Isolation of <em>Drosophila melanogaster</em> Testes

The testes of Drosophila melanogaster provide an important model for the study of stem cell maintenance and differentiation, meiosis, and soma-germline ...

University of Massachusetts Medical School

PIWI&#x3068;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x4F4E;&#x5206;&#x5B50;RNA&#xFF08;piRNA&#x306F;&#xFF09;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x751F;&#x6B96;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x7121;&#x97F3;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30BE;&#x30F3;&#x3002; piRNA&#x306F;&#x3001;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30BE;&#x30F3;&#x304C;&#x8C4A;&#x5BCC;&#x306A;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x5EA7;&#x306B;&#x307E;&#x305F;&#x304C;&#x308B;&#x9577;&#x3044;&#x8EE2;&#x5199;&#x7523;&#x7269;&#x304B;&#x3089;&#x6D3E;&#x751F;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30CA;&#x30B9;&#x3084;Piwi&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3057;&#x305F;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C1;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D4;&#x30EB;&#x30CA;&#x304C;&#x3001;Piwi&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;Argonaute3&#xFF08;Ago3&#xFF09;&#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30D4;&#x30EB;&#x30CA;&#x611F;&#x899A;&#x306E;&#x751F;&#x7523;&#x3092;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AC;&#x30FC;&#x3059;&#x308B;autoamplification&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x3092;&#x6307;&#x793A;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x8003;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30D4;&#x30EB;&#x30CA;&#x306F;&#x3001;&#x7B2C;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D4;&#x30EB;&#x30CA;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x60F3;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x691C;&#x67FB;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x3001;ago3&#x306B;&#x5F37;&#x3044;&#x6A5F;&#x80FD;&#x55AA;&#x5931;&#x5909;&#x7570;&#x3092;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30BE;&#x30F3;&#x3092;&#x9ED9;&#x3089;&#x305B;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x884C;&#x52D5;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;piRNA&#x306F;&#x6570;&#x3092;&#x5897;&#x3084;&#x3059;&#x3001;Ago3&#x884C;&#x70BA;&#x306F;&#x30D4;&#x30EB;&#x30CA;&#x30D7;&#x30FC;&#x30EB;&#x3092;&#x5897;&#x5E45;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306B;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C1;&#x30D0;&#x30A4;&#x30A2;&#x30B9;&#x3092;&#x5F37;&#x5236;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x308F;&#x304B;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;PIWI&#x3092;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x306B;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x306B;&#x3001;Ago3&#x975E;&#x4F9D;&#x5B58;&#x306E;piRNA&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x691C;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x306E;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x304C;&#x5BFE;&#x8C61;&#x3068;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30BE;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x5834;&#x5408;&#x3001;&#x751F;&#x6B96;&#x7D30;&#x80DE;&#x7CFB;&#x5217;&#x3092;&#x8D85;&#x3048;&#x305F;piRNA&#x306F;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3001;&#x4F53;&#x306E;&#x5375;&#x5DE3;&#x6FFE;&#x80DE;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x767A;&#x73FE;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30D5;&#x30E9;&#x30E1;&#x30F3;&#x30B3;&#x306E;&#x8ECC;&#x8DE1;&#x3001;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Argonaute3&#x306E;&#x4E0D;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x751F;&#x6B96;&#x7D30;&#x80DE;piRNA&#x306F;&#x306E;&#x5D29;&#x58CA;&#x306F;&#x3001;&#x30CF;&#x30A8;&#x306E;&#x4F53;&#x7D30;&#x80DE;piRNA&#x306F;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;

Piwi &#xC791;&#xC6A9; RNAs (piRNAs) &#xB3D9;&#xBB3C; &#xC0DD;&#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; transposons &#xCE68;&#xBB35;. Pirnas&#xB294; transposon &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; &#xAC8C;&#xB188; loci&#xC5D0; &#xAC78;&#xCE5C; &#xAE34; &#xB179;&#xCDE8; &#xB85D;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB418; &#xACE0; &#xC5F4;&#xB9E4; &#xB610;&#xB294; Piwi &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C; &#xC13C;&#xC2A4; piRNA &#xAC10;&#xAC01; piRNA &#xBC14;&#xC6B4;&#xB4DC; PIWI &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; Argonaute3 (Ago3)&#xC758; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC744; &#xC720;&#xBC1C; &#xD558;&#xB294; autoamplification &#xB8E8;&#xD504;&#xB97C; &#xC9C1;&#xC811; &#xC0DD;&#xAC01; &#xB41C;&#xB2E4;. &#xCC28;&#xB840;&#xB85C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; piRNA &#xC0DD;&#xC0B0; &#xB450; &#xBC88;&#xC9F8; &#xC13C;&#xC2A4; piRNA &#xC0C1;&#xC0C1; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC774; &#xBAA8;&#xB378;&#xC758; &#xC9C1;&#xC811;&#xC801;&#xC778; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xAC80;&#xC0AC; &#xC218; &#xC788;&#xB3C4;&#xB85D; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC190;&#xC2E4; &#xBCC0;&#xC774; ago3&#xC5D0; &#xB300;&#xD574; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xADF8;&#xC758; Ago3 &#xC5ED;&#xD560; piRNA &#xD480;&#xC744; &#xC99D;&#xD3ED; &#xD558; &#xACE0; &#xC13C;&#xC2A4; &#xBC14;&#xC774;&#xC5B4;&#xC2A4; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC5D0; &#xC801;&#xC6A9;&#xD560; transposons &#xCE68;&#xBB35; &#xD558; &#xC5ED;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; Pirnas&#xC758; &#xC218;&#xB97C; &#xC99D;&#xAC00; &#xBC1C;&#xACAC;. Piwi&#xC5D0; &#xC911;&#xC2EC;&#xC73C;&#xB85C; &#xB450; &#xBC88;&#xC9F8;, Ago3 &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; piRNA &#xD1B5;&#xB85C; &#xAC10;&#xC9C0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC885;&#xC885;&#xC774; &#xB450; &#xBC88;&#xC9F8; &#xD1B5;&#xB85C; &#xB300;&#xC0C1; transposons&#xB294; &#xBC88;&#xC9F8; &#xB118;&#xC5B4; Pirnas&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xCCB4;&#xC138;&#xD3EC; &#xB09C;&#xC18C; &#xC5EC; &#xD3EC; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xD45C;&#xD604; &#xB418;&#xB294; &#xD50C; &#xB77C; &#xBA69; &#xCF54; &#xB85C;&#xCEE4; &#xC2A4;&#xC5D0; &#xAC70;&#xC8FC;.

&#xBC88;&#xC9F8; piRNAs argonaute3&#xC758; &#xBD80;&#xC7AC;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xBD95;&#xAD34; &#xCCB4;&#xC138;&#xD3EC; Pirnas&#xB97C; &#xD30C;&#xB9AC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900;&#xB2E4;.

ARNs Piwi-interactivos (piRNAs) transposones silencio en las c&#xE9;lulas germinales de los animales. piRNAs se cree que proceden de las transcripciones que abarcan largos transpos&#xF3;n ricos en loci del genoma y de dirigir un bucle en el que un autoamplification piRNA antisentido, con destino a la berenjena o la prote&#xED;na Piwi, desencadena la producci&#xF3;n de un sentido piRNA une a la prote&#xED;na PIWI Argonaute3 (Ago3). A su vez, el nuevo piRNA est&#xE1; previsto para producir una segunda piRNA antisentido. A continuaci&#xF3;n, describimos fuertes p&#xE9;rdidas de la funci&#xF3;n de las mutaciones en el ago3, lo que permite una prueba gen&#xE9;tica directa de este modelo. Se encuentra que Ago3 act&#xFA;a para amplificar piscinas Pirna y para imponer sobre ellos un sesgo antisentido, aumentando el n&#xFA;mero de piRNAs que pueden actuar para silenciar transposones. Tambi&#xE9;n se detecta un segundo, Ago3-independiente de la v&#xED;a piRNA centrado en P&#xED;o. Los transposones objetivo de esta segunda v&#xED;a a menudo residen en el lugar del flamenco, que se expresa en las c&#xE9;lulas som&#xE1;ticas de fol&#xED;culos ov&#xE1;ricos, lo que sugiere un papel para piRNAs m&#xE1;s all&#xE1; de la l&#xED;nea germinal.

El colapso de la l&#xED;nea germinal piRNAs en ausencia de Argonaute3 revela som&#xE1;tica piRNAs en las moscas

Piwi-interacting RNAs (piRNAs) silence transposons in animal germ cells. piRNAs are thought to derive from long transcripts spanning transposon-rich genomic loci and to direct an autoamplification loop in which an antisense piRNA, bound to Aubergine or Piwi protein, triggers production of a sense piRNA bound to the PIWI protein Argonaute3 (Ago3). In turn, the new piRNA is envisioned to produce a second antisense piRNA. Here, we describe strong loss-of-function mutations in ago3, allowing a direct genetic test of this model. We find that Ago3 acts to amplify piRNA pools and to enforce on them an antisense bias, increasing the number of piRNAs that can act to silence transposons. We also detect a second, Ago3-independent piRNA pathway centered on Piwi. Transposons targeted by this second pathway often reside in the flamenco locus, which is expressed in somatic ovarian follicle cells, suggesting a role for piRNAs beyond the germline.

Collapse of germline piRNAs in the absence of Argonaute3 reveals somatic piRNAs in flies.

Piwi-transposons interaction ARN silence (piRNAs) dans les cellules germinales animales. piRNAs sont pens&#xE9;s pour d&#xE9;river &#xE0; partir de transcriptions de longues couvrant loci g&#xE9;nomiques transposon-riches et de diriger une boucle autoamplification dans lequel un PIRNA antisens, li&#xE9; &#xE0; Aubergine ou de prot&#xE9;ines Piwi, d&#xE9;clenche la production d&#x26;#39;un sens Pirna li&#xE9; &#xE0; la prot&#xE9;ine PIWI Argonaute3 (Ago3). &#xC0; son tour, le nouveau PIRNA est pr&#xE9;vu pour produire un PIRNA antisens seconde. Ici, nous d&#xE9;crivons fortes pertes de fonction des mutations dans ago3, permettant un test g&#xE9;n&#xE9;tique direct de ce mod&#xE8;le. Nous constatons que Ago3 actes d&#x26;#39;amplifier les piscines Pirna et de faire appliquer sur eux un parti pris anti-sens, l&#x26;#39;augmentation du nombre de piRNAs qui peuvent agir pour r&#xE9;duire au silence les transposons. Nous avons &#xE9;galement de d&#xE9;tecter une seconde, voie PIRNA Ago3 ind&#xE9;pendant centr&#xE9; sur Piwi. Les transposons vis&#xE9;s par cette seconde voie r&#xE9;side souvent dans le locus flamenco, qui est exprim&#xE9;e dans les cellules somatiques des follicules ovariens, ce qui sugg&#xE8;re un r&#xF4;le pour piRNAs au-del&#xE0; de la lign&#xE9;e germinale.

R&#xE9;duire de PiRNAs germinales de l&#x26;#39;absence de Argonaute3 r&#xE9;v&#xE8;le somatique PiRNAs chez les mouches

Piwi-Interaktion RNAs (PiRNAs) Stille Transposonen in tierische Keimzellen. PiRNAs werden gedacht, lange Transkripte spanning Transposon-reiche genomic Loci abgeleitet und um eine Autoamplification-Schleife zu leiten, in der ein antisense PiRNA, verpflichtet, Aubergine oder Piwi-Protein, eine Sinn-PiRNA-Grenze dem PIWI-Protein Argonaute3 (Ago3) ausl&ouml;st. Wiederum ist der neue PiRNA vorgestellt, um eine zweite antisense PiRNA zu produzieren. Hier beschreiben wir starke Verlust of Function-Mutationen im ago3, so dass einen direkten genetischen Test dieses Modells. Wir finden, dass Ago3 fungiert, PiRNA-Becken zu verst&auml;rken und Sie erzwingen ein antisense Vorurteil, Erh&ouml;hung der Zahl der PiRNAs, die zum Schweigen Transposonen fungieren k&ouml;nnen. Wir erkennen auch eine zweite, unabh&auml;ngige Ago3 PiRNA-Weg auf Piwi zentriert. Transposonen gezielt sich diese zweite Option oft befinden sich in der Flamenco-Locus, die in somatische Ovarialfollikel Zellen ausgedr&uuml;ckt wird vorgeschlagen eine Rolle f&uuml;r PiRNAs &uuml;ber die Keimbahn.

Zusammenbruch der Keimbahn PiRNAs in Ermangelung Argonaute3 offenbart somatische PiRNAs in fliegen.

Piwi-interacting RNAs (piRNAs) silenzio trasposoni nelle cellule germinali degli animali. piRNAs sono pensato per derivare da lunghe trascrizioni spanning loci genomici transposon-ricco e per indirizzare un ciclo di autoamplification in cui un piRNA antisenso, associato a proteine melanzane o Piwi, innesca la produzione di un senso piRNA associato alla proteina PIWI Argonaute3 (Ago3). A sua volta, il nuovo piRNA &egrave; immaginato per produrre un secondo piRNA antisenso. Qui, descriviamo forte mutazioni con perdita di funzione in ago3, consentendo un test genetico diretto di questo modello. Troviamo che Ago3 agisce per amplificare piRNA piscine e applicare su di essi un bias antisenso, aumentando il numero dei piRNAs che possono agire al silenzio trasposoni. Rileviamo anche un percorso di piRNA secondo, Ago3 indipendente centrato su Piwi. Trasposoni bersagliati da questo secondo percorso spesso risiedono nel locus di flamenco, che &egrave; espressa nelle cellule somatiche follicolo ovarico, suggerendo un ruolo di piRNAs di l&agrave; della linea germinale.

Crollo di germline piRNAs in assenza di Argonaute3 rivela somatico piRNAs in mosche.

Piwi &#x4E92;&#x52A8; Rna (piRNAs) &#x6C89;&#x9ED8;&#x4E2D;&#x52A8;&#x7269;&#x751F;&#x6B96;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x8F6C;&#x5EA7;&#x5B50;&#x3002;piRNAs &#x88AB;&#x8BA4;&#x4E3A;&#x6E90;&#x81EA;&#x8DE8;&#x8D8A;&#x5BCC;&#x8F6C;&#x5EA7;&#x5B50;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x57FA;&#x56E0;&#x4F4D;&#x70B9;&#x7684;&#x957F;&#x6210;&#x7EE9;&#x5355;&#x5E76;&#x76F4;&#x63A5;&#x5728;&#x5176;&#x4E2D;&#x53CD;&#x4E49; piRNA&#xFF0C;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x8304;&#x5B50;&#x6216; Piwi &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#xFF0C;&#x89E6;&#x53D1;&#x611F; piRNA &#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; PIWI &#x86CB;&#x767D;&#x8D28; Argonaute3 (Ago3) &#x751F;&#x4EA7;&#x7684; autoamplification &#x5FAA;&#x73AF;&#x3002;&#x53CD;&#x8FC7;&#x6765;&#xFF0C;&#x65B0;&#x7684; piRNA &#x7684;&#x8BBE;&#x60F3;&#x662F;&#x4EE5;&#x4EA7;&#x751F;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x4E2A;&#x53CD;&#x4E49; piRNA&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x63CF;&#x8FF0;&#x5F3A;&#x529F;&#x80FD;&#x635F;&#x5931;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684; ago3&#xFF0C;&#x5141;&#x8BB8;&#x76F4;&#x63A5;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x6D4B;&#x8BD5;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6A21;&#x5F0F;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x627E;&#x5230; Ago3 &#x884C;&#x4E3A;&#x653E;&#x5927; piRNA &#x6C60;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5BF9;&#x5176;&#x6267;&#x884C;&#x53CD;&#x4E49;&#x7684;&#x504F;&#x89C1;&#xFF0C;&#x80FD;&#x591F;&#x91C7;&#x53D6;&#x884C;&#x52A8;&#xFF0C;&#x538B;&#x5236;&#x8F6C;&#x5EA7;&#x5B50;&#x7684; piRNAs &#x7684;&#x6570;&#x91CF;&#x589E;&#x52A0;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FD8;&#x53D1;&#x73B0; Piwi &#x4E0A;&#x5C45;&#x4E2D;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x4E2A;&#x72EC;&#x7ACB;&#x7684; Ago3 piRNA &#x901A;&#x8DEF;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x8FD9;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x4E2A;&#x9014;&#x5F84;&#x5F80;&#x5F80;&#x6709;&#x9488;&#x5BF9;&#x6027;&#x7684;&#x8F6C;&#x5EA7;&#x5B50;&#x9A7B;&#x7559;&#x5728;&#x4F5B;&#x5170;&#x660E;&#x9AD8;&#x8F68;&#x8FF9;&#xFF0C;&#x4F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5375;&#x6CE1;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x6697;&#x793A; piRNAs &#x8D85;&#x8D8A;&#x751F;&#x6B96;&#x65B9;&#x9762;&#x53D1;&#x6325;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x6765;&#x8868;&#x793A;&#x3002;

&#x5D29;&#x6E83;&#x7684;&#x751F;&#x6B96; piRNAs Argonaute3 &#x5982;&#x679C;&#x6CA1;&#x6709;&#x63ED;&#x793A;&#x4E86;&#x4F53;&#x7EC6;&#x80DE; piRNAs &#x5728;&#x82CD;&#x8747;&#x3002;

piRNAs &#x6307;&#x5BFC; PIWI &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x6C89;&#x9ED8;&#x4E2D;&#x52A8;&#x7269;&#x751F;&#x6B96;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x8F6C;&#x5EA7;&#x5B50;&#x3002;&#x50AC;&#x5316; PIWI &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x8304;&#x5B50; (Aub) &#x548C; Argonaute3 &#x7684; piRNA &#x5B9A;&#x5411;&#x7684;&#x5288;&#x88C2; &mdash; &mdash; RNA &#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x5FAA;&#x73AF; (Ago3) &#x5728;&#x9ED1;&#x8179;&#x679C;&#x8747; &mdash; &mdash; &#x5C55;&#x5F00;&#x53CD;&#x4E49; piRNAs &#x8F6C;&#x5EA7;&#x5B50;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#xFF0C;&#x79F0;&#x4E3A;&#x4E52;&#x4E53;&#x5468;&#x671F;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x54CD;&#x5E94;&#x7684;&#x4EBA;&#x53E3;&#x3002;&#x5F02;&#x578B;&#x4E52;&#x4E53;&#x7403; Aub &#x548C; Ago3 &#x4E4B;&#x95F4;&#x53EF;&#x786E;&#x4FDD;&#x8BE5;&#x53CD;&#x4E49; piRNAs &#x5360;&#x4E3B;&#x5BFC;&#x5730;&#x4F4D;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C55;&#x793A;&#x79E6;&#xFF0C;&#x5176;&#x86CB;&#x767D;&#x4EA7;&#x54C1;&#x5305;&#x542B; E3 &#x8FDE;&#x63A5;&#x9176;&#x548C;&#x90FD;&#x94CE;&#x98CE;&#x683C;&#x7684;&#x57DF;&#xFF0C;piRNA &#x901A;&#x8DEF;&#x57FA;&#x56E0; colocalizes &#x4E0E; Aub &#x548C; Ago3 nuage&#xFF0C;&#x5377;&#x5165;&#x8F6C;&#x5EA7;&#x5B50;&#x6C89;&#x9ED8;&#x7684;&#x6838;&#x5468;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;&#x79E6;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#xFF0C;&#x5C11; Ago3 &#x7ED1;&#x5B9A; Aub&#xFF0C;&#x5F92;&#x52B3; Aub:Aub &#x540C;&#x578B;&#x4E52;&#x4E53;&#x7403;&#x76DB;&#x884C;&#xFF0C;&#x53CD;&#x4E49; piRNAs &#x51CF;&#x5C11;&#x3001; &#x6FC0;&#x6D3B;&#x79FB;&#x52A8;&#x9057;&#x4F20;&#x5206;&#x5B50;&#x7684;&#x5F88;&#x591A;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x7684;&#x548C;&#x62A4;&#x58EB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684; DNA &#x635F;&#x4F24;&#x79EF;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x79E6;&#x5F3A;&#x5236;&#x5F02;&#x578B;&#x4E52;&#x4E53;&#x7403;&#x4E4B;&#x95F4; Aub &#x548C; Ago3&#xFF0C;&#x786E;&#x4FDD;&#x8F6C;&#x5EA7;&#x5B50;&#x7684;&#x58F0;&#x97F3;&#x88AB;&#x538B;&#x5236;&#x548C;&#x7EF4;&#x62A4;&#x751F;&#x6B96;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x7684;&#x5B8C;&#x6574;&#x6027;&#x3002;

&#x5F02;&#x578B; piRNA &#x4E52;&#x4E53;&#x7403;&#x9700;&#x8981;&#x79E6;&#x3001; &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684; E3 &#x8FDE;&#x63A5;&#x9176;&#x548C;&#x90FD;&#x94CE;&#x98CE;&#x683C;&#x7684;&#x57DF;&#x3002;

piRNAs guide PIWI proteins to silence transposons in animal germ cells. Reciprocal cycles of piRNA-directed RNA cleavage--catalyzed by the PIWI proteins Aubergine (Aub) and Argonaute3 (Ago3) in Drosophila melanogaster--expand the population of antisense piRNAs in response to transposon expression, a process called the Ping-Pong cycle. Heterotypic Ping-Pong between Aub and Ago3 ensures that antisense piRNAs predominate. We show that qin, a piRNA pathway gene whose protein product contains both E3 ligase and Tudor domains, colocalizes with Aub and Ago3 in nuage, a perinuclear structure implicated in transposon silencing. In qin mutants, less Ago3 binds Aub, futile Aub:Aub homotypic Ping-Pong prevails, antisense piRNAs decrease, many families of mobile genetic elements are reactivated, and DNA damage accumulates in nurse cells and oocytes. We propose that Qin enforces heterotypic Ping-Pong between Aub and Ago3, ensuring that transposons are silenced and maintaining the integrity of the germline genome.

Heterotypic piRNA Ping-Pong requires qin, a protein with both E3 ligase and Tudor domains.

piRNAs gu&#xED;a PIWI prote&#xED;nas para silenciar a los transposones en las c&#xE9;lulas germinales de los animales. Ciclos rec&#xED;procos de Pirna dirigida divisi&#xF3;n ARN - catalizadas por prote&#xED;nas de la berenjena PIWI (AUB) y Argonaute3 (Ago3) en Drosophila melanogaster - ampliar la poblaci&#xF3;n de piRNAs antisentido en respuesta a la expresi&#xF3;n transpos&#xF3;n, un proceso llamado el ciclo de ping-pong. Heterot&#xED;pico de ping-pong entre Aub y Ago3 asegura que piRNAs antisentido predominan. Se demuestra que Qin, un gen cuya prote&#xED;na v&#xED;a piRNA producto contiene tanto ligasa E3 y dominios Tudor, colocalizes con Aub y Ago3 en nuage, una estructura perinuclear implicado en el silenciamiento de transposones. En los mutantes qin, menos Ago3 une Aub, in&#xFA;til Aub: Aub homotipica de ping-pong prevalece, antisentido disminuci&#xF3;n piRNAs, muchas familias de elementos gen&#xE9;ticos m&#xF3;viles se reactiv&#xF3;, y da&#xF1;os en el ADN se acumula en las c&#xE9;lulas de enfermer&#xED;a y de los ovocitos. Proponemos que Qin cumplir heterot&#xED;pica de ping-pong entre Aub y Ago3, asegurando que los transposones son silenciadas y el mantenimiento de la integridad del genoma de la l&#xED;nea germinal.

Heterot&#xED;pico PIRNA de ping-pong Requiere Qin, una prote&#xED;na con dos ligasa E3 y dominio Tudor

piRNAs guide de PIWI prot&#xE9;ines pour faire taire les transposons dans les cellules germinales animales. Cycles r&#xE9;ciproques de Pirna dirig&#xE9;e clivage d&#x26;#39;ARN - catalys&#xE9;es par des prot&#xE9;ines de la Aubergine PIWI (Aub) et Argonaute3 (Ago3) chez Drosophila melanogaster - &#xE9;largir la population des piRNAs antisens en r&#xE9;ponse &#xE0; l&#x26;#39;expression du transposon, un processus appel&#xE9; le cycle de Ping-Pong. H&#xE9;t&#xE9;rotypique Ping-Pong entre Aub et Ago3 veille &#xE0; ce que piRNAs antisens pr&#xE9;dominent. Nous montrons que qin, un g&#xE8;ne dont la prot&#xE9;ine voie PIRNA produit contient &#xE0; la fois ligase E3 et domaines Tudor, co-localise avec Aub et Ago3 en nuage, une structure impliqu&#xE9;e dans p&#xE9;rinucl&#xE9;aire silence transposon. Chez les mutants qin, moins Ago3 lie Aub, futile Aub: Aub homotypique Ping-Pong pr&#xE9;vaut, antisens piRNAs diminution, de nombreuses familles d&#x26;#39;&#xE9;l&#xE9;ments g&#xE9;n&#xE9;tiques mobiles sont r&#xE9;activ&#xE9;s et dommages &#xE0; l&#x26;#39;ADN s&#x26;#39;accumule dans les cellules des infirmi&#xE8;res et des ovocytes. Nous proposons que Qin applique h&#xE9;t&#xE9;rotypique Ping-Pong entre Aub et Ago3, veiller &#xE0; ce que les transposons sont r&#xE9;duits au silence et le maintien de l&#x26;#39;int&#xE9;grit&#xE9; du g&#xE9;nome lign&#xE9;e germinale.

H&#xE9;t&#xE9;rotypique PIRNA Ping-Pong N&#xE9;cessite Qin, une prot&#xE9;ine &#xE0; la fois ligase E3 et les domaines Tudor

PiRNAs F&uuml;hrer PIWI Proteine zum Transposonen in tierische Keimzellen zu schweigen. Wechselseitige Zyklen der unter der Regie von PiRNA RNA Spaltung--katalysiert durch die PIWI Proteine Aubergine (Aub) und Argonaute3 (Ago3) in Drosophila Melanogaster--erweitern die Bev&ouml;lkerung von antisense PiRNAs als Reaktion auf Transposon Ausdruck, ein Prozess, den Ping-Pong-Zyklus genannt. Heterotypischen Ping-Pong zwischen Aub und Ago3 sorgt daf&uuml;r, dass antisense PiRNAs &uuml;berwiegen. Wir zeigen, dass Qin, ein PiRNA Weg gen dessen Protein-Produkt E3 Ligase und Tudor-Dom&auml;nen enth&auml;lt mit Aub und Ago3 in Nuage, eine perinukle&auml;re Struktur im Transposon Unterdr&uuml;ckender impliziert colocalizes. In Qin Mutanten, weniger Ago3 bindet Aub, vergeblichen Aub:Aub homotypischen, die Ping-Pong vorherrscht, antisense PiRNAs verringern, viele Familien von mobilen genetischen Elementen werden reaktiviert und DNA-Sch&auml;den sammelt in Krankenschwester Zellen und Eizellen. Wir schlagen vor, dass Qin heterotypischen Ping-Pong zwischen Aub und Ago3 erzwingt, um sicherzustellen, dass Transposons zum Schweigen gebracht werden und die Integrit&auml;t des Genoms Keimbahn.

Heterotypischen PiRNA Pingpong erfordert Qin, ein Protein mit E3 Ligase und Tudor-Dom&auml;nen.

piRNAs guida le proteine PIWI al silenzio trasposoni nelle cellule germinali degli animali. Cicli reciproci di fenditura RNA piRNA-diretto - catalizzata da proteine PIWI melanzana (Aub) e Argonaute3 (Ago3) in Drosophila melanogaster - espandere la popolazione di piRNAs antisenso in risposta all&#39;espressione trasposone, un processo chiamato ciclo di ping-pong. Heterotypic ping-pong tra Aub e Ago3 assicura che piRNAs antisenso predominano. Mostriamo che qin, il cui prodotto proteico contiene sia E3 ligasi e domini Tudor, un gene del pathway piRNA colocalizza con Aub e Ago3 in nuage, una struttura perinucleare implicata nel silenziamento trasposone. Mutanti di qin, meno Ago3 lega Aub, inutile Aub:Aub homotypic ping pong prevale, piRNAs antisenso diminuire, molte famiglie di elementi genetici mobili vengono riattivate e danno al DNA si accumula in ovociti e infermiera cellule. Proponiamo che Qin impone heterotypic ping pong tra Aub e Ago3, assicurando che i trasposoni sono silenziati e mantenendo l&#39;integrit&agrave; del genoma della linea germinale.

PiRNA heterotypic ping pong richiede qin, una proteina con entrambi i domini Tudor ed E3 ligasi.

piRNA&#x306F;&#x30AC;&#x30A4;&#x30C9;PIWI&#x306F;&#x3001;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x751F;&#x6B96;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30BE;&#x30F3;&#x3092;&#x9ED9;&#x3089;&#x305B;&#x308B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x30D4;&#x30EB;&#x30CA;&#x4E3B;&#x5C0E;RNA&#x5207;&#x65AD;&#x306E;&#x9006;&#x6570;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB; - &#x30AD;&#x30A4;&#x30ED;&#x30B7;&#x30E7;&#x30A6;&#x30B8;&#x30E7;&#x30A6;&#x30D0;&#x30A8;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;PIWI&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30CA;&#x30B9;&#xFF08;AUB&#xFF09;&#x3068;Argonaute3&#xFF08;Ago3&#xFF09;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x89E6;&#x5A92;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x304C; - &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30BE;&#x30F3;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C1;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B9;piRNA&#x306F;&#x4EBA;&#x53E3;&#x3092;&#x5C55;&#x958B;&#x3057;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30D4;&#x30F3;&#x30DD;&#x30F3;&#xB7;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x3068;&#x547C;&#x3070;&#x308C;&#x308B;&#x3002; AUB&#x3068;Ago3&#x306E;&#x9593;&#x3067;&#x30D4;&#x30F3;&#x30DD;&#x30F3;&#x7570;&#x578B;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C1;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B9;piRNA&#x306F;&#x304C;&#x512A;&#x52E2;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x4FDD;&#x8A3C;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x79E6;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x88FD;&#x54C1;E3&#x30EA;&#x30AC;&#x30FC;&#x30BC;&#x3068;&#x30C1;&#x30E5;&#x30FC;&#x30C0;&#x30FC;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x306E;piRNA&#x7D4C;&#x8DEF;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306F;&#x3001;nuage&#x306E;AUB&#x3068;Ago3&#x3001;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30BE;&#x30F3;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x6838;&#x5468;&#x56F2;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3068;&#x5171;&#x5C40;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x79E6;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x4EE5;&#x4E0B;&#x306E;Ago3&#x306F;AUB&#x7D50;&#x5408;&#x3057;&#x3001;&#x7121;&#x76CA;&#x306A;AUB&#xFF1A;AUB&#x30DB;&#x30E2;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x30D4;&#x30F3;&#x30DD;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C1;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B9;piRNA&#x306F;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3092;&#x512A;&#x5148;&#x3001;&#x30E2;&#x30D0;&#x30A4;&#x30EB;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x8981;&#x7D20;&#x306E;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x5BB6;&#x65CF;&#x304C;&#x518D;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x5316;&#x3057;&#x3001;DNA&#x640D;&#x50B7;&#x306F;&#x3001;&#x770B;&#x8B77;&#x5E2B;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306B;&#x84C4;&#x7A4D;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x79E6;&#x306F;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30BE;&#x30F3;&#x304C;&#x6C88;&#x9ED9;&#x3057;&#x3001;&#x751F;&#x6B96;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306E;&#x5B8C;&#x5168;&#x6027;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x4FDD;&#x8A3C;&#x3001;AUB&#x3068;Ago3&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x7570;&#x578B;&#x30D4;&#x30F3;&#x30DD;&#x30F3;&#x3092;&#x5F37;&#x5236;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3059;&#x308B;&#x3002;

&#x7570;&#x578B;&#x30D4;&#x30EB;&#x30CA;&#x30D4;&#x30F3;&#x30DD;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x79E6;&#x3001;E3&#x30EA;&#x30AC;&#x30FC;&#x30BC;&#x3068;&#x30C1;&#x30E5;&#x30FC;&#x30C0;&#x30FC;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;

piRNAs &#xB3D9;&#xBB3C; &#xC0DD;&#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; transposons &#xCE68;&#xBB35; PIWI &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xAC00;&#xC774;&#xB4DC;. &#xD53C; &#xB974; &#xB098; &#xAC10;&#xB3C5; RNA &#xBD84;&#xC5F4;-&#xC5F4;&#xB9E4; (Aub) &#xBC0F; Argonaute3 PIWI &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCD09;&#xB9E4;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC0AC;&#xC774;&#xD074; (Ago3) Drosophila melanogaster-&#xC13C;&#xC2A4; piRNAs transposon &#xC2DD; &#xD0C1;&#xAD6C; &#xC8FC;&#xAE30; &#xB77C;&#xACE0; &#xD558;&#xB294; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xC778;&#xAD6C;&#xB97C; &#xD655;&#xC7A5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Aub &#xC0AC;&#xC774; Ago3 heterotypic &#xD0C1;&#xAD6C; &#xADF8; &#xC13C;&#xC2A4; piRNAs predominate &#xBCF4;&#xC7A5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC9C4;, &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC81C;&#xD488; &#xD3EC;&#xD568; E3 &#xB9AC;&#xAC00; &#xD29C;&#xB354; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; piRNA &#xD1B5;&#xB85C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; nuage, transposon &#xCE68;&#xBB35;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xB8E8; perinuclear &#xAD6C;&#xC870;&#xC5D0;&#xC5D0;&#xC11C; Aub&#xC640; Ago3 colocalizes &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. Ago3 &#xBC14;&#xC778;&#xB529; Aub, &#xC4F8;&#xB370; &#xC5C6;&#xB294; Aub:Aub homotypic &#xD0C1;&#xAD6C; &#xC6B0;&#xC138; &#xD558;&#xB2E4; &#xB35C; &#xC9C4; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC13C;&#xC2A4; piRNAs &#xAC10;&#xC18C; &#xD558; &#xACE0; &#xBAA8;&#xBC14;&#xC77C; &#xC720;&#xC804;&#xC801; &#xC694;&#xC18C;&#xC758; &#xB9CE;&#xC740; &#xAC00;&#xC871; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xAC04;&#xD638;&#xC0AC; &#xC804;&#xC9C0;&#xC640; oocytes&#xC5D0;&#xC11C; DNA &#xC190;&#xC0C1;&#xC774; &#xCD95;&#xC801;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC9C4; &#xC801;&#xC6A9; Aub&#xC640; Ago3, heterotypic &#xD0C1;&#xAD6C; transposons &#xCE68;&#xBB35;&#xC740; &#xBC88;&#xC9F8; &#xAC8C;&#xB188;&#xC758; &#xBB34;&#xACB0;&#xC131;&#xC744; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558; &#xACE0; &#xC81C;&#xC548; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Heterotypic &#xD53C; &#xB974; &#xB098; &#xD0C1;&#xAD6C; &#xC9C4;, E3 &#xB9AC;&#xAC00;&#xC640; &#xD29C;&#xB354; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD544;&#xC694;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Shengmei Ma

Department of Biochemistry & Molecular Pharmacology and Howard Hughes Medical Institute

University of Massachusetts Medical School

Isolation of Drosophila melanogaster Testes

Shengmei Ma

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Department of Biochemistry & Molecular Pharmacology and Howard Hughes Medical Institute

University of Massachusetts Medical School

Isolation of Drosophila melanogaster Testes

Department of Biochemistry & Molecular Pharmacology and Howard Hughes Medical Institute