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In Vitro Nuclear Assembly Using Fractionated Xenopus Egg Extracts

Nuclear membrane assembly is an essential step in the cell division cycle; this process can be replicated in the test tube by combining Xenopus sperm ...

Emory University

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The mitotic spindle is responsible for correctly segregating chromosomes during cellular division. Disruption of this process leads to genomic instability in the form of aneuploidy, which can contribute to the development of cancer. Therefore, identification and characterization of factors that are responsible for the assembly and regulation of the spindle are crucial. Not only are these factors often altered in cancer, but they also serve as potential therapeutic targets. Xenopus egg extract is a powerful tool for studying spindle assembly and other cell cycle-related events owing, in large part, to the ease with which protein function can be manipulated in the extract. Importantly, the spindle factors that have been characterized in egg extract are conserved in human spindle assembly. In this review, we explain how the extract is prepared and manipulated to study the function of individual factors in spindle assembly and the spindle checkpoint. Furthermore, we provide examples of several spindle factors that have been defined functionally using the extract system and discuss how these factors are altered in human cancer.

Learning about cancer from frogs: analysis of mitotic spindles in Xenopus egg extracts.

Le fuseau mitotique est responsable de la s&#xE9;gr&#xE9;gation correctement chromosomes pendant la division cellulaire. La perturbation de ce processus conduit &#xE0; une instabilit&#xE9; g&#xE9;nomique sous la forme de l&#x26;#39;aneuplo&#xEF;die, qui peut contribuer au d&#xE9;veloppement du cancer. Par cons&#xE9;quent, l&#x26;#39;identification et la caract&#xE9;risation des facteurs qui sont responsables de l&#x26;#39;assemblage et le r&#xE9;glage de la broche sont cruciales. Non seulement ces facteurs souvent alt&#xE9;r&#xE9; dans le cancer, mais ils servent aussi comme des cibles th&#xE9;rapeutiques potentielles. Xenopus oeuf extrait est un outil puissant pour &#xE9;tudier l&#x26;#39;assemblage du fuseau et d&#x26;#39;autres li&#xE9;es au cycle du cellulaire en raison des &#xE9;v&#xE9;nements, en grande partie, &#xE0; la facilit&#xE9; avec laquelle la fonction des prot&#xE9;ines peuvent &#xEA;tre manipul&#xE9;s dans l&#x26;#39;extrait. Fait important, les facteurs de broche qui ont &#xE9;t&#xE9; caract&#xE9;ris&#xE9;s dans l&#x26;#39;extrait d&#x26;#39;&#x153;ufs sont conserv&#xE9;s dans l&#x26;#39;assemblage du fuseau humaine. Dans cette revue, nous expliquons comment l&#x26;#39;extrait est pr&#xE9;par&#xE9; et manipul&#xE9; pour &#xE9;tudier la fonction des facteurs individuels dans l&#x26;#39;assemblage de la broche et du checkpoint du fuseau. En outre, nous fournissons des exemples de facteurs de broche plusieurs qui ont &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;finis fonctionnellement en utilisant le syst&#xE8;me extrait et discuter comment ces facteurs sont modifi&#xE9;s dans le cancer humain.

Apprendre A propos du cancer de grenouilles: Analyse des fuseaux mitotiques dans les extraits d&#x26;#39;&#x153;ufs de x&#xE9;nope

Die mitotische Spindel ist f&uuml;r richtig Segregieren Chromosomen w&auml;hrend der Zellteilung verantwortlich. St&ouml;rung dieses Prozesses f&uuml;hrt zu genomische Instabilit&auml;t in Form von Aneuploidie, die zu der Entstehung von Krebs beitragen k&ouml;nnen. Identifizierung und Charakterisierung von Faktoren, die verantwortlich f&uuml;r die Montage und Regulierung der Spindel sind daher von entscheidender Bedeutung. Nicht nur sind diese Faktoren oft in Krebs ver&auml;ndert, sondern sie dienen auch als m&ouml;gliche therapeutische Ziele. Xenopus-Ei-Extrakt ist ein leistungsf&auml;higes Werkzeug f&uuml;r das Studium der Spindel Montage und andere Zellzyklus-bezogene Ereignisse wegen, gr&ouml;&szlig;tenteils auf die Leichtigkeit, mit welcher, die Protein Funktion im Extrakt manipuliert werden kann. Die Spindel-Faktoren, die in Ei-Extrakt gepr&auml;gt haben sind vor allem in menschlichen Spindel Baugruppe konserviert. In diesem Bericht erkl&auml;ren wir, wie der Extrakt vorbereitet und manipuliert, um die Funktion der einzelnen Faktoren Spindel Montage-und der Spindel-Pr&uuml;fpunkt zu studieren. Zus&auml;tzlich bieten wir Beispiele f&uuml;r mehrere Spindel-Faktoren, die funktional mit dem Extrakt-System definiert wurden und diskutieren, wie diese Faktoren im menschlichen Krebs ver&auml;ndert werden.

Lernen &uuml;ber Krebs von Fr&ouml;schen: Analyse der mitotischen Spindeln in Xenopus-Ei-Extrakte.

Il fuso mitotico &egrave; responsabile della corretta separazione cromosomi durante la divisione cellulare. Interruzione di questo processo conduce alla instabilit&agrave; genomica in forma di aneuploidia, che pu&ograve; contribuire allo sviluppo del cancro. Pertanto, identificazione e caratterizzazione dei fattori che sono responsabili per il montaggio e la regolazione del mandrino sono cruciali. Non solo questi fattori sono spesso alterati nel cancro, ma servono anche come potenziali bersagli terapeutici. Estratto di uova di Xenopus &egrave; un potente strumento per lo studio di montaggio del mandrino e altri eventi correlati a ciclo cellulare dovuta, in gran parte, per la facilit&agrave; con cui la proteina pu&ograve; essere manipolato funzione nell&#39;estratto. Importante, i fattori di mandrino che sono stati caratterizzati in uovo Estratto sono conservati assieme mandrino umana. In questa recensione, vi spieghiamo come l&#39;estratto &egrave; preparato e manipolato per studiare la funzione dei singoli fattori nel montaggio del mandrino e il punto di arresto del mandrino. Inoltre, forniamo esempi di diversi fattori di mandrino che sono stati definiti funzionalmente utilizzando il sistema di estrarre e discutere di come questi fattori sono alterati nel cancro umano.

Imparando circa il cancro da rane: analisi di fusi mitotici in Xenopus uovo estratti.

&#x6709;&#x7CF8;&#x5206;&#x88C2;&#x7D21;&#x9318;&#x4F53;&#x304C;&#x6B63;&#x5E38;&#x306B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x6642;&#x306B;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x3092;&#x5206;&#x96E2;&#x3059;&#x308B;&#x8CAC;&#x4EFB;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306E;&#x4E2D;&#x65AD;&#x306F;&#x3001;&#x304C;&#x3093;&#x306E;&#x767A;&#x5C55;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x7570;&#x6570;&#x6027;&#x306E;&#x5F62;&#x3067;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x4E0D;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x3068;&#x30B9;&#x30D4;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EB;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3092;&#x62C5;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;&#x540C;&#x5B9A;&#x3068;&#x7279;&#x6027;&#x8A55;&#x4FA1;&#x304C;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x8981;&#x56E0;&#x306F;&#x3001;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x764C;&#x3067;&#x5909;&#x66F4;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x5F7C;&#x3089;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x6CBB;&#x7642;&#x6A19;&#x7684;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A2;&#x30D5;&#x30EA;&#x30AB;&#x30C4;&#x30E1;&#x30AC;&#x30A8;&#x30EB;&#x5375;&#x62BD;&#x51FA;&#x6DB2;&#x306F;&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x304C;&#x62BD;&#x51FA;&#x6DB2;&#x4E2D;&#x306B;&#x64CD;&#x4F5C;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x5BB9;&#x6613;&#x3055;&#x306B;&#x3001;&#x5927;&#x90E8;&#x5206;&#x306F;&#x3001;&#x30B9;&#x30D4;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EB;&#xB7;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x30FC;&#x3068;&#x4ED6;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x95A2;&#x9023;&#x306E;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x7B49;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3092;&#x7814;&#x7A76;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x306E;&#x306F;&#x3001;&#x5375;&#x62BD;&#x51FA;&#x6DB2;&#x4E2D;&#x306B;&#x7279;&#x5FB4;&#x3065;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30B9;&#x30D4;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EB;&#x306E;&#x8981;&#x56E0;&#x306F;&#x3001;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x30B9;&#x30D4;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EB;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x306B;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30EC;&#x30D3;&#x30E5;&#x30FC;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x62BD;&#x51FA;&#x7269;&#x3092;&#x8ABF;&#x88FD;&#x3057;&#x3001;&#x30B9;&#x30D4;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EB;&#xB7;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x30FC;&#x3068;&#x30B9;&#x30D4;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EB;&#x30C1;&#x30A7;&#x30C3;&#x30AF;&#x30DD;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x500B;&#x3005;&#x306E;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x7814;&#x7A76;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x64CD;&#x4F5C;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x62BD;&#x51FA;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x306B;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x30B9;&#x30D4;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EB;&#x306E;&#x8981;&#x56E0;&#x306E;&#x4F8B;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x8981;&#x56E0;&#x304C;&#x30D2;&#x30C8;&#x306E;&#x764C;&#x3067;&#x5909;&#x66F4;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30A2;&#x30D5;&#x30EA;&#x30AB;&#x30C4;&#x30E1;&#x30AC;&#x30A8;&#x30EB;&#x5375;&#x62BD;&#x51FA;&#x6DB2;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x6709;&#x7CF8;&#x5206;&#x88C2;&#x7D21;&#x9318;&#x4F53;&#x306E;&#x89E3;&#x6790;&#xFF1A;&#x30AB;&#x30A8;&#x30EB;&#x304B;&#x3089;&#x304C;&#x3093;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x5B66;&#x7FD2;

Mitotic &#xC2A4;&#xD540; &#xB4E4;&#xC740; &#xC62C;&#xBC14;&#xB974;&#xAC8C; &#xD734;&#xB300; &#xC804;&#xD654; &#xBD80;&#xBB38; &#xC911; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4;&#xB97C; &#xBD84;&#xB9AC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC758; &#xC911;&#xB2E8; &#xC774;&#xC218;&#xC131; &#xC554;&#xC758; &#xBC1C;&#xC804;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xD615;&#xD0DC;&#xB85C; genomic &#xBD88;&#xC548;&#xC815;&#xC131;&#xC73C;&#xB85C; &#xC774;&#xC5B4;&#xC9D1;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558; &#xACE0; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCC45;&#xC784;&#xC740; &#xC694;&#xC778;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131;&#xD654; &#xBC0F; &#xC2A4;&#xD540; &#xB4E4;&#xC758; &#xADDC;&#xC815;&#xC740; &#xC911;&#xC694; &#xD55C;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC694;&#xC778; &#xD754;&#xD788; &#xC554;, &#xBCC0;&#xACBD; &#xB418; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; &#xB610;&#xD55C; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xCE58;&#xB8CC; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Xenopus &#xB2EC;&#xAC40; &#xCD94;&#xCD9C; &#xBB3C;&#xC774; &#xC2A4;&#xD540; &#xB4E4; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC; &#xBC0F; &#xAE30;&#xD0C0; &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FC;&#xAE30; &#xAD00;&#xB828; &#xD589;&#xC0AC; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xACFC; &#xD568;&#xC218; &#xCD94;&#xCD9C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC870;&#xC791;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC6A9;&#xC774;&#xC131;&#xC5D0; &#xD070; &#xBD80;&#xBD84;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACF5;&#xBD80; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAC83;&#xC740;, &#xB2EC;&#xAC40; &#xCD94;&#xCD9C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD2B9;&#xC9D5; &#xC2A4;&#xD540; &#xB4E4; &#xC694;&#xC778; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC2A4;&#xD540; &#xB4E4; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xBCF4;&#xC874; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xAC80;&#xD1A0;&#xC5D0;&#xC11C;&#xB294; &#xCD94;&#xCD9C;&#xC744; &#xC900;&#xBE44; &#xD558; &#xACE0; &#xC870;&#xC791; &#xD558; &#xACE0; &#xC2A4;&#xD540; &#xB4E4; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC;&#xC640; &#xC2A4;&#xD540; &#xB4E4; &#xAC80;&#xC0AC;&#xC810;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xC694;&#xC778;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xCD94;&#xCD9C; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC815;&#xC758; &#xD558; &#xACE0; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC554;&#xC5D0; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC694;&#xC18C;&#xAC00; &#xBCC0;&#xACBD; &#xB418;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD558;&#xB294; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC2A4;&#xD540; &#xB4E4; &#xC694;&#xC778;&#xC758; &#xC608;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xAC1C;&#xAD6C;&#xB9AC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC554;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD559;&#xC2B5;: Xenopus mitotic &#xC2A4;&#xD540;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D; &#xB2EC;&#xAC40; &#xCD94;&#xCD9C; &#xBB3C;.

El huso mit&#xF3;tico es responsable de la correcta segregaci&#xF3;n de los cromosomas durante la divisi&#xF3;n celular. La interrupci&#xF3;n de este proceso conduce a la inestabilidad gen&#xF3;mica en la forma de aneuploid&#xED;a, que pueden contribuir al desarrollo de c&#xE1;ncer. Por lo tanto, la identificaci&#xF3;n y caracterizaci&#xF3;n de los factores que son responsables de la asamblea y la regulaci&#xF3;n del eje son cruciales. No s&#xF3;lo son estos factores a menudo alterado en el c&#xE1;ncer, pero tambi&#xE9;n sirven como posibles dianas terap&#xE9;uticas. Xenopus huevo extracto es una poderosa herramienta para el estudio conjunto del eje y relacionadas con el ciclo celular, debido otra eventos, en gran parte, a la facilidad con la que se puede manipular la funci&#xF3;n de prote&#xED;nas en el extracto. Es importante destacar que los factores de husillo que se han caracterizado en extracto de huevo se conservan en el montaje del cabezal humana. En esta revisi&#xF3;n, se explica c&#xF3;mo el extracto est&#xE1; preparado y manipulado para estudiar la funci&#xF3;n de los factores individuales en el conjunto del eje y el punto de control del husillo. Adem&#xE1;s, se proporcionan ejemplos de factores varios husillos que se han definido funcionalmente con el sistema de extracci&#xF3;n y discutir c&#xF3;mo estos factores se ven alterados en el c&#xE1;ncer humano.

Aprendiendo sobre el c&#xE1;ncer de las ranas: An&#xE1;lisis de los husos mit&#xF3;ticos en los extractos de Xenopus huevo

&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6709;&#x4E1D;&#x5206;&#x88C2;&#xFF0C;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x6838;&#x5B54;&#x62C6;&#x5378;&#x548C; nucleoporins &#x8D8A;&#x6765;&#x8D8A;&#x591A;&#x5730;&#x88AB;&#x8BC1;&#x660E;&#x6709;&#x5206;&#x88C2;&#x529F;&#x80FD;&#xFF0C;&#x5F53;&#x4ECE;&#x6BDB;&#x5B54;&#x91CA;&#x653E;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x627E;&#x5230; nucleoporin Nup98 &#x7EBA;&#x9524;&#x901A;&#x8FC7;&#x5411;&#x5927;&#x4F1A;&#x5FAE;&#x7BA1;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x89C4;&#x5F8B;&#x7684;&#x8D21;&#x732E;&#x3002;&#x5F53;&#x6DFB;&#x52A0;&#x5230;&#x975E;&#x6D32;&#x722A;&#x87FE;&#x63D0;&#x53D6;&#x4E3B;&#x8F74;&#x88C5;&#x914D;&#x68C0;&#x6D4B;&#xFF0C;C &#x672B;&#x7AEF;&#x57DF;&#x7684; Nup98 &#x523A;&#x6FC0;&#x5FAE;&#x7BA1;&#x7684;&#x65E0;&#x8282;&#x5236;&#x7684;&#x589E;&#x957F;&#x3002;&#x76F8;&#x53CD;&#xFF0C;&#x6291;&#x5236;&#x6216;&#x635F;&#x8017;&#x7684; Nup98 &#x5BFC;&#x81F4;&#x5F62;&#x6210;&#x7A33;&#x5B9A;&#x7684;&#x5355;&#x6781;&#x5FC3;&#x8F74;&#x3002;&#x7531;&#x53E6;&#x5916;&#x7684;&#x7EAF;&#x51C0;&#x3001; &#x91CD;&#x7EC4;&#x7684; Nup98 C &#x603B;&#x7AD9;&#x6062;&#x590D;&#x4E3B;&#x8F74;&#x4E24;&#x6781;&#x5316;&#x3002;&#x6700;&#x5C11;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x533A;&#x57DF;&#x7684; Nup98 &#x5BF9;&#x5E94;&#x4E8E;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x4EE5;&#x524D;&#x4E3A;&#x7279;&#x5F81;&#x7684;&#x51FD;&#x6570;&#x7684; C &#x672B;&#x7AEF;&#x57DF;&#x7684;&#x4E00;&#x90E8;&#x5206;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FD9;&#x4E00;&#x533A;&#x57DF;&#x7684; Nup98 &#x548C;&#x65E2;&#x662F;&#x7D2B;&#x6749;&#x9187;&#x7A33;&#x5B9A;&#x5FAE;&#x7BA1;&#x603B;&#x7AD9; C &#x548C;&#x9A71;&#x52A8;&#x5FAE;&#x7BA1;&#x89E3;&#x805A;&#x6709;&#x4E1D;&#x5206;&#x88C2;&#x7740;&#x4E1D;&#x7C92;&#x76F8;&#x5173;&#x86CB;&#x767D; (MCAK) &#x4E4B;&#x95F4;&#x663E;&#x793A;&#x534F;&#x4F1A;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BC1;&#x660E;&#x8FD9;&#x4E2A;&#x57DF;&#x540D;&#x7684; Nup98 &#x6291;&#x5236;&#x4F53;&#x5916; MCAK &#x964D;&#x89E3;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x652F;&#x6301;&#x7684; Nup98 &#x5FAE;&#x7BA1;&#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#x548C;&#x654C;&#x89C6; MCAK &#x6D3B;&#x52A8;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x53CC;&#x4E3B;&#x8F74;&#x88C5;&#x914D;&#x6A21;&#x578B;&#x3002;

Nup98 &#x8C03;&#x8282;&#x4E24;&#x6781;&#x4E3B;&#x8F74;&#x5927;&#x4F1A;&#x901A;&#x8FC7;&#x4E0E;&#x5FAE;&#x7BA1;&#x548C;&#x53CD;&#x5BF9;&#x6D3E; MCAK &#x5173;&#x8054;&#x3002;

During mitosis, the nuclear pore complex is disassembled and, increasingly, nucleoporins are proving to have mitotic functions when released from the pore. We find a contribution of the nucleoporin Nup98 to mitotic spindle assembly through regulation of microtubule dynamics. When added to Xenopus extract spindle assembly assays, the C-terminal domain of Nup98 stimulates uncontrolled growth of microtubules. Conversely, inhibition or depletion of Nup98 leads to formation of stable monopolar spindles. Spindle bipolarity is restored by addition of purified, recombinant Nup98 C-terminus. The minimal required region of Nup98 corresponds to a portion of the C-terminal domain lacking a previously characterized function. We show association between this region of the C-terminus of Nup98 and both Taxol-stabilized microtubules and the microtubule-depolymerizing mitotic centromere-associated kinesin (MCAK). Importantly, we demonstrate that this domain of Nup98 inhibits MCAK depolymerization activity in vitro. These data support a model in which Nup98 interacts with microtubules and antagonizes MCAK activity, thus promoting bipolar spindle assembly.

Nup98 regulates bipolar spindle assembly through association with microtubules and opposition of MCAK.

Au cours de la mitose, le complexe du pore nucl&#xE9;aire est d&#xE9;mont&#xE9; et, de plus en plus, nucl&#xE9;oporines se r&#xE9;v&#xE8;lent avoir des fonctions mitotiques lorsqu&#x26;#39;il est lib&#xE9;r&#xE9; du pore. Nous trouvons une contribution de l&#x26;#39;nucl&#xE9;oporine NUP98 &#xE0; l&#x26;#39;assemblage du fuseau mitotique par la r&#xE9;glementation de la dynamique des microtubules. Lorsqu&#x26;#39;il est ajout&#xE9; &#xE0; l&#x26;#39;extrait de Xenopus essais d&#x26;#39;assemblage de broche, le domaine C-terminal de NUP98 stimule la croissance incontr&#xF4;l&#xE9;e des microtubules. A l&#x26;#39;inverse, l&#x26;#39;inhibition ou l&#x26;#39;&#xE9;puisement des NUP98 conduit &#xE0; la formation des monopolaire stable broches. Bipolarit&#xE9; broche est restaur&#xE9; par addition d&#x26;#39;eau purifi&#xE9;e, recombinante NUP98 C-terminale. La r&#xE9;gion minimale requise de NUP98 correspond &#xE0; une portion du domaine C-terminal manque une fonction pr&#xE9;c&#xE9;demment caract&#xE9;ris&#xE9;. Nous montrons l&#x26;#39;association entre cette r&#xE9;gion de l&#x26;#39;extr&#xE9;mit&#xE9; C-terminale de la NUP98 et les deux Taxol-stabilis&#xE9;es microtubules et la mitotique microtubules d&#xE9;polym&#xE9;risation centrom&#xE8;re kin&#xE9;sine associ&#xE9;e (MCAK). Il est important, nous d&#xE9;montrons que ce domaine de NUP98 inhibe l&#x26;#39;activit&#xE9; de d&#xE9;polym&#xE9;risation MCAK in vitro. Ces donn&#xE9;es appuient un mod&#xE8;le dans lequel NUP98 interagit avec les microtubules et antagonise l&#x26;#39;activit&#xE9; MCAK, favorisant ainsi l&#x26;#39;assemblage du fuseau bipolaire.

NUP98 R&#xE9;gule Assembl&#xE9;e fuseau bipolaire par l&#x26;#39;association avec les microtubules et l&#x26;#39;opposition de MCAK

W&auml;hrend der Mitose die nukleare Pore Komplex ist demontiert und in zunehmendem Ma&szlig;e Nucleoporins unter Beweis stellen mitotische Funktionen als aus der Pore freigegeben haben. Wir finden einen Beitrag von der Nucleoporin Nup98 mitotische Spindel Assembly durch Regulierung des Microtubule-Dynamik. Wenn Xenopus Extrakt Spindel Baugruppe Proben hinzugef&uuml;gt, stimuliert die C-terminale Dom&auml;ne des Nup98 unkontrolliertes Wachstum der Mikrotubuli. Umgekehrt f&uuml;hrt Hemmung oder Ersch&ouml;pfung der Nup98 zur Bildung von stabilen Monopolare Spindeln. Spindel Bipolarit&auml;t wird durch Zusatz von gereinigtem, rekombinante Nup98 C-Terminus wiederhergestellt. Die minimale erforderliche Region Nup98 entspricht einem Teil der C-terminalen Dom&auml;ne fehlt eine zuvor gekennzeichnete Funktion. Wir zeigen die Vereinigung zwischen dieser Region von der C-Terminus von Nup98 und sowohl Taxol-stabilisiert Mikrotubuli und die Microtubule-depolymerizing mitotische Zentromere-assoziierte Kinesin (MCAK). Wichtig ist, beweisen wir, dass diese Dom&auml;ne des Nup98 MCAK Depolymerisation Aktivit&auml;t in vitro hemmt. Diese Daten unterst&uuml;tzen eine Modell in der Nup98 interagiert mit Mikrotubuli und antagonizes MCAK Aktivit&auml;t, um bipolare Spindel Baugruppe zu f&ouml;rdern.

Nup98 regelt bipolar Spindel Montage durch Verbindung mit Mikrotubuli und Opposition von MCAK.

Durante la mitosi, il poro nucleare complesso &egrave; smontato e, sempre pi&ugrave;, nucleoporins stanno dimostrando di avere funzioni mitotica quando rilasciato dal poro. Troviamo un contributo di nucleoporin Nup98 all&#39;Assemblea mitotico attraverso la regolazione della dinamica dei microtubuli. Quando aggiunto a Xenopus estrarre mandrino Assemblea dosaggi, il dominio C-terminale di Nup98 stimola la crescita incontrollata dei microtubuli. Al contrario, l&#39;inibizione o la deplezione di Nup98 porta alla formazione di mandrini monopolari stabili. Mandrino bipolarit&agrave; &egrave; ripristinato tramite l&#39;aggiunta di purificato, ricombinante Nup98 C-terminale. Regione minima richiesta di Nup98 corrisponde ad una parte del dominio C-terminale privo di una funzione precedentemente caratterizzata. Mostriamo associazione tra questa regione del C-terminale di Nup98 e sia stabilizzato Taxol microtubuli e il microtubule-depolymerizing mitotica associato al centromero chinesina (MCAK). Soprattutto, ci dimostrano che questo dominio di Nup98 inibisce l&#39;attivit&agrave; di depolimerizzazione MCAK in vitro. Questi dati supportano un modello in cui Nup98 interagisce con i microtubuli e antagonizza attivit&agrave; MCAK, favorendo in tal modo montaggio mandrino bipolare.

Nup98 regola assembly bipolare mandrino mediante associazione con microtubuli e opposizione di MCAK.

&#x6709;&#x7CF8;&#x5206;&#x88C2;&#x6642;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x6838;&#x819C;&#x5B54;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x304C;&#x5206;&#x89E3;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x304A;&#x308A;&#x3001;&#x7D30;&#x5B54;&#x304B;&#x3089;&#x653E;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x306B;&#x3001;&#x307E;&#x3059;&#x307E;&#x3059;&#x3001;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30DD;&#x30EA;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x5206;&#x88C2;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x8A3C;&#x660E;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x6709;&#x7CF8;&#x5206;&#x88C2;&#x7D21;&#x9318;&#x4F53;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x306B;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30DD;&#x30EA;&#x30F3;NUP98&#x306E;&#x8CA2;&#x732E;&#x3092;&#x898B;&#x3064;&#x3051;&#x308B;&#x3002;&#x30A2;&#x30D5;&#x30EA;&#x30AB;&#x30C4;&#x30E1;&#x30AC;&#x30A8;&#x30EB;&#x306E;&#x62BD;&#x51FA;&#x30B9;&#x30D4;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EB;&#xB7;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306B;&#x6DFB;&#x52A0;&#x3057;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x3001;NUP98&#x306E;C&#x672B;&#x7AEF;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306F;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x306E;&#x5236;&#x5FA1;&#x4E0D;&#x80FD;&#x306A;&#x5897;&#x6B96;&#x3092;&#x523A;&#x6FC0;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x9006;&#x306B;&#x3001;NUP98&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x6E1B;&#x5C11;&#x306F;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x5358;&#x6975;&#x7D21;&#x9318;&#x4F53;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x3002;&#x30B9;&#x30D4;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EB;&#x4E21;&#x6975;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x7CBE;&#x88FD;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;NUP98 C&#x672B;&#x7AEF;&#x3092;&#x6DFB;&#x52A0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5FA9;&#x5143;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4EE5;&#x524D;&#x306B;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x6B20;&#x3044;&#x3066;&#x3044;&#x308B;C&#x672B;&#x7AEF;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x90E8;&#x5206;&#x306B;NUP98&#x306B;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3057;&#x3001;&#x6700;&#x5C0F;&#x9650;&#x306E;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x9818;&#x57DF;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;NUP98&#x306E;C&#x672B;&#x7AEF;&#x9818;&#x57DF;&#x3068;&#x30BF;&#x30AD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30EB;&#x5B89;&#x5B9A;&#x5316;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x3068;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x8131;&#x91CD;&#x5408;&#x5206;&#x88C2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30E1;&#x30A2;&#x95A2;&#x9023;&#x30AD;&#x30CD;&#x30B7;&#x30F3;&#xFF08;MCAK&#xFF09;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x95A2;&#x9023;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x3001;NUP98&#x3053;&#x306E;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;in vitro&#x3067;MCAK&#x8131;&#x91CD;&#x5408;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;NUP98&#x304C;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x3068;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3057;&#x3001;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x30D0;&#x30A4;&#x30DD;&#x30FC;&#x30E9;&#x30B9;&#x30D4;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EB;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3057;&#x3001;MCAK&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x62EE;&#x6297;&#x3059;&#x308B;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

NUP98&#x306F;&#x3001;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x3068;MCAK&#x306E;&#x91CE;&#x515A;&#x3068;&#x306E;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x3001;&#x30D0;&#x30A4;&#x30DD;&#x30FC;&#x30E9;&#xB7;&#x30B9;&#x30D4;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EB;&#xB7;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x30FC;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;

&#xC720;&#xC0AC; &#xBD84;&#xC5F4;, &#xC911; &#xD575; &#xAE30; &#xACF5; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xBD84;&#xD574; &#xD558; &#xACE0; &#xAE30; &#xACF5;&#xC5D0;&#xC11C; mitotic &#xD568;&#xC218;&#xB97C; nucleoporins&#xB294; &#xC99D;&#xBA85; &#xD558;&#xB294; &#xC810;&#xC810; &#xB354;. Nucleoporin Nup98 microtubule &#xC5ED;&#xD559;&#xC758; &#xADDC;&#xC81C;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; mitotic &#xC2A4;&#xD540; &#xB4E4; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC;&#xB97C; &#xCC3E;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Xenopus &#xCD94;&#xCD9C; &#xC2A4;&#xD540; &#xB4E4; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xCD94;&#xAC00; &#xB420; &#xB54C; nup98&#xC758; C-&#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; microtubules&#xC758; &#xD1B5;&#xC81C; &#xC131;&#xC7A5;&#xC744; &#xC790;&#xADF9;. &#xBC18;&#xB300;&#xB85C;, &#xC5B5;&#xC81C; &#xB610;&#xB294; nup98&#xC758; &#xACE0;&#xAC08; &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC778; monopolar &#xC2A4;&#xD540; &#xB4E4;&#xC758; &#xD615;&#xC131;&#xC5D0; &#xC774;&#xB974;&#xAC8C;. &#xC2A4;&#xD540; &#xB4E4; bipolarity &#xC815;&#xC81C;, &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; Nup98 C-&#xB9D0;&#xB2E8;&#xC758; &#xCD94;&#xAC00; &#xD558; &#xC5EC; &#xBCF5;&#xC6D0; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xD2B9;&#xC9D5;&#xC774; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBD80;&#xC871; &#xD55C; C &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xBD80;&#xBD84;&#xC5D0; &#xD574;&#xB2F9; &#xD558;&#xB294; nup98&#xC758; &#xCD5C;&#xC18C;&#xD55C;&#xC758; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xC9C0;&#xC5ED;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC0AC;&#xC774; Taxol &#xC548;&#xC815; microtubules &#xBAA8;&#xB450;&#xC640; nup98&#xC758; C-&#xB9D0;&#xB2E8; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xACFC; microtubule depolymerizing mitotic centromere &#xAD00;&#xB828; kinesin (MCAK)&#xC774; &#xD611;&#xD68C;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAC83;&#xC740;,&#xC774; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; Nup98 MCAK depolymerization &#xD65C;&#xB3D9; &#xCCB4; &#xC678; &#xC5B5;&#xC81C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130; Nup98 microtubules&#xC640; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558; &#xACE0; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xC591;&#xADF9; &#xC2A4;&#xD540; &#xB4E4; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC; &#xD64D;&#xBCF4; MCAK &#xD65C;&#xB3D9; &#xBC18;&#xAC10; &#xBAA8;&#xB378; &#xC9C0;&#xC6D0;.

Nup98 &#xBC14;&#xC774; &#xD3F4;&#xB77C; &#xC2A4;&#xD540; &#xB4E4; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC; microtubules&#xC640; MCAK&#xC758; &#xBC18;&#xB300; &#xD611;&#xD68C;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC870;&#xC808; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Durante la mitosis, el complejo de poros nucleares se desmonta y, cada vez m&#xE1;s, nucleoporinas est&#xE1;n demostrando tener las funciones mit&#xF3;ticas cuando se libera de los poros. Nos encontramos con un aporte de la nucleoporin Nup98 de reuni&#xF3;n huso mit&#xF3;tico a trav&#xE9;s de la regulaci&#xF3;n de la din&#xE1;mica de los microt&#xFA;bulos. Cuando se a&#xF1;ade a los ensayos de Xenopus extracto de montaje del cabezal, el dominio C-terminal de Nup98 estimula el crecimiento incontrolado de los microt&#xFA;bulos. A la inversa, la inhibici&#xF3;n o el agotamiento de Nup98 conduce a la formaci&#xF3;n de monopolar estable husos. Bipolaridad del husillo se restaura mediante la adici&#xF3;n de purificada, recombinante Nup98 C-terminal. La regi&#xF3;n m&#xED;nima requerida de Nup98 corresponde a una porci&#xF3;n del dominio C-terminal carente de una funci&#xF3;n previamente caracterizados. Se demuestra la asociaci&#xF3;n entre esta regi&#xF3;n de la C-terminal de Nup98 y ambos microt&#xFA;bulos Taxol estabilizado y la mitosis microt&#xFA;bulos despolimerizante centr&#xF3;mero asociado kinesin (MCAK). Es importante destacar que hemos demostrado que este dominio de Nup98 inhibe la actividad de MCAK despolimerizaci&#xF3;n in vitro. Estos datos apoyan un modelo en el que interact&#xFA;a con los microt&#xFA;bulos Nup98 y antagoniza la actividad MCAK, promoviendo as&#xED; el montaje del eje bipolar.

Marie Cross

Department of Cell Biology

Emory University

In Vitro Nuclear Assembly Using Fractionated Xenopus Egg Extracts

Marie Cross

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Emory University

In Vitro Nuclear Assembly Using Fractionated Xenopus Egg Extracts

Department of Cell Biology