002;

Ephrin-&#x4F5C;&#x4E3A;&#x548C;&#x795E;&#x7ECF;&#x6D3B;&#x52A8;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x773C;&#x775B;&#x7279;&#x5B9A;&#x9635;&#x5217;&#x64CD;&#x4F5C;&#x671F;&#x95F4; retinogeniculate &#x6620;&#x5C04;&#x3002;

In mammals, retinal ganglion cell (RGC) projections initially intermingle and then segregate into a stereotyped pattern of eye-specific layers in the dorsal lateral geniculate nucleus (dLGN). Here we found that in mice deficient for ephrin-A2, ephrin-A3 and ephrin-A5, eye-specific inputs segregated but the shape and location of eye-specific layers were profoundly disrupted. In contrast, mice that lacked correlated retinal activity did not segregate eye-specific inputs. Inhibition of correlated neural activity in ephrin mutants led to overlapping retinal projections that were located in inappropriate regions of the dLGN. Thus, ephrin-As and neural activity act together to control patterning of eye-specific retinogeniculate layers.

Ephrin-As and neural activity are required for eye-specific patterning during retinogeniculate mapping.

Chez les mammif&egrave;res, projections (RGC) de cellules ganglionnaires r&eacute;tiniennes initialement s&#39;entrem&ecirc;lent et s&eacute;parer ensuite dans un mod&egrave;le st&eacute;r&eacute;otyp&eacute; des couches propres yeux dans le noyau g&eacute;nicul&eacute; lat&eacute;ral dorsal (dLGN). Ici, nous avons constat&eacute; que chez les souris d&eacute;ficientes pour &eacute;phrine-A2, ephrin-A3 et &eacute;phrine-A5, yeux propres entr&eacute;es s&eacute;par&eacute;es, mais la forme et l&#39;emplacement des yeux propres couches ont &eacute;t&eacute; profond&eacute;ment perturb&eacute;es. En revanche, les souris qui n&#39;avait pas de corr&eacute;lation entre activit&eacute; r&eacute;tinienne s&eacute;parer pas yeux propres entr&eacute;es. Inhibition de l&#39;activit&eacute; neurale corr&eacute;l&eacute;e chez les mutants ephrin conduit &agrave; chevauchement des projections r&eacute;tiniennes qui &eacute;taient situ&eacute;es dans des r&eacute;gions inappropri&eacute;es de la dLGN. Ainsi, ephrin-comme et acte d&#39;activit&eacute; neurale ensemble &agrave; la structuration de contr&ocirc;le des couches propres yeux retinogeniculate.

Ephrin-comme et neural activit&eacute; sont requis pour structuration sp&eacute;cifique yeux pendant retinogeniculate cartographie.

Ephrin-As und neuronaler Aktivit&#xE4;t sind f&#xFC;r Augen-spezifischen Mustern w&#xE4;hrend retinogeniculate Mapping erforderlich.

Nei mammiferi, proiezioni (RGC) cellule gangliari della retina inizialmente si confondono e poi segregano in un modello stereotipato degli strati occhio specifico nel nucleo genicolato laterale dorsale (missilistico). Qui abbiamo scoperto che nei topi carenti per efrina-A2, efrina-A3 e A5 efrina, occhio specifiche ingressi separati ma la forma e la posizione dell&#39;occhio specifici strati erano profondamente sconvolto. In contrasto, topi che mancava correlata attivit&agrave; retinica non ha fatto segregare gli ingressi degli occhi-specifiche. Inibizione dell&#39;attivit&agrave; neurale correlata efrina mutanti ha portato alla sovrapposizione di proiezioni della retina che si trovavano nelle regioni inappropriati il missilistico. Cos&igrave;, efrina-come e attivit&agrave; neurale atto insieme al controllo patterning di occhio-specifiche retinogeniculate strati.

Efrina-attivit&agrave; sono necessari per occhio-specifiche patterning durante il retinogeniculate mapping come e neurale.

&#x54FA;&#x4E73;&#x52D5;&#x7269;&#x3067;&#x3001;&#x7DB2;&#x819C;&#x795E;&#x7D4C;&#x7BC0;&#x7D30;&#x80DE; (RGC) &#x7A81;&#x8D77;&#x5F53;&#x521D;&#x3092;&#x6DF7;&#x305C;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x80CC;&#x5916;&#x5074;&#x819D;&#x72B6;&#x4F53;&#x6838; (dLGN) &#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x773C;&#x7279;&#x7570;&#x5C64;&#x306E;&#x7D0B;&#x5207;&#x308A;&#x578B;&#x306E;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x306B;&#x5206;&#x96E2;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9; ephrin A2&#x3001;A3 ephrin &#x304A;&#x3088;&#x3073; ephrin A5 &#x306E;&#x6B20;&#x4E4F;&#x3001;&#x773C;&#x306B;&#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x5165;&#x529B;&#x504F;&#x6790;&#x304C;&#x5F62;&#x72B6;&#x3068;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x306E;&#x773C;&#x7279;&#x7570;&#x5C64;&#x304C;&#x6DF1;&#x304F;&#x4E71;&#x308C;&#x305F;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x76F8;&#x95A2;&#x306E;&#x7DB2;&#x819C;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3092;&#x6B20;&#x3044;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306F;&#x773C;&#x306B;&#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x5165;&#x529B;&#x3092;&#x5206;&#x96E2;&#x3059;&#x308B;&#x306A;&#x3044;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;Ephrin &#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x76F8;&#x95A2;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306E;&#x6291;&#x5236;&#x306F;&#x3001;dLGN &#x306E;&#x4E0D;&#x9069;&#x5207;&#x306A;&#x5730;&#x57DF;&#x306B;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x7DB2;&#x819C;&#x6295;&#x5F71;&#x306E;&#x91CD;&#x8907;&#x306B;&#x5C0E;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;ephrin-&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x795E;&#x7D4C;&#x6D3B;&#x52D5;&#x884C;&#x70BA; retinogeniculate &#x773C;&#x7279;&#x7570;&#x5C64;&#x306E;&#x5236;&#x5FA1;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x3002;

Ephrin-&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3068;&#x795E;&#x7D4C;&#x6D3B;&#x52D5;&#x304C;&#x76EE;&#x306B;&#x56FA;&#x6709;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0; retinogeniculate &#x30DE;&#x30C3;&#x30D4;&#x30F3;&#x30B0;&#x4E2D;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3002;

&#xD3EC;&#xC720;&#xB958;, &#xB9DD;&#xB9C9; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC808; &#xC138;&#xD3EC; (RGC) &#xC608;&#xCE21; &#xCC98;&#xC74C; &#xD63C;&#xD569; &#xD55C; &#xB2E4;&#xC74C; &#xB4F1; &#xCABD; &#xCE21;&#xBA74; geniculate &#xD575; (dLGN)&#xC5D0;&#xC11C; &#xB208; &#xD2B9;&#xC815; &#xB808;&#xC774;&#xC5B4;&#xC758; &#xC9C4;&#xBD80;&#xD55C; &#xD328;&#xD134;&#xC73C;&#xB85C; &#xBD84;&#xB9AC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBC1C;&#xACAC; ephrin A2, A3 ephrin &#xBC0F; ephrin A5 &#xACB0;&#xD54D; &#xB41C; &#xC950; &#xB208; &#xAD00;&#xB828; &#xC785;&#xB825; &#xCC28;&#xBCC4; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xBAA8;&#xC591;&#xACFC; &#xB208; &#xD2B9;&#xC815; &#xB808;&#xC774;&#xC5B4;&#xC758; &#xC704;&#xCE58;&#xB97C; &#xC2EC;&#xD788; &#xBC29;&#xD574; &#xD588;&#xB2E4;. &#xBC18;&#xBA74;, &#xC0C1;&#xD638; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xB9DD;&#xB9C9; &#xD65C;&#xB3D9; &#xBD80;&#xC871; &#xC950; &#xB208; &#xD2B9;&#xC815; &#xC785;&#xB825; &#xBD84;&#xB9AC; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;. &#xC0C1;&#xD638; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xD65C;&#xB3D9; ephrin &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xC5B5;&#xC81C;&#xB294; Dlgn&#xC758; &#xBD80;&#xC801;&#xC808; &#xD55C; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xB9DD;&#xB9C9; &#xC608;&#xCE21; &#xACB9;&#xCE58;&#xB294; &#xC774;&#xB04C;&#xC5B4; &#xB0C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, ephrin-&#xB85C; &#xBC0F; &#xC2E0;&#xACBD; &#xD65C;&#xB3D9; &#xBC95; &#xB208; &#xAD00;&#xB828; retinogeniculate &#xB808;&#xC774;&#xC5B4; &#xC81C;&#xC5B4; &#xD328;&#xD134;&#xD654;&#xB97C; &#xD568;&#xAED8;.

Ephrin-&#xB85C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC740; retinogeniculate &#xB9E4;&#xD551; &#xC911; &#xB208; &#xAD00;&#xB828; &#xD328;&#xD134;&#xD654; &#xD560; &#xD544;&#xC694;.

En los mam&iacute;feros, ganglionares de la retina celular (RGC) proyecciones inicialmente se entremezclan y luego separar en un patr&oacute;n estereotipado de capas espec&iacute;ficas de ojo en el n&uacute;cleo geniculado lateral dorsal (dLGN). Aqu&iacute; se encontr&oacute; que en ratones deficientes para efrina-A2, efrina-A3 y A5-efrina, entradas de ojo espec&iacute;ficos separados pero la forma y ubicaci&oacute;n de capas de ojo espec&iacute;ficos fueron profundamente perturbados. Por el contrario, ratones que carec&iacute;an de actividad retiniana correlacionada no segregar entradas espec&iacute;ficas de ojo. Inhibici&oacute;n de la actividad neuronal correlacionada en mutantes efrina condujo a superposici&oacute;n proyecciones retinianas que se ubicaban en regiones inadecuadas de la dLGN. As&iacute;, efrina-como actividad neural ley junta a patrones de control de capas espec&iacute;ficas de ojo retinogeniculate y.

Efrina-como y nervios actividad son necesarios para patrones espec&iacute;ficos de ojo durante la asignaci&oacute;n de retinogeniculate.

Ephrin-&#x4F5C;&#x4E3A;&#x548C;&#x53CA;&#x5176;&#x53D7;&#x4F53;&#xFF0C;EphAs&#xFF0C;&#x5728;&#x90A3;&#x91CC;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x53EF;&#x4EE5;&#x91C7;&#x53D6;&#x884C;&#x52A8;&#xFF0C;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x4E18;&#x8111;&#x6295;&#x5165;&#x53D1;&#x5C55;&#x4E2D;&#x56FD;&#x5BB6;&#x76AE;&#x8D28;&#x4E2D;&#x8868;&#x793A;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C06;&#x89C6;&#x76AE;&#x5C42; &#xFF08;V1&#xFF09; &#x6620;&#x5C04;&#x4E3A; ephrin-A2&#xFF0C;&#x6709;&#x7F3A;&#x9677;&#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;-A3 &#x548C; A5 &#x529F;&#x80FD;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x7528;&#x5185;&#x90E8;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5149;&#x5B66;&#x6210;&#x50CF;&#x548C;&#x5FAE;&#x7535;&#x6781;&#x8BB0;&#x5F55;&#x4EE5;&#x53CA;&#x7ED3;&#x6784;&#x4E0A;&#xFF0C;&#x89E3;&#x5256;&#x8FFD;&#x8E2A;&#x7684;&#x76AE;&#x8D28;&#x9884;&#x6D4B;&#x6CD5;&#x3002;V1 &#x5C0F;&#x817F;&#xFF0C;&#x8F6C;&#x5411;&#x65CB;&#x8F6C;&#xFF0C;&#x5E76;&#x538B;&#x7F29;&#x548C;&#x5176;&#x5185;&#x90E8;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5DF2;&#x964D;&#x7EA7;&#x3002;&#x8868;&#x793A; ephrin A5 ectopically &#x5BAB;&#x5185;&#x7535;&#x7A7F;&#x5B54;&#x6280;&#x672F;&#x5728;&#x5916;&#x4FA7;&#x7684;&#x76AE;&#x5C42;&#x7684;&#x5C0F;&#x817F;&#xFF0C;&#x8F6C;&#x53D8; V1 &#x7684;&#x5730;&#x56FE;&#x53CA;&#x5185; V1 &#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x6270;&#x4E71;&#x4E86;&#x5B83;&#x7684;&#x5185;&#x90E8;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528; EphA ephrin &#x7684;&#x76AE;&#x8D28;&#x6307;&#x5357;&#x4E2D;&#x7684;&#x6E10;&#x53D8;&#x6620;&#x5C04;&#x5F62;&#x6210;&#xFF0C;&#x4F46;&#x8BE5;&#x5197;&#x4F59; ephrin &#x4EE5;&#x5916;&#x7684;&#x56E0;&#x7D20;-&#x4E00;&#x6837;&#xFF0C;&#x8D1F;&#x8D23;&#x6B8B;&#x5730;&#x56FE;&#x3002;Retinogeniculate &#x5728;&#x5730;&#x56FE;&#x4E0A;&#x7684;&#x65E9;&#x671F;&#x5DE5;&#x4F5C;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x5F53;&#x524D;&#x7ED3;&#x679C;&#x663E;&#x793A;&#x76F8;&#x540C;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x53EF;&#x80FD;&#x8FD0;&#x884C;&#x5728;&#x89C6;&#x89C9;&#x901A;&#x8DEF;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5730;&#x56FE;&#x7684;&#x8FDE;&#x7EED;&#x9636;&#x6BB5;&#x3002;

Ephrin-&#x4E3A;&#x5BFC;&#x5411;&#x529F;&#x80FD;&#x5730;&#x56FE;&#x5728;&#x89C6;&#x89C9;&#x76AE;&#x5C42;&#x7684;&#x5F62;&#x6210;&#x3002;

Ephrin-As and their receptors, EphAs, are expressed in the developing cortex where they may act to organize thalamic inputs. Here, we map the visual cortex (V1) in mice deficient for ephrin-A2, -A3, and -A5 functionally, using intrinsic signal optical imaging and microelectrode recording, and structurally, by anatomical tracing of thalamocortical projections. V1 is shifted medially, rotated, and compressed and its internal organization is degraded. Expressing ephrin-A5 ectopically by in utero electroporation in the lateral cortex shifts the map of V1 medially, and expression within V1 disrupts its internal organization. These findings indicate that interactions between gradients of EphA/ephrin-A in the cortex guide map formation, but that factors other than redundant ephrin-As are responsible for the remnant map. Together with earlier work on the retinogeniculate map, the current findings show that the same molecular interactions may operate at successive stages of the visual pathway to organize maps.

Ephrin-as guide the formation of functional maps in the visual cortex.

Ephrin-comme et leurs r&eacute;cepteurs, issam, sont exprim&eacute;es dans le cortex en voie de d&eacute;veloppement o&ugrave; ils peuvent agir pour organiser les entr&eacute;es thalamiques. Ici, nous la carte le cortex visuel (V1) chez les souris d&eacute;ficientes pour &eacute;phrine-A2,-A3, et - A5 &agrave; l&#39;aide d&#39;un point de vue fonctionnel, imagerie optique signal intrins&egrave;que et la micro&eacute;lectrode enregistrement et structurellement, de tra&ccedil;age anatomique des projections thalamocortical. V1 est d&eacute;plac&eacute; en dedans, tourn&eacute; et comprim&eacute; et son organisation interne est d&eacute;grad&eacute;e. Exprimant l&#39;&eacute;phrine-A5 fa&ccedil;on ectopique par &eacute;lectroporation in utero dans le cortex lat&eacute;ral d&eacute;cale le plan de V1 m&eacute;dialement et expression dans V1 perturbe son organisation interne. Ces r&eacute;sultats indiquent que les interactions entre les gradients d&#39;EphA/ephrin-A dans le guide de cortex carte formation, mais que des facteurs autres que redondant ephrin-comme sont responsables de la carte de vestige. Ainsi que les travaux ant&eacute;rieurs sur le plan de retinogeniculate, les r&eacute;sultats actuels montrent que les m&ecirc;mes interactions mol&eacute;culaires peuvent fonctionner &agrave; des stades successifs de la voie visuelle pour organiser les cartes.

Ephrin-comme guide de la formation de cartes fonctionnelles dans le cortex visuel.

Ephrin-als und ihre Rezeptoren, EphAs, werden ausgedr&uuml;ckt in der entwickelnden Kortex, wo sie organisieren thalamischen Eing&auml;nge fungieren k&ouml;nnen. Hier, wir ordnen die Sehrinde (V1) in den M&auml;usen unzul&auml;nglich f&uuml;r Ephrin-A2-A3, und - A5 funktional, systeminterne Signal optische Bildgebung und Mikroelektrode aufzeichnen, und strukturell durch anatomische Ablaufverfolgung Thalamocortical Projektionen. V1 ist medial, verschoben, gedreht und komprimiert und seine interne Organisation wird abgebaut. Ephrin-A5 ectopically durch in der Geb&auml;rmutter Electroporation im seitlichen Kortex zum Ausdruck die Karte v1 medial verschiebt, und Ausdruck innerhalb V1 unterbricht seine interne Organisation. Diese Befunde zeigen, dass Wechselwirkungen zwischen Gradienten von EphA/Ephrin-A im Kortex Guide Bildung, aber diese Faktoren als redundante Ephrin zuordnen-wie sind verantwortlich f&uuml;r die Rest-Karte. Zusammen mit fr&uuml;heren Arbeiten auf der Retinogeniculate Karte zeigen die aktuellen Erkenntnisse, dass die gleichen molekularen Interaktionen in aufeinander folgenden Phasen des visuellen Signalweges Karten organisieren t&auml;tig werden d&uuml;rfen.

Ephrin-wie die Bildung von funktionalen Karten im visuellen Kortex zu f&uuml;hren.

Efrina-come e loro recettori, EphAs, sono espressi nella corteccia in via di sviluppo dove essi possono agire per organizzare gli ingressi talamici. Qui, abbiamo mappa della corteccia visiva (V1) nei topi carenti per efrina-A2-A3, e - A5 utilizzando funzionalmente, imaging ottico segnale intrinseco e microelettrodo registrazione e strutturalmente, da analisi anatomica delle proiezioni talamocorticale. V1 &egrave; spostata medialmente, ruotato e compresso e l&#39;organizzazione interna &egrave; degradata. Esprimendo efrina-A5 ectopically di elettroporazione in utero della corteccia laterale sposta la mappa di V1 medialmente, ed espressione all&#39;interno di V1 sconvolge la sua organizzazione interna. Questi risultati indicano che le interazioni tra sfumature di EphA/efrina-A nella guida di corteccia mappa formazione, ma che fattori diversi dal ridondante efrina-come sono responsabili per la mappa di residuo. Insieme al precedente lavoro sulla mappa retinogeniculate, i risultati attuali mostrano che le interazioni molecolari stesse possono operare a fasi successive del percorso visivo per organizzare le mappe.

Efrina-come guidare la formazione di mappe funzionali nella corteccia visiva.

Ephrin-&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3001;EphAs&#x3001;&#x3069;&#x3053;&#x3067;&#x5F7C;&#x3089;&#x306F;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x884C;&#x52D5;&#x8996;&#x5E8A;&#x5165;&#x529B;&#x3092;&#x6574;&#x7406;&#x3059;&#x308B;&#x5927;&#x8133;&#x76AE;&#x8CEA;&#x3067;&#x8868;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; ephrin A2 &#x306E;&#x6B20;&#x640D;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x8996;&#x899A;&#x91CE; (V1) &#x3092;&#x30DE;&#x30C3;&#x30D7;-A3 &#x3068; A5 &#x304C;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x7D44;&#x307F;&#x8FBC;&#x307F;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5149;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x96FB;&#x6975;&#x8A18;&#x9332;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x69CB;&#x9020;&#x7684;, &#x8996;&#x5E8A;&#x76AE;&#x8CEA;&#x6295;&#x5C04;&#x306E;&#x89E3;&#x5256;&#x5B66;&#x7684;&#x30C8;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3002;&#x56DE;&#x8EE2;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5727;&#x7E2E; V1 &#x3092;&#x5185;&#x5074;&#x306B;, &#x30B7;&#x30D5;&#x30C8;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x5185;&#x90E8;&#x7D44;&#x7E54;&#x304C;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Ephrin A5 &#x57F9;&#x990A; notch &#x5916;&#x5074;&#x76AE;&#x8CEA;&#x5185;&#x3067;&#x8868;&#x73FE;&#x3059;&#x308B; V1 &#x306E;&#x30DE;&#x30C3;&#x30D7;&#x304C;&#x5185;&#x5074;&#x306B;, &#x30B7;&#x30D5;&#x30C8;&#x3057;&#x3001;V1 &#x5185;&#x306E;&#x5F0F;&#x306F;&#x305D;&#x306E;&#x5185;&#x90E8;&#x7D44;&#x7E54;&#x3092;&#x6DF7;&#x4E71;&#x3055;&#x305B;&#x307E;&#x3059;&#x3002;EphA/ephrin-A &#x306E;&#x52FE;&#x914D;&#x76AE;&#x8CEA;&#x30AC;&#x30A4;&#x30C9;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x5197;&#x9577; ephrin &#x4EE5;&#x5916;&#x306E;&#x8981;&#x56E0;&#x304C;&#x30DE;&#x30C3;&#x30D7;&#x793A;&#x5506;-&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306F;&#x3001;&#x6B8B;&#x9AB8;&#x306E;&#x5730;&#x56F3;&#x3092;&#x8CAC;&#x4EFB;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Retinogeniculate &#x30DE;&#x30C3;&#x30D7;&#x306E;&#x521D;&#x671F;&#x306E;&#x4ED5;&#x4E8B;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x8ABF;&#x67FB;&#x7D50;&#x679C;&#x540C;&#x3058;&#x5206;&#x5B50;&#x9593;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x30DE;&#x30C3;&#x30D7;&#x3092;&#x69CB;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x8996;&#x899A;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x9023;&#x7D9A;&#x3057;&#x305F;&#x6BB5;&#x968E;&#x3067;&#x52D5;&#x4F5C;&#x3059;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Ephrin-&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x8996;&#x899A;&#x91CE;&#x6A5F;&#x80FD;&#x5730;&#x56F3;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x5C0E;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Ephrin-&#xB85C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;, EphAs, &#xADF8;&#xB4E4;&#xC774; thalamic &#xC785;&#xB825; &#xAD6C;&#xC131; &#xD589;&#xB3D9; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD53C; &#xC9C8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD45C;&#xD604; &#xB418;&#xB294;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC950; ephrin a 2&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBD88;&#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; &#xC2DC;&#xAC01; &#xD53C; &#xC9C8; (v 1 &#xC774;&#xB098;) &#xC9C0;&#xB3C4;-A3, &#xBC0F;-&#xB0B4;&#xC7A5; &#xC2E0;&#xD638; &#xAD11;&#xD559; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xBC0F; microelectrode thalamocortical &#xACC4;&#xD68D;&#xC758; &#xD574;&#xBD80;&#xD559; &#xCD94;&#xC801; &#xD558; &#xC5EC;, &#xB514;&#xC2A4;&#xD06C; &#xBC0F; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, A5 &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;. V 1 &#xD68C;&#xC804;, &#xACE0; &#xC555;&#xCD95; medially, &#xC774;&#xB3D9; &#xD558; &#xACE0; &#xB0B4;&#xBD80; &#xC870;&#xC9C1;&#xC744; &#xC800;&#xD558; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. Utero electroporation &#xCE21;&#xBA74; &#xD53C; &#xC9C8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; ectopically ephrin A5 &#xD45C;&#xD604; V1 &#xC9C0;&#xB3C4; medially, &#xACE0; v 1 &#xC774;&#xB098; &#xB0B4; &#xC2DD; &#xBC29;&#xD574;&#xC758; &#xB0B4;&#xBD80; &#xC870;&#xC9C1; &#xC774;&#xB3D9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBC1C;&#xACAC;&#xC740; &#xD53C; &#xC9C8; &#xAC00;&#xC774;&#xB4DC;&#xC5D0;&#xC11C; EphA/ephrin-A&#xC758; &#xADF8;&#xB77C;&#xB514;&#xC5B8;&#xD2B8; &#xAC04;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC911;&#xBCF5; ephrin &#xC774;&#xC678;&#xC758; &#xADF8; &#xC694;&#xC778;&#xC758; &#xD615;&#xC131; &#xC9C0;&#xB3C4; &#xD45C;&#xC2DC;-&#xB85C; &#xB098;&#xBA38;&#xC9C0; &#xC9C0;&#xB3C4; &#xB300; &#xD55C; &#xCC45;&#xC784;&#xC774; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Retinogeniculate &#xC9C0;&#xB3C4; &#xC774;&#xC804; &#xC791;&#xC5C5; &#xD568;&#xAED8; &#xD604;&#xC7AC; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xB3D9;&#xC77C;&#xD55C; &#xBD84;&#xC790; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xC9C0;&#xB3C4; &#xAD6C;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xC2DC;&#xAC01;&#xC801; &#xD1B5;&#xB85C;&#xC758; &#xC5F0;&#xC18D;&#xC801;&#xC778; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC791;&#xB3D9; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Ephrin-&#xC2DC;&#xAC01; &#xD53C; &#xC9C8; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC9C0;&#xB3C4; &#xD615;&#xC131; &#xAC00;&#xC774;&#xB4DC;&#xB85C;.

Efrina-como y sus receptores, EphAs, se expresan en la corteza en desarrollo donde act&uacute;an para organizar entradas tal&aacute;micos. Aqu&iacute;, nosotros mapa la corteza visual (V1) en ratones deficientes para efrina-A2,-A3, y - A5 funcionalmente, usando im&aacute;genes &oacute;pticas de se&ntilde;al intr&iacute;nseca y microelectrodo grabaci&oacute;n y estructuralmente, por la localizaci&oacute;n anat&oacute;mica de las proyecciones talamocorticales. V1 se desplaza medialmente, girar y comprimido y su organizaci&oacute;n interna se degrada. Expresar ect&oacute;picamente efrina-A5 electroporaci&oacute;n en el &uacute;tero en la corteza lateral cambia el mapa de V1 medialmente, y expresi&oacute;n en V1 interrumpe su organizaci&oacute;n interna. Estos resultados indican que las interacciones entre los gradientes de EphA/efrina-A en la gu&iacute;a de corteza mapa formaci&oacute;n, sino que factores distintos efrina redundante-como son responsable por el mapa de remanente. Junto con el trabajo anterior en el mapa de retinogeniculate, los resultados actuales muestran que las interacciones moleculares mismas pueden funcionar en etapas sucesivas de la v&iacute;a visual para organizar mapas.

Efrina-como gu&iacute;a la formaci&oacute;n de mapas funcionales en la corteza visual.

&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x88AB;&#x8BA4;&#x4E3A;&#x662F;&#x57FA;&#x7840;&#x4E0E;&#x5B66;&#x4E60;&#x548C;&#x8BB0;&#x5FC6;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x957F;&#x671F;&#x884C;&#x4E3A;&#x8FDB;&#x884C;&#x4FEE;&#x6539;&#x3002;&#x5C24;&#x5176;&#x662F;&#xFF0C;&#x76F8;&#x5F53;&#x591A;&#x7684;&#x8BC1;&#x636E;&#x6D89;&#x53CA;&#x7684;&#x7834;&#x574F;&#x548C;&#x635F;&#x5931;&#x7684;&#x810A;&#x67F1;&#x795E;&#x7ECF;&#x7A81;&#x89E6;&#x548C;&#x6811;&#x7A81;&#x68D8;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x673A;&#x5236;&#x7CBE;&#x5236;&#x8111;&#x56DE;&#x8DEF;&#xFF0C;&#x9000;&#x7F29;&#xFF0C;&#x4F46;&#x8C03;&#x63A7;&#x810A;&#x67F1;&#x6D88;&#x9664;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x673A;&#x5236;&#x4ECD;&#x4E0D;&#x660E;&#x786E;&#x3002;&#x7A81;&#x89E6;&#x540E;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;PSD-95&#xFF0C;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x6D53;&#x7F29;&#x7684;&#x6811;&#x7A81;&#x68D8;&#x548C;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x4E0E;&#x810A;&#x67F1;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x56E0;&#x4E3A;&#x6C34;&#x5E73;&#x4F4E;&#x7684; PSD 95 &#x523A;&#x66F4;&#x5177;&#x6D3B;&#x529B;&#x548C;&#x65B0;&#x751F;&#x523A;&#x7684; PSD 95 &#x62DB;&#x52DF;&#x4EBA;&#x5458;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x4E0E;&#x810A;&#x67F1;&#x7A33;&#x5B9A;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5047;&#x8BBE;&#x8FD9;&#x4E00;&#x635F;&#x5931;&#x7684; PSD 95 &#x6D53;&#x7F29;&#x5C06;&#x810A;&#x67F1;&#x9000;&#x7F29;&#x7684;&#x5148;&#x51B3;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x8FD9;&#x4E00;&#x5047;&#x8BBE;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7528;&#x53CC;&#x57FA;&#x8272;&#x5EF6;&#x65F6;&#x53CC;&#x5149;&#x5B50;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x6765;&#x76D1;&#x6D4B;&#x5927;&#x9F20;&#x6D77;&#x9A6C;&#x9525;&#x4F53;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143; PSD-95-&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x4E0E; DsRed-&#x5FEB;&#x9012;&#x3001; cotransfected &#x548C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5206;&#x6790;&#x4E86; PSD-95-&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x6D53;&#x7F29;&#x548C;&#x810A;&#x67F1;&#x5F62;&#x6001;&#x53D8;&#x5316;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x5173;&#x7CFB;&#x3002;&#x6309;&#x7167;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x5047;&#x8BBE;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x6536;&#x56DE;&#x7684;&#x523A;&#x5927;&#x90E8;&#x5206;&#x4E3A; PSD-95-&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x76F8;&#x5BF9; unenriched&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5728;&#x6536;&#x56DE;&#x7684;&#x5BCC; PSD 95 GFP &#x523A;&#x7684;&#x5B50;&#x96C6;&#xFF0C;&#x810A;&#x690E;&#x6536;&#x7F29;&#x548C;&#x635F;&#x5931;&#x7684; PSD-95-&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x7D27;&#x5BC6;&#x7ED3;&#x5408;&#x5728;&#x4E00;&#x8D77;&#xFF0C;&#x6697;&#x793A;&#x8FD9;&#x4E00;&#x635F;&#x5931;&#x7684; PSD-95-&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x6D53;&#x7F29;&#x4E4B;&#x524D;&#x6CA1;&#x6709;&#x810A;&#x67F1;&#x9000;&#x7F29;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#xFF0C;&#x5728;&#x67D0;&#x4E9B;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x810A;&#x67F1;&#x7275;&#x62C9;&#x9020;&#x6210;&#x5728; PSD-95-&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x57FA;&#x56E0;&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x8F74;&#x4E0A;&#x663E;&#x8457;&#x5BCC;&#x96C6;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x652F;&#x6301;&#x54EA;&#x4E9B;&#x635F;&#x5931;&#x7684; PSD 95 &#x6D53;&#x7F29;&#x4E0D;&#x9700;&#x8981;&#x5728;&#x4E0D;&#x7A33;&#x5B9A;&#x7684;&#x523A;&#x4E4B;&#x524D;&#x7684;&#x810A;&#x67F1;&#x9000;&#x7F29;&#x7684;&#x6A21;&#x578B;&#x3002;

PSD 95 &#x6D53;&#x7F29;&#x7684;&#x635F;&#x5931;&#x4E0D;&#x662F;&#x810A;&#x67F1;&#x9000;&#x7F29;&#x7684;&#x5148;&#x51B3;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;

Changes in neuronal structure are thought to underlie long-term behavioral modifications associated with learning and memory. In particular, considerable evidence implicates the destabilization and retraction of dendritic spines along with the loss of spine synapses as an important cellular mechanism for refining brain circuits, yet the molecular mechanisms regulating spine elimination remain ill-defined. The postsynaptic density protein, PSD-95, is highly enriched in dendritic spines and has been associated with spine stability. Because spines with low levels of PSD-95 are more dynamic, and the recruitment of PSD-95 to nascent spines has been associated with spine stabilization, we hypothesized that loss of PSD-95 enrichment would be a prerequisite for spine retraction. To test this hypothesis, we used dual-color time-lapse two-photon microscopy to monitor rat hippocampal pyramidal neurons cotransfected with PSD-95-GFP and DsRed-Express, and we analyzed the relationship between PSD-95-GFP enrichment and spine morphological changes. Consistent with our hypothesis, we found that the majority of spines that retracted were relatively unenriched for PSD-95-GFP. However, in the subset of PSD-95-GFP-enriched spines that retracted, spine shrinkage and loss of PSD-95-GFP were tightly coupled, suggesting that loss of PSD-95-GFP enrichment did not precede spine retraction. Moreover, we found that, in some instances, spine retraction resulted in a significant enrichment of PSD-95-GFP on the dendritic shaft. Our data support a model of spine retraction in which loss of PSD-95 enrichment is not required prior to the destabilization of spines.

Loss of PSD-95 enrichment is not a prerequisite for spine retraction.

Changements dans la structure neuronale sont consid&#xE9;r&#xE9;s &#xEA;tre &#xE0; la base &#xE0; long terme des modifications comportementales associ&#xE9;es &#xE0; l&#x26;#39;apprentissage et la m&#xE9;moire. En particulier, des preuves consid&#xE9;rables implique la d&#xE9;stabilisation et la r&#xE9;traction des &#xE9;pines dendritiques avec la perte de synapses des &#xE9;pines comme un m&#xE9;canisme cellulaire important pour affiner les circuits du cerveau, mais les m&#xE9;canismes mol&#xE9;culaires qui r&#xE9;gulent l&#x26;#39;&#xE9;limination du rachis restent mal d&#xE9;finis. La prot&#xE9;ine de densit&#xE9; post-synaptique, PSD-95, est hautement enrichi dans les &#xE9;pines dendritiques et a &#xE9;t&#xE9; associ&#xE9;e &#xE0; la stabilit&#xE9; du rachis. Parce que des &#xE9;pines avec de faibles niveaux de PSD-95 sont plus dynamiques, et le recrutement de PSD-95 &#xE0; &#xE9;pines naissantes a &#xE9;t&#xE9; associ&#xE9;e &#xE0; une stabilisation du rachis, nous &#xE9;mettons l&#x26;#39;hypoth&#xE8;se que la perte de PSD-95 d&#x26;#39;enrichissement serait une condition sine qua non pour le retrait du rachis. Pour tester cette hypoth&#xE8;se, nous avons utilis&#xE9; deux couleurs time-lapse microscopie &#xE0; deux photons pour surveiller d&#x26;#39;hippocampe de rat neurones pyramidaux co-transfect&#xE9;es avec PSD-95-GFP et DsRed-Express, et nous avons analys&#xE9; la relation entre PSD-95-GFP enrichissement et la colonne vert&#xE9;brale morphologique changements. Conform&#xE9;ment &#xE0; notre hypoth&#xE8;se, nous avons constat&#xE9; que la majorit&#xE9; des &#xE9;pines qui ont &#xE9;t&#xE9; rachet&#xE9;es relativement non enrichi pour le DSP-95-GFP. Toutefois, dans le sous-ensemble de PSD-95-GFP-enrichis &#xE9;pines qui r&#xE9;tract&#xE9;es, le retrait et la perte de la colonne vert&#xE9;brale PSD-95-GFP ont &#xE9;t&#xE9; &#xE9;troitement associ&#xE9;s, ce qui sugg&#xE8;re que la perte de PSD-95-GFP d&#x26;#39;enrichissement n&#x26;#39;a pas pr&#xE9;c&#xE9;d&#xE9; la r&#xE9;traction colonne vert&#xE9;brale. En outre, nous avons constat&#xE9; que, dans certains cas, la r&#xE9;traction du rachis a permis un enrichissement significatif de PSD-95-GFP sur l&#x26;#39;arbre dendritique. Nos donn&#xE9;es appuient un mod&#xE8;le de r&#xE9;tractation colonne vert&#xE9;brale dans laquelle la perte de PSD-95 d&#x26;#39;enrichissement n&#x26;#39;est pas n&#xE9;cessaire avant la d&#xE9;stabilisation d&#x26;#39;&#xE9;pines.

Perte de PSD-95 d&#x26;#39;enrichissement n&#x26;#39;est pas une condition pour le retrait Spine

&Auml;nderungen in der neuronalen Struktur werden gedacht, um langfristige Verhaltens &Auml;nderungen verbunden mit lernen und Ged&auml;chtnis zugrunde liegen. Insbesondere erhebliche Beweise steht in Verbindung mit der Destabilisierung und Retraktion dendritische Dornen zusammen mit den Verlust der Wirbels&auml;ule Synapsen als ein wichtiger zellul&auml;rer Mechanismus zur Raffination Gehirn Schaltungen, dennoch die molekularen Mechanismen, die Regulierung der Wirbels&auml;ule Beseitigung bleiben unklar. Das Protein postsynaptisches Dichte PSD-95, ist hochangereichertes in dendritische Dornen und Stabilit&auml;t der Wirbels&auml;ule zugeordnet wurde. Denn Dornen mit niedrigen PSD-95 sind mehr Dynamik und die Rekrutierung von PSD-95 zu entstehende Stacheln Stabilisierung der Wirbels&auml;ule zugeordnet wurde, wir die Hypothese w&auml;re dieser Verlust der PSD-95 Anreicherung Voraussetzung f&uuml;r Wirbels&auml;ule Retraktion. Um diese Hypothese zu testen, verwendet wir zweifarbige Zeitraffer zwei-Photonen-Mikroskopie Ratte pyramidale Neuronen mit PSD-95-GFP und DsRed-Express cotransfected zu &uuml;berwachen, und wir analysiert das Verh&auml;ltnis zwischen PSD-95-GFP-Anreicherung und Wirbels&auml;ule morphologische Ver&auml;nderungen. In &Uuml;bereinstimmung mit unserer Hypothese, fanden wir, dass die Mehrheit der Dornen, die reduziert relativ ausgestalteter f&uuml;r PSD-95-GFP waren. Jedoch in der Untergruppe des PSD-95-GFP-bereichert Stacheln, die reduziert, Wirbels&auml;ule Schwund und Verlust von PSD-95-GFP waren eng gekoppelt, schl&auml;gt dieser Verlust der PSD-95-GFP Bereicherung nicht vorausgehen Wirbels&auml;ule Retraktion. Dar&uuml;ber hinaus fanden wir, dass in einigen F&auml;llen Retraktion der Wirbels&auml;ule eine wesentliche Bereicherung der PSD-95-GFP auf der dendritischen Welle gef&uuml;hrt. Unsere Daten unterst&uuml;tzen ein Modell der Wirbels&auml;ule Retraktion welche Verlust von PSD-95 Anreicherung nicht die Destabilisierung der Stacheln erforderlich ist.

Wegfall der Bereicherung der PSD-95 ist nicht Voraussetzung f&uuml;r die Wirbels&auml;ule Retraktion.

Cambiamenti nella struttura di un neurone pensa che sottendono le modifiche comportamentali a lungo termine associate con l&#39;apprendimento e la memoria. In particolare, una notevole evidenza implica la destabilizzazione e la ritrazione delle spine dendritiche insieme con la perdita di sinapsi della colonna vertebrale come un importante meccanismo cellulare per raffinazione circuiti del cervello, tuttavia i meccanismi molecolari che regolano la eliminazione della colonna vertebrale &egrave; ancora mal definiti. La proteina di densit&agrave; postsinaptica, PSD-95, &egrave; altamente arricchito in spine dendritiche ed &egrave; stata associata con la stabilit&agrave; della colonna vertebrale. Perch&eacute; spine con bassi livelli di PSD-95 sono pi&ugrave; dinamico e il reclutamento di PSD-95 a spine nascente &egrave; stata associata con la stabilizzazione della colonna vertebrale, abbiamo ipotizzato che la perdita di PSD-95 arricchimento sarebbe un prerequisito per la retrazione della colonna vertebrale. Per verificare questa ipotesi, abbiamo usato colori dual time-lapse due-fotone microscopia per monitorare i rat hippocampal piramidali neuroni cotransfected con PSD-95-GFP e DsRed-Express, e abbiamo analizzato il rapporto tra arricchimento di PSD-95-GFP e modificazioni morfologiche della colonna vertebrale. Coerente con la nostra ipotesi, abbiamo scoperto che la maggior parte delle spine che retratto era relativamente attrezzata per PSD-95-GFP. Tuttavia, nel sottoinsieme delle spine di PSD-95-GFP-arricchito che retratto, restringimento della colonna vertebrale e perdita di PSD-95-GFP sono stati strettamente collegati, suggerendo che la perdita di arricchimento di PSD-95-GFP non precedeva retrazione della colonna vertebrale. Inoltre, abbiamo trovato che, in alcuni casi, retrazione del rachide ha portato a un significativo arricchimento di PSD-95-GFP sull&#39;albero dendritico. I nostri dati supportano un modello di retrazione della colonna vertebrale nel quale perdita di PSD-95 arricchimento non &egrave; richiesto prima della destabilizzazione delle spine.

Perdita di arricchimento di PSD-95 non &egrave; un prerequisito per la retrazione della colonna vertebrale.

&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x5B66;&#x7FD2;&#x3068;&#x8A18;&#x61B6;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x9577;&#x671F;&#x7684;&#x306A;&#x884C;&#x52D5;&#x306E;&#x5909;&#x66F4;&#x3092;&#x6839;&#x5E95;&#x306B;&#x3042;&#x308B;&#x3068;&#x8003;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x7279;&#x306B;&#x3001;&#x304B;&#x306A;&#x308A;&#x306E;&#x8A3C;&#x62E0;&#x304C;&#x8133;&#x306E;&#x56DE;&#x8DEF;&#x3092;&#x8ABF;&#x6574;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x7D30;&#x80DE;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x810A;&#x690E;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x306E;&#x6D88;&#x5931;&#x3068;&#x3068;&#x3082;&#x306B;&#x4E0D;&#x5B89;&#x5B9A;&#x5316;&#x3068;&#x6A39;&#x72B6;&#x7A81;&#x8D77;&#x68D8;&#x306E;&#x53CE;&#x7E2E;&#x306E;&#x95A2;&#x4E0E;&#x304C;&#x3001;&#x307E;&#x3060;&#x810A;&#x67F1;&#x306E;&#x9664;&#x53BB;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3059;&#x308B;&#x5206;&#x5B50;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306F;&#x4E0D;&#x660E;&#x78BA;&#x306E;&#x307E;&#x307E;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x5F8C;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3001;PSD-95&#x306F;&#x3001;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x6A39;&#x72B6;&#x7A81;&#x8D77;&#x68D8;&#x306B;&#x6FC3;&#x7E2E;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x304A;&#x308A;&#x3001;&#x810A;&#x690E;&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002; PSD-95&#x306E;&#x4F4E;&#x6C34;&#x6E96;&#x3068;&#x68D8;&#x306F;&#x3001;&#x3088;&#x308A;&#x52D5;&#x7684;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x521D;&#x671F;&#x306E;&#x68D8;&#x306B;PSD-95&#x306E;&#x63A1;&#x7528;&#x306F;&#x3001;&#x810A;&#x690E;&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x5316;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x306E;&#x3067;&#x3001;PSD-95&#x6FC3;&#x7E2E;&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x306F;&#x810A;&#x690E;&#x64A4;&#x56DE;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x524D;&#x63D0;&#x6761;&#x4EF6;&#x3067;&#x3042;&#x308D;&#x3046;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x4EEE;&#x8AAC;&#x3092;&#x7ACB;&#x3066;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x4EEE;&#x8AAC;&#x3092;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;PSD-95-GFP&#x3068;DsRed-Express&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x6D77;&#x99AC;&#x9310;&#x4F53;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x76E3;&#x8996;&#x3059;&#x308B;&#x30C7;&#x30E5;&#x30A2;&#x30EB;&#x30AB;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x30E9;&#x30D7;&#x30B9;2&#x5149;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;PSD-95-GFP&#x306E;&#x6FC3;&#x7E2E;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5F62;&#x614B;&#x80CC;&#x9AA8;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x95A2;&#x4FC2;&#x3092;&#x5206;&#x6790;&#x5909;&#x66F4;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x4EEE;&#x8AAC;&#x3068;&#x4E00;&#x81F4;&#x3057;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x64A4;&#x56DE;&#x68D8;&#x306E;&#x5927;&#x534A;&#x306F;&#x6BD4;&#x8F03;&#x7684;PSD-95-GFP&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x8C4A;&#x304B;&#x306B;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x308F;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x80CC;&#x9AA8;&#x306E;&#x53CE;&#x7E2E;&#x3068;PSD-95-GFP&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x3092;&#x64A4;&#x56DE;PSD-95-GFP-&#x6FC3;&#x7E2E;&#x68D8;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3067;&#x3057;&#x3063;&#x304B;&#x308A;&#x3068;PSD-95-GFP&#x6FC3;&#x7E2E;&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x810A;&#x690E;&#x64A4;&#x56DE;&#x3092;&#x524D;&#x306B;&#x3057;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3001;&#x7D50;&#x5408;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x4E00;&#x90E8;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30BF;&#x30F3;&#x30B9;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x810A;&#x690E;&#x306E;&#x64A4;&#x56DE;&#x306F;&#x200B;&#x200B;&#x3001;&#x6A39;&#x72B6;&#x8EF8;&#x4E0A;&#x306E;PSD-95-GFP&#x306E;&#x5927;&#x5E45;&#x306A;&#x5145;&#x5B9F;&#x3092;&#x3082;&#x305F;&#x3089;&#x3057;&#x305F;&#x3001;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x308F;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;&#x524D;&#x306E;&#x68D8;&#x306E;&#x4E0D;&#x5B89;&#x5B9A;&#x5316;&#x306B;&#x5FC5;&#x9808;&#x3067;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;PSD-95&#x6FC3;&#x7E2E;&#x306E;&#x3069;&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x3067;&#x80CC;&#x9AA8;&#x306E;&#x64A4;&#x56DE;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

PSD-95&#x6FC3;&#x7E2E;&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x306F;&#x810A;&#x690E;&#x5F8C;&#x9000;&#x306E;&#x524D;&#x63D0;&#x6761;&#x4EF6;&#x3067;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;

&#xC2E0;&#xACBD; &#xAD6C;&#xC870; &#xD559;&#xC2B5; &#xBC0F; &#xBA54;&#xBAA8;&#xB9AC;&#xC640; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC7A5;&#xAE30; &#xD589;&#xB3D9; &#xC218;&#xC815; &#xAE30;&#xCD08; &#xC0DD;&#xAC01; &#xB41C;&#xB2E4;. &#xD2B9;&#xD788;, &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xC99D;&#xAC70; &#xC5F0;&#xB8E8; &#xBD88;&#xC548; &#xBC0F; &#xB450;&#xB1CC; &#xD68C;&#xB85C; &#xC815;&#xC81C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC138;&#xD3EC; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC73C;&#xB85C; &#xCC99;&#xCD94; &#xB0C5;&#xC758; &#xC190;&#xC2E4;&#xACFC; &#xD568;&#xAED8; &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xCABD;&#xC774;&#xC758; &#xCCA0;&#xD68C;&#xB97C; &#xC544;&#xC9C1; &#xCC99;&#xCD94; &#xCCA0;&#xD3D0; &#xADDC;&#xC81C; &#xD558;&#xB294; &#xBD84;&#xC790; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xC720;&#xC9C0; &#xBCD1;&#xC774; &#xC815;&#xC758; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. Postsynaptic &#xBC00;&#xB3C4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; PSD-95, &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xCABD;&#xC774; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xD48D;&#xC131; &#xD558; &#xAC8C; &#xD558; &#xACE0; &#xCC99;&#xCD94; &#xC548;&#xC815;&#xC131;&#xC73C;&#xB85C; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. PSD-95 &#xB0AE;&#xC740; &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xCABD;&#xC774; &#xB354; &#xC5ED;&#xB3D9;&#xC801;&#xC774; &#xACE0; PSD-95&#xC758; &#xCD08;&#xAE30; &#xCABD;&#xC774; &#xCC44;&#xC6A9; &#xCC99;&#xCD94; &#xC548;&#xC815;&#xD654;&#xC640; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB418;&#xC5B4;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xAC00;&#xC124; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; PSD 95 &#xB18D;&#xCD95;&#xC758; &#xC190;&#xC2E4; &#xCC99;&#xCD94; &#xCCA0;&#xD68C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC804;&#xC81C; &#xC870;&#xAC74;&#xC774; &#xB420; &#xAC83; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC774; &#xAC00;&#xC124;&#xC744; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC950; hippocampal &#xD53C;&#xB77C;&#xBBF8;&#xB4DC; &#xB274;&#xB7F0; PSD-95-GFP&#xC640; DsRed &#xC775;&#xC2A4;&#xD504;&#xB808;&#xC2A4; cotransfected &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1; &#xD558; &#xB4C0;&#xC5BC; &#xCEEC;&#xB7EC; &#xC2DC;&#xAC04; &#xACBD;&#xACFC; &#xB450; &#xAD11;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xACE0; &#xC6B0;&#xB9AC; PSD-95-GFP &#xB18D;&#xCD95; &#xBC0F; &#xCC99;&#xCD94; &#xD615;&#xD0DC;&#xD559; &#xBCC0;&#xD654; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xAD00;&#xACC4;&#xB97C; &#xBD84;&#xC11D; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xAC00;&#xC124;&#xACFC; &#xC77C;&#xCE58;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xCCA0;&#xD68C; &#xD558;&#xB294; &#xCABD;&#xC774; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84; PSD-95-GFP&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB18D;&#xCD95; &#xD588;&#xB2E4; &#xBC1C;&#xACAC;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xCCA0;&#xD68C; &#xD558;&#xB294; &#xCABD;&#xC774; PSD 95 GFP &#xB18D;&#xCD95;&#xC758; &#xD558;&#xC704; &#xC9D1;&#xD569;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCC99;&#xCD94; &#xC218;&#xCD95; &#xBC0F; PSD-95-GFP&#xC758; &#xC190;&#xC2E4; &#xBC00;&#xC811; &#xD558; &#xAC8C; &#xACB0;&#xD569;, PSD-95-GFP &#xB18D;&#xCD95;&#xC758; &#xADF8; &#xC190;&#xC2E4;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xCC99;&#xCD94; &#xCCA0;&#xD68C;&#xB97C; &#xBD99;&#xC774;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294;, &#xC5B4;&#xB5A4; &#xACBD;&#xC6B0;&#xC5D0; &#xCC99;&#xCD94; &#xCCA0;&#xD68C; &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC0E4;&#xD504;&#xD2B8;&#xC5D0; PSD-95-GFP&#xC758; &#xC911;&#xB300; &#xD55C; &#xD48D;&#xBD80;&#xC5D0; &#xACB0;&#xACFC; &#xBC1C;&#xACAC;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xB370;&#xC774;&#xD130; PSD-95&#xC758; &#xC5B4;&#xB5A4; &#xC190;&#xC2E4; &#xB18D;&#xCD95; &#xCABD;&#xC774; &#xBD88;&#xC548; &#xD558;&#xAE30; &#xC804;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xCC99;&#xCD94; &#xCCA0;&#xD68C;&#xC758; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xC9C0;&#xC6D0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

PSD-95 &#xB18D;&#xCD95;&#xC758; &#xC190;&#xC2E4; &#xCC99;&#xCD94; &#xCCA0;&#xD68C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC804;&#xC81C; &#xC870;&#xAC74;&#xC774; &#xC544;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Cambios en la estructura neuronal se cree que la base a largo plazo las modificaciones del comportamiento asociados con el aprendizaje y la memoria. En particular, la considerable evidencia implica la desestabilizaci&#xF3;n y la retracci&#xF3;n de las espinas dendr&#xED;ticas, junto con la p&#xE9;rdida de sinapsis espinales como un importante mecanismo celular para perfeccionar los circuitos cerebrales, sin embargo, los mecanismos moleculares que regulan la eliminaci&#xF3;n columna vertebral siguen estando mal definido. La prote&#xED;na de densidad postsin&#xE1;ptica, PSD-95, es altamente enriquecido en las espinas dendr&#xED;ticas y se ha asociado con la estabilidad de la columna vertebral. Debido a que las espinas con bajos niveles de PSD-95 son m&#xE1;s din&#xE1;micos, y el reclutamiento de PSD-95 a las espinas nacientes se ha asociado con la estabilizaci&#xF3;n de la columna vertebral, la hip&#xF3;tesis de que la p&#xE9;rdida de PSD-95 el enriquecimiento ser&#xED;a un requisito previo para la retracci&#xF3;n de la columna vertebral. Para probar esta hip&#xF3;tesis, hemos utilizado dos colores de lapso de tiempo de dos fotones microscopio para supervisar las neuronas piramidales del hipocampo de rata cotransfectadas con el PSD-95-GFP y DsRed Express-, y se analiz&#xF3; la relaci&#xF3;n entre la PSD-95-GFP el enriquecimiento y la columna vertebral morfol&#xF3;gico cambios. De acuerdo con nuestra hip&#xF3;tesis, se encontr&#xF3; que la mayor&#xED;a de las espinas que se retractaron no enriquecido relativamente a la PSD-95-GFP. Sin embargo, en el subconjunto de PSD-95-GFP enriquecidos con espinas que retra&#xED;das, la contracci&#xF3;n columna y p&#xE9;rdida de PSD-95-GFP se acopla herm&#xE9;ticamente, lo que sugiere que la p&#xE9;rdida de PSD-95-GFP enriquecimiento no preceder retracci&#xF3;n columna vertebral. Adem&#xE1;s, hemos encontrado que, en algunos casos, la retracci&#xF3;n columna dio lugar a un significativo enriquecimiento de PSD-95-GFP en el eje dendr&#xED;tica. Nuestros datos apoyan un modelo de retracci&#xF3;n de la columna vertebral en la que la p&#xE9;rdida de la PSD-95 no es necesario el enriquecimiento antes de la desestabilizaci&#xF3;n de las espinas.

Georgia Woods

Center for Neuroscience

University of California, Davis

Preparation of Gene Gun Bullets and Biolistic Transfection of Neurons in Slice Culture

Georgia Woods

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Preparation of Gene Gun Bullets and Biolistic Transfection of Neurons in Slice Culture

Center for Neuroscience